Objetivo: Especificar las herramientas que utiliza la histologa para el estudio ultraestructural de tejidos y de la clula como unidad morfolgica

y funcional del organismo Contenido: Histologa. Concepto y aplicaciones Cientficas y clnicas. Tcnica Histolgica. Etapas en la preparacin de tejidos para su estudio al microscopio ptico y electrnico. Histoqumica y Citoqumica

Microscopa. Tipos de Microscopios y aplicacin. Microscopio ptico: partes y funcionamiento. Microscopio electrnico: de transmisin y de barrido.

Etimolgicamente: histo= tejido

logos: estudio

Es la rama de la biologa encargada del anlisis microscpico de la anatoma celular y tisular de los tejidos biolgicos. Marcello Malpighi es reconocido como el fundador de la Histologa Las primeras investigaciones histolgicas se hicieron en el siglo XVII gracias a la invencin del microscopio ptico por Antonio Van Leeuwenhoek

Es el estudio de la forma y la estructura de los organismos vivos organizados Anatoma Macroscpica: estudio de las estructuras observables a simple vista Anatoma Microscpica: es aquella que requiere de auxiliares pticos Qu es la Citologa? o biologa celular es una disciplina acadmica que se encarga del estudio de las clulas en cuanto a lo que respecta a las propiedades, estructura, funciones, organelos que contienen, su interaccin con el ambiente y su ciclo vital.

Clula: Unidad morfolgica y funcional de todo ser vivo. Es el elemento de menor tamao que puede considerarse vivo. Tejido: agrupacin de clulas con la misma funcin. rgano: unidad funcional mayor compuesto por distintos tipos de tejido Sistema de rganos: conjunto de rganos con funciones relacionadas. La Histologa representa un nexo de unin entre la bioqumica, la fisiologa, la anatoma, la gentica, la clnica y la patologa.

Obtencin de la muestra de material humano: El material humano puede provenir de tres fuentes: Las necropsias, las biopsias y las piezas operadas. De estas, slo la primera puede darnos material normal; las dos ltimas proporcionan tejidos patolgicos. -Necropsias: son las piezas que se obtienen de un cadver. Para histologa normal es necesario que se trate de un cadver fresco y que no haya sido atacado por ninguna lesin, por lo menos el rgano que se quiere estudiar.

Biopsias: son trozos de tejido que se obtienen de un sujeto con vida con el objeto de estudiarlos al microscopio y efectuar un diagnstico histopatolgico.

Piezas operadas: los tejidos que han sido extrados de las intervenciones quirrgicas, generalmente tumores u rganos inflamados, tambin pueden darnos material de investigacin.

1.- Obtencin de la muestra: mediante extirpacin de pequeos fragmentos de tejido (humano o animal)
2.- Fijacin: Su propsito es mantener la morfologa del tejido lo ms parecida posible a lo que sta tena antes de hacer la extraccin. (formaldehdo al 37%) Mtodos: Qumico inmersin Fsico: congelacin La formalina no preserva todos los componentes de la clula y los tejidos

3.- Deshidratacin: proceso por el cual se elimina completamente el agua de la muestra para que se pueda embeber adecuadamente el tejido en aquellos medios de inclusin que no sean hidrosolubles. (Alcohol etilco en concentraciones crecientes)
4.- Aclaramiento: proceso por el cual se consigue la sustitucin del agente deshidratante por una sustancia miscible con el medio de inclusin. (Xilol) 5.- Infiltracin (Impregnacin) Proceso que tiene por objeto rellenar o infiltrar completamente la muestra histolgica con el medio que se va a usar para la imbibicin del tejido. (Baos sucesivos de parafina fundida)

6.- Encastramiento del tejido y confeccin de los bloques: consiste en la obtencin de un bloque slido de tejido ms medio de inclusin, mediante el enfriamiento lento a 10-15C: El bloque slido se llama TACO
7.- Orientacin de la pieza: para realizar el corte del tejido se monta el taco en el microtomo (aparato equipado con una hoja de acero) y se obtienen cortes sumamente delgados cuyo grosor para microscopa ptica vara entre 5 10 micrmetros 1milmetro = 1000 micrmetros

Fundamentos Generales de la Preparacin Histolgica de los tejidos 8.- Montaje: los cortes se colocan sobre lminas portaobjetos cubiertos previamente con capa de albmina o gelatina 9.- Aclaramiento: Extraccin de la parafina con xilol 10.- Rehidratacin: desplazar el xilol por agua. Alcohol con agua en concentraciones decrecientes 11.- Tincin o Coloracin: con colorantes histolgicos en su mayora en solucin acuosa

Fundamentos Generales de la Preparacin Histolgica de los tejidos

Reduccin de la pieza

Fijacin de la muestra

Introduccin en cassette de deshidratacin

Deshidratacin en alcoholes sucesivos

Penetracin de la parafina 56-58C

Barras de Leuckart

Fundamentos Generales de la Preparacin Histolgica de los tejidos

Fractura del taco para cortar

Corte en microtomo

Bateria de coloracin H&E

Correlacin Clnica: Biopsias por congelacin Evaluar de inmediato el tejido obtenido

durante el acto quirrgico y el diagnstico instantneo determina el paso siguiente en la ciruga Para identificar hallazgos intraoperatorios inesperados Para saber si se ha extirpado toda la masa patolgica y si el borde de la reseccin quirrgica est libre de tejido enfermo Se congelan fragmentos de tejido usando anhdrido carbnico comprimido o un lquido fro (isopentano) a una temp de -50C Corte del tejido congelado en un criostato (cmara refrigerada que contiene un microtomo) Montaje del corte en un portaobjetos Tincin del corte: HE, azul de metileno y PAS El proceso puede tardar 10 minutos y el resultado se comunica al cirujano inmediatamente

Histoqumica y Citoqumica
Se ocupan de investigar la actividad qumica que tiene lugar en las clulas y los tejidos. Se fundamentan en: La unin especfica de un colorante El uso de anticuerpos marcados con un colorante fluorescente La actividad enzimtica inherente de un elemento constitutivo de las clulas

Composicin qumica de las muestras histolgicas

La composicin qumica de un tejido listo para una coloracin de rutina
es difrente de la del tejido vivo Los componentes que perduran son molculas grandes que no se disuelven con facilidad con el fijador. Entre ellas: nucleoprotenas, protenas intracelulares del citoesqueleto, protenas extracelulares, complejos de fosfolpidos y protenas (o carbohidratos) en las membranas.

Composicin qumica de las muestras histolgicas

Muchos componentes de los tejidos desaparecen durante la preparacin
de los cortes teidos con H-E Los solventes disuelven los lpidos neutros Las macromolculas durante la fijacin de rutina son: -Glucgeno, Proteoglucanos y glucosaminoglucanos Los componentes solubles, los iones y las molculas pequeas tambin desaparecen durante la preparacin de las muestras includas en parafina: glucosa, sodio, cloro y sustancias similares. Estos iones y pequeas molculas solubles no constituyen elementos morfognicos hsticos sino que participan en los procesos de sntesis o en las reacciones celulares.

Coloraciones Utilizadas en Microscopa ptica

Fundamento: Radica en la propiedad que tienen todos los tejidos para incorporar y fijar de modo variable diversas sustancias Coloreadas. Segn su afinidad tisular: Colorantes Bsicos: poseen una carga global positiva (catinicos), reaccionan con los componentes aninicos de las clulas. Ej. Hematoxilina Colorantes cidos: poseen una carga global negativa (aninicos), reaccionan con los componentes catinicos de las clulas. Ej. Eosina Colorantes neutros: su carga global es neutra. Propiedad de colorear junta o separadamente diversas estructuras. Ej. Giemsa Colorantes metacromticos: colorantes bsicos. Producen tonos de color totalmente distintos al que se espera por el colorante empleado Colorantes Indiferentes: no poseen carcter cido, bsico o salino definido. Colorean mediante impregnacin.

Coloraciones Utilizadas en Microscopa ptica

Hematoxilina-Eosina (HE): utiliza dos tipos de colorantes. La hematoxilina que es un colorante bsico, colorea los componentes cidos de la clula (ncleo) de color morado; y la eosina que es un colorante cido se une a estructuras bsicas de la clula (citoplasma) otorgndole una tonalidad rosada

Tincin de Giemsa Colorante neutro

Tincin Azul de Toluidina Colorante metacromtico

Impregnacin con sales de plata Coloracin indiferente

Coloraciones Utilizadas en Microscopa ptica

Coloracin con PAS (cido peridico-Shiff): se usa para determinar la presencia de macromolculas ricas en glcidos como glucgeno, glucoprotenas y glucosaminoglucanos. Se observa color fucsia al microscopio ptico.
Coloracin con Azn: (tricrmica): se obtiene tres colores diferentes: Azul oscuro en los ncleos de la clula; rojo en el msculo, queratina y citoplasma celular, y azul claro en el mucingeno y colgeno, o sea en el tejido conjuntivo Coloracin con metales: actan impregnando a ciertos componentes celulares. Se usan para demostrar aparato de golgi, y las neurofibrillas.

Coloraciones Utilizadas en Microscopa ptica

Coloracin con hematoxilina frrica: til para estudiar detalles
celulares finos. Ej. Las fibras elsticas y las mitocondrias presentes en el citoplasma de ciertas clulas
Tricrmico de Cajal y Gallego: implica el uso de tres colorantes. Para demostracin diferencial y selectiva de las fibras colgenas y del msculo. La orcena y la fucsina resorcina: son colorantes para fibras elsticas. Se observan entre bordeau y castao oscuro. Carmn de Best: para tincin nuclear y deteccin de glucgeno

Elementos celulares que presentan basofilia, es decir afinidad por los colorantes cidos y se ven de color morado al microscopio ptico - Heterocromatina y nuclolos del ncleo - Algunos componentes citoplasmticos - Material extracelular Elementos celulares que presentan acidofilia, es decir afinidad por los colorantes bsicos y se ven de color rosado al microscopio ptico -La mayora de los filamentos citoplasmticos -La mayora de los componentes membranosos intracelulares -La mayora de las fibras extracelulares