MEDIO DE CULTIVO UTILIZANDO RESIDUOS SOLIDOS PARA EL CRECIMIENTO DE UNA BACTERIA NATIVA CON POTENCIAL BIOFERTILIZANTE

Cecilia Lara Mantilla , Liliana Pahola Garca Tmara, Luis E Oviedo Zumaque Instituto de Biotecnologa, Universidad Nacional de Colombia, Sede Bogot
Mara Alejandra Seplveda E Andrs Felipe Cabeza

TEMARIO
Objetivos Introduccin Materiales y Mtodos Anlisis Resultados y Discusin Conclusiones

OBJETIVOS
El objetivo de esta investigacin es aprovechar los residuos orgnicos (repollo, lechuga y cebolln) del mercado del sur de la ciudad de Montera (Crdoba, Colombia), para la elaboracin de un biopreparado que incluye una cepa nativa, Azotobacter A15M2G

Es de inters disminuir la acumulacin indebida residuos-slidos vegetales, buscando travs procesos biotecnolgicos alternativas viables comerciales de uso agrcola sin contaminar ambiente.

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INTRODUCCION
La basura es todo aquello que se descarta luego de que un producto haya cumplido su funcin, mal manejada tiene efectos nocivos en el ambiente y en la salud.

Durante el mes de enero de 2009 se report una produccin de 22 toneladas diarias de residuos slidos, representados principalmente por materia orgnica fcilmente biodegradable.

Estos desechos son compactados y ubicados directamente en un relleno sanitario sin ningn tipo de separacin o clasificacin que permita su reciclaje

En la actualidad, en numerosos pases la problemtica que gira en torno al manejo de los desechos orgnicos se est re-direccionando al aprovechamiento agrcola de los mismos

En nuestro pas existe un referente legal para implementar sistemas de aprovechamiento de residuos y produccin de bioproductos que no deterioren el ambiente.

El Decreto 2811 de 1974, artculo 34 (Constitucin Poltica de Colombia de 1991), establece que para el manejo de los residuos slidos se utilizarn los mejores mtodos, de acuerdo con los avances de la ciencia y tecnologa, para recoleccin, tratamiento, procesamiento de estos.

En la actualidad existe la tendencia mundial hacia la agricultura sostenible, surge el inters en aprovechar los residuos slidos vegetales en conjunto con una bacteria nativa del gnero Azotobacter sp

Azotobacter Es un gnero de bacterias usualmente mtiles, ovales o esfricas, que forman quistes de pared gruesa. tiene aplicaciones biotecnolgicas. Azotobacter es una bacteria Gram-negativa.

 Azotobacter sp, demostr ser eficiente en la fijacin biolgica del nitrgeno y produccin de AIA para posterior uso como biofertilizante

MATERIALES Y MTODOS
Materia Prima
Se seleccionaron desechos de Brassica Oleracea Lactusa sativa y Allium fistulosum, teniendo en cuenta que son los residuos vegetales que generan mayor volumen y su descomposicin es ms rpida

Preparacin de los Medios de Cultivo

En la elaboracin de los medios de cultivo lquidos se realiz pesaje, picado y licuado en un volumen adecuado de agua destilada hasta obtener las concentraciones de 25, 50 y 75% p/v;

Para la preparacin de los medios de cultivos slidos se realiz el mismo procedimiento adicionando agaragar en cantidad apropiada de acuerdo con el producto comercial (15 g/L).

Microorganismo Utilizado
Se utiliz una cepa nativa del gnero Azotobacter A15M2G, aislada de la regin de Crdoba (Colombia), que demostr ser eficiente en su capacidad fijadora de nitrgeno y productora de cido Indol Actico (AIA)

Evaluacin del Crecimiento Microbiano

Para realizar el ensayo se tom un inculo de 3 x 107 UFC de la cepa nativa mantenida en medio Burks; la evaluacin del crecimiento de la bacteria a las diferentes concentraciones del medio de cultivo (25, 50 y 75 % p/v

Se llev a cabo a travs de: a) observacin macroscpicas (forma, elevacin, superficie, opacidad) b) Observacin microscpica (coloraciones clsicas) c) Terminacin del crecimiento por diluciones decimales seriadas y conteo de UFC en placa

Anlisis
El medio de cultivo de residuos vegetales que mostr mayor crecimiento microbiano fue esterilizado y posteriormente analizado qumicamente determinndose los siguientes parmetros:

Carbohidratos, Nitrgeno, Calcio (Ca) y Magnesio (Mg), cenizas, humedad y pH los elementos azufre (S), fsforo (P), potasio (K), sodio (Na), cobre (Cu) y hierro (Fe) fueron determinados por absorcin atmica

Ensayo de Viabilidad Microbiana

Para observar la viabilidad del microorganismo diaztrofo en el medio de cultivo a partir de la concentracin de residuos-slidos vegetales en la que se observ mayor crecimiento se realiz un bioensayo que consisti en evaluar la estabilidad de una concentracin conocida del microorganismo (3 x 107 UFC)

Resultados y Discusin
Evaluacin del crecimiento microbiano
Se observ que un aumento en la concentracin del sustrato produjo una disminucin en el crecimiento de la bacteria

Caractersticas bacterias en medio de cultivo a partir de residuos-slidos vegetales al 25% p/v(MRSV-25%) - Caractersticas redondeadas, -Bordes definidos -Coloracin beige -Gram Negativas -Forma bacilar ovoide -Crecimiento: 10^8(UFC/ml)

-Colonias Pequeas -Bordes definidos -Coloracin Amarilla -Gram Negativas -Crecimiento: 10^6 - Para MRSV-75% resultados similares

Curva de crecimiento de la bacteria en el MRSV25%

Curva de Crecimiento Azotobacter A15M2G. - Medio residuosSlidos Vegetales al 25% p/v.
10.00 9.00 8.00 7.00 6.00 5.00 0 20 40 Tiempo (horas) 60 80 Log 10 (UFC/ml)

Caracterizacin qumica del MRSV-25%

Determinacin Cenizas Protena Carbohidratos Humedad Azufre Fsforo Calcio Magnesio Potasio Sodio Zinc Manganeso Valor 0,03574 % 0,4044% 0,9792 g/l 99,3955% 6,93 mg/l 0,170 mg/l 28,056 mg/l 17,017 mg/l 409,2 mg/l 14 mg/l 0,1 mg/l 0,2 mg/l

El anlisis qumico demostr que el MRSV-25% posee los nutrientes apropiados para el desarrollo y crecimiento de Azotobacter A15M2G Carbohidratos: Energa Protenas: Biosntesis de Protenas Mg y Ca: Metabolismo K y P: Crecimiento Bacteriano

El potasio fue el elemento que se encontr en mayor cantidad (409,2 mg/l),tiene como funcin, aumento del ARN e incremento de la velocidad de crecimiento; en los cultivos la presencia del K otorga a las plantas gran vigor y resistencia contra las enfermedades, ayuda a la produccin de protena, aumenta el tamao de las semillas, mejora la calidad de los frutos,

El anlisis qumico demostr que el MRSV-25% posee los nutrientes apropiados para el desarrollo y crecimiento de Azotobacter A15M2G, si se tiene en cuenta que las bacterias del gnero Azotobacter sp.

La multiplicacin de Azotobacter sp est muy influenciada por la presencia de fsforo y potasio en el medio; el hierro es un cofactor de la enzima nitrogenasa

Evaluacin de la capacidad productora de auxina y fijadora de nitrgeno

Se evalu la capacidad productora de la Azotobacter A15M2G en el MRSV-25 de AIA y fijadora de nitrgeno obtenindose los valores de 13,5837 mg/l y 4,8725 mg/l respectivamente.

Estos datos demuestran que el medio a partir de residuos vegetales es favorable para mantener las caractersticas diaztrofas y productoras de auxina, conservando el potencial como biofertilizante.

cido Indol Actico (AIA)

Auxina ms ampliamente distribuida en las plantas. Las Auxinas son un grupo de fitohormonas que funcionan como reguladoras del crecimiento vegetal. -Aumento en la respiracin celular -Crecimiento en las races -El incremento en la divisin celular

Fijacin de Nitrgeno
Las formas inicas que una raz puede absorber son el nitrato (NO3) y el amonio (NH4).

Los procesos naturales de fijacin biolgica del N2 (FBN) juegan un papel importante en la activacin de los sistemas agrcolas sustentables

Se espera que el conjuntoMRSV-25%-bacteria, supla en forma parcial o total las deficiencias de elementos tan importantes para las plantas como son el nitrgeno y el potasio

Ensayo de Viabilidad
El ensayo de viabilidad demostr que la poblacin bacteriana se mantuvo constante a travs del tiempo (60 das) Los resultados de la investigacin mostraron que los residuos-slidos vegetales poseen los nutrientes necesarios para el crecimiento de la bacteria

Aprovechamiento Teniendo en cuenta la gran produccin de residuosslidos a nivel de la plaza de mercado local una opcin de manejo es el uso de estos residuos conjuntamente con microorganismos para elaborar productos de origen agrcola.

Conclusiones
Es posible dar un valor agregado a los residuosslidos vegetales generados en la plaza de mercado, utilizndolos conjuntamente con la bacteria diaztrofa productora de AIA
Azotobacter sp para el desarrollo de un biopreparado de inters agrcola, de bajo costo y que contribuya a una produccin mas limpia

 Los datos obtenidos constituyen un aporte muy importante debido a que la produccin de desechos de mercados va en constante aumento por el crecimiento demogrfico, agudizando el problema de su correcta disposicin y la contaminacin ambiental