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UNIVERSIDAD NACIONAL PEDRO RUIZ GALLO FACULTAD DE CIENCIAS BIOLGICAS

Autor: Carlos Altamirano Mego. Profesora: Olga Francis Arana. :

Gnero Streptococcus.
Los esptreptococos fueron descritos por primera vez por Billroth en 1874. En 1879, Pasteur encontr microorganismos similares en la sangre de una paciente con sepsis puerperal. Un punto decisivo en la comprensin de la epidemiologa de las infecciones estreptoccicas tuvo lugar en 1933 con la introduccin por Lancefield de un sistema serolgico til para la clasificacin de los estreptococos -hemolticos.

1. CLASICICACIN Divisin BXIII:Firmicutes Clase III: Bacilli

Orden II: Lactobacillales


Familia VI: Streptococcaceae Genero I: Streptococcus Especies S. acidominimus, S. agalactiae, S. alactolyticus, S. bovis, S. canis, S. constellatus, S. cricetus, S. cristatus, S. difficile, S. downei, S. dysgalactiae subesp, S. dysgalactiae, S. dysgalactiae subesp, S. equisimilis, S. equi, S. equi subesp.equi, S. equi subesp.zooepidemicus, S. equinus, S. ferus, S. gallolyticus, S. gordonii, S. hyointestinalis, S. hyovaginalis, S. iniae, S. intermedius, S. intestinales, S. macacae, S. mitis, S. mutans, S. oralis, S. parasanguinis, S. parauberis, S. phocae, S. pleomorphus, S. pneumoniae, S. porcinus, S. pyogenes, S. ratti, S. salivarius, S. sanguis, S. sobrinus, S. suis, S. thermophilus, S. thoraltensis, S. uberis, S. vestibularis. 1

Sistemas para clasificar Streptococcus.

Presentacin clnica (estreptococos piognicos, orales, entricos). Propiedades serolgicas (grupos de Lancefield A-H y K-V). Patrones de hemlisis (completa *+, incompleta *+, y nula *+). Propiedades Bioqumicas.

Sistema de Lancefield

Cuadro comparativo de Streptococcus de importacia clnica

MICROORGANISMO Streptococcus pyogenes S. agalactiae

HABITAT Piel, vas respiratorias.

MODO DE TRANSMISIN Contacto directo, secresiones, tos, estornudos.

Aparato genital femenino y Infeccin madre-hijo en el parto. tracto gastrointestinal, puede colonizar vas respiratoria.

Estreptococos Hemolticos grupos C,F Y G

Piel, nasofaringe, gastrointestinal y genital.

tracto Invacin de bacterias endgenas aparato a sitios estriles o personas a persona. Contacto directo, colonizacin e infeccin

S. pneumoniae S. viridans.

Colonizacin nazofaringe. Cavidad bucal, gastrointestinal y genital femenino.

tracto Cepas que invaden sitios aparato estriles, tratamientos dentales.

Caractersticas generales

Son microorganismos grampositivos de forma esfrica a ovalada y de menos de 2 um de dimetro. En medio lquido forman pares o cadenas. La proliferacin de los estreptococos se produce por elongacin del eje paralelo a la cadena. Estreptococos son anaerobios facultativos con metabolismo fermentativo. Fermentacin es generalmete homolctica. Son catalasa negativa. Hemlisis que se produce en las placas de agar-sangre.

Streptococcus pyogenes
HABITAT Membranas mucosas. Habita en la garganta . Ingresan a travs de las heridas.

MORFOLOGA
Microorganismo esfrico a ovoide de 0.5 a 1.0 um de dimetro. Proliferan en cadenas cortas o de longitud moderada. Pared celular rgida, su membrana plasmtica interna con vesculas mesosmicas, ribosmicas citoplamticos y nucleoide. La protena M especfica. Producen una cpsula de acido hialurnico.

S. pyogenes, izquierda tincin gran en medio lquido, derecha tincin en medio slido; Microscopa ptica. 1000 aumentos. Fuente: Dra. Trinidad Sabalete

Microfotografa electrnica de S. pyogenes, que muestra las vellosidades externas con la protena M y la pared celular con la capa interna electrodensa y la membrana plasmtica muy adherida. Este par de microorganismos representa un tabique completo y el comienzo de los tabicamientos secundario. Izquierda fijacin con glutaraldehido-osmio. X 84.000. (Cortesa del doctor Roger M. Cole.)

FISIOLOGA
Es un anaerobio facultativo. Catalasa negativo y oxidasa negativo y no contiene ningn compuesto hemo. Requerimientos nutricionales de los estreptococos son complejos. Mueren en 30 minutos a 60 C. CARACTERSTICAS DEL CULTIVO Cresen en medios que contienen sangre o sus derivados. El pH para su proliferacin es de 7,4 a 7,6 a 37 C. Tensin reducida de oxgeno o con un nivel elevado de CO2. Se prefiere la sangre de carnero para el aislamiento primario .

IDENTIFICACIN POR EL LABORATORIO Siembra en estra o por vertido. las colonias de S. pyogenes, miden 0.5 mm de dimetro, son redondeadas, tienen un color grisceo a opalescente. Las colonias estn rodeadas por una zona de -hemlisis. Las cepas que sintetizan grandes cantidades de cido hialurnico producen colonias mucoides. El grupo serolgico puede ser determinado por varias tnicas, la extraccin y precipitacin de Lancefield, anticuerpos fluorescentes o coaglutinacin. La prueba de la bacitracina.

Streptococcus pyogenes: Cultivo en Agar sangre a 37C. Se observa microbiota farngea conStreptococcus pyogenes. Las colonias de S. pyogenes estn rodeadas de una zona de hemlisis completa (). Fuente: GEFOR

DIFERENCIA DE COCOCOS GRAM POSITIVOS

DIFERENCIAS FISIOLGICAS DE ESPECIES DE STREPTOCOCCUS.

DIFERENCIACION DE STREPTOCOCCUS BETAHEMOLITICOS CLINICAMENTE IMPORTANTES

LISOGENIA

El grupo A alcanza el 90 al 100%. Bacterifagos asociados con la lisognia. Esta relacin es establecida con la exotoxina pirgena o toxina eritrognica, las muralisinas. La enzima N-acetilmuramil-L-alanina amidasa capaz de lisar estreptococos de muchos grupos.

ESTRUCTURA ANTIGNICA

POLISACARIDO C

El polisacrido C, es especfico de la especie, est compuesto por un polmero ramificado de L-rammosa y N-aceti-D-glucosamina en una proporcin de 2:1; el ltimo es el determinante antignico. El polisacrido est unido por puentes que contienen fosfato al peptidoglucano, formado por N-acetil-D-glucosamina, cido N-acetil-D-murmico, cido Dglutmico, L-lisina, D-alanina y L-alanina.

PROTEINAS
TIPIFICACIN
ANTIGENO M
Resistentes al calor y a los cidos pero son destruidos por la tripsina Medios que contengan pptidos

Tipificacin

pruebas de precipitacin

expresin

ANTGENO T

son termoestables y acido estables pero son resistentes a la tripsina


prueba de aglutinacin No estn asociados con la virulencia

pH mayor o igual que 6,5

Tipificacin

MAP

Pacientes con fiebre reumtica aguda

SOF

Sensible a la tripsina y opaca el suero del caballo

PROTEINA M
La protena M estreptoccica es una molcula fibrilar antifagoctica localizada en la superficie de los microorganismos del grupo A. Se trata de un dmero enrollado alfa-helicoidal que se puede extender hasta 60 nm. La protena M est codificada por el gen emm.

DETERMINANTES DE PATOGENICIDAD
COMPONENTES CELULARES
ACIDO LIPOTEICOICO (LTA)

El LTA es una molcula anfiptica y anftera. Es muy citotxico para una variedad de clulas husped y es capaz de realizar una amplia variedad de actividades biolgicas. El LTA ha sido identificado como el ligando de la colonizacin estreptoccica que forma una compleja red con la protena M y se une por medio de sus fracciones lipdicas a la fibronectina de las clulas epiteliales.
PROTEINA M

La actividad antifagoctica de la protena M estreptoccica ha sido atribuida a la inhibicin del complemento, mediada por la unin del factor H, la protena srica que controla la va alternativa del complemento.

La actividad antifagoctica

Proteina M

Se une al Factor H, fibringeno

Interfiere la unin del componente C3b del complemento sobre la superficie de la clula estreptoccica.

Activacin de la va alternativa del complemento

Opsonizacin del estreptococo

RESPUESTA INMUNITARIA

2 formas

Induce la produccin de anticuerpos protectores que promueven la fagocitosis.

Sin embargo estos anticuerpos pueden reaccionar con estructuras propias del organismo.

FIEBRE REUMTICA

CORAZON

Sndrome de shock txico estreptoccico.

LA PEPTIDASA C5a

Superficie celular

Destruye las seales quimiotcticas

Elimina un pptido de seis aminocidos del carbono terminal del componente C5a del complemento

FACTOR DE OPACIDAD DEL SUERO El factor de opacidad del suero estrechamente vinculado con la protena M, es un producto gentico diferenciado sujeto a variacin de fase y tambin corregulado con la protena M por un interruptor gentico que controla la morfologa de las colonias y la expresin de protena M.
El S. pyogenes tambin expresa una exclusiva protena de superficie que se une a la regin Fc de la IgG de los mamferos. POLISACARIDO CAPSULAR Muchos estreptococos del grupo A producen una cpsula de cido hialurnico. la enzima hialuronidasa hidroliza el acido hialurnico de los tejido conjuntivos permitiendo que la bacteria se disemine por via hemtica.

PRODUCTOS EXTRACELULARES
HEMOLISINAS

ESTREPTOLISINA O

Agentes reductores, Tioles

Protena inmunognica(10-14) monocatenaria (60 kDa)

OXGENO LABIL

Deteccin de anticuerpos en el suero sanguneo.

Puede usarse clnicamente para confirmar una reciente infeccin.

Actividad citoltica

Glbulos rojos, leucocitos polimorfonucleares y plaquetas.

ESTREPTOLISINA S Es un polipptido unido a un oligonucletido. Es ltico para glbulos rojos y blancos, los efectos lticos son inhibidos por los fosfolpidos. Responsable de hemlisis superficial que se ve en las placas de agar sangre. La SLS es una toxina no antignica y oxgeno estable que puede extraerse de las clulas estreptoccicas slo cuando se aade un transportador o un inductor al cultivo o a la suspensin de clulas en reposo. El suero, la albumina y un fraccin del RNA resiente a la RNasa son algunos de los inductores ms potentes.

EXOTOXINA PIROGENA O TOXINA ERITROGENICA


Ms del 90% de cepas aislada producen exotoxina pirgena. Existe tres serotipos diferentes (A, B y C), cuyos pesos moleculares son de 8, 17,5 y 13,2 kDa, respectivamente. Son termolbiles pero estables al cido, los lcalis y la pepsina. El gen estructural de estas toxinas, es transportado por un bacterifago temperado. El efecto principal de las toxinas es la fiebre y no la erupcin. La toxina de tipo C producen un aumento en la permeabilidad de la barrera hematoenceflica a las endotoxinas y bacterias y ejercen su efecto pirtico por accin directa sobre el hipotlamo.

NUCLEASAS
Existe cuatro nucleasas distintas desde el punto de vista antignico (A, B, C y D) que colaboran en la licuefaccin del pus y que supuestamente ayudan, a generar sustrato para la proliferacin.

ESTREPTOQUINASA
La estreptoquinasa forma un complejo con el activador del plasmingeno en plasma, lo que conduce a la digestin de la fibrina. Esta reaccin tambin lleva a la escisin del tercer componente del complemento al factor quimiotctico C3a.

GNERO LACTOCOCCUS
CARACTERSTICAS GENERALES
Son tpicamente esfricas u ovoides, de 0,5 a 1,2 m por 0,5 a 1,5 m. Se agrupan en pares o en cadenas cortas. No formadoras de esporas y no mviles. Difiere de otras bacterias cido lcticas por su tolerancia al pH, sal y temperatura de crecimiento. Poseen el antgeno de Lancefield grupo N. Lactococcus se emplea en la industria lctea en la manufactura de fermentados como quesos o yogures. Poseen un metabolismo homofermentativo, produciendo exclusivamente acido lctico. Su temperatura ptima es de 30 C. La ruta metablica empleada es la Ruta de embden-meyerhof, y el metabolismo del citrato en Lc. lactis subsp. lactis var diacetylactis.

DIFERENCIA DE COCOCOS GRAM POSITIVOS

CLASIFICAIN
Divisin BXIII: Firmicutes Clase III: Bacilli Orden II: Lactobacillales Familia VI: Streptococcaceae Genero II: Lactococcus. Especies: L. lactis supesp. lactis. L. lactis subesp. Cremoris; L. lactis subesp. Hordniae; L. garviae; L. plantarum; L. raffinolactis; L. xylosus

Lactococcus lactis
CARACTERSTICAS
No forma esporas, no mviles y son gram (+) se agrupan en pares y en cortas cadenas, de 0,5 a 1,5 m de longitud. Al fermentar leche, L. lactis produce grandes cantidades de cido lctico. se usa en los estadios tempranos de la produccin de los siguientes quesos. Lactococcus se encuentran asociados con el material vegetal, principalmente gramneas. Lactococcus lactis subsp. lactis y subsp. cremoris, donde subsp. lactis para la fabricacin de queso blando, mientras subsp. cremoris es para el queso duro. glutamato descarboxilasa (GAD) se puede encontrar en la subespecie lactis, pero no en cremoris subespecies. se relaciona con otras bacterias lcticas tales como Lactobacillus acidophilus en el tracto intestinal y Streptococcus salivarius en la boca.

Lactococcus lactis. Magnification 1500X. Phase micrograph courtesy of T.D. Brock, University of Wisconsin-Madison.

METABOLISMO La va metablica de L. lactis puede funcionar a travs de reacciones aerbicas y anaerbicas.

Requiere mnimamente glucosa, arginina, glutamato metionina y valina para el crecimiento.


Las fuentes de carbono que L. lactis extrae de fructosa, galactosa, glucosamina, glucosa, lactosa, maltosa, manitol, manosa, ribosa, sacarosa y trehalosa. Bajo reaccin anaerbica, glucolisis rompe los carbohidratos extracelulares a piruvato, a continuacin, convierte el piruvato en cido lctico, con la principal enzima LDH, lactato deshidrogenasa.

desarrollo de colonias de Lactococcus lactis en Agar Sangre, se observan colonias circulares de 1.5 mm de tamao, color cremosa blanquecina, colonias elevadas con bordes enteros y no hemoltica.

Caractersticas fenotpicas de especies de Lactococcus. +, Reaccin positiva; -, reaccin negativa; V, reaccin variable; PYR, pyrrolidonyl arylamidase; LAP,luesina aminopeptidasa; SBA, agar con sangre de oveja. (11.12)

PRODUCIN DE QUESO
Los pasos bsicos comunes para la mayora de variedades son la acidificacin, coagulacin, deshidratacin, y el salado. Produccin de cido es la funcin principal de las bacterias iniciadoras. Durante el proceso de maduracin de las bacterias desempear otras funciones . Asegura que el pH correcto para la coagulacin e influye en el contenido de humedad final del producto. Durante la maduracin, las enzimas lipolticas y proteolticas son liberados de las bacterias que aportan un aroma equilibrado, el sabor, la textura y apariencia de la superficie del producto.

Cultivos iniciadores

Mantequilla y crema agria

En la fabricacin de mantequilla cultivada, grasa (crema) se separa de la leche descremada por centrifugacin de la leche. La crema se pasteuriza y se inocularon con cultivos iniciadores seleccionados.

Lactococcus lactis es vital para fabricacin de quesos .

Product

Principal acid producers

Secondary microflora

Cheese Colby, Cheddar, cottage, cream


Lactococcus lactis ssp. cremoris Lactococcus lactis ssp. lactis Lactococcus lactis ssp. cremoris Lactococcus lactis ssp. lactis Fermented milk Citrate+ Lactococcus lactis ssp. lactis Penicillium roqueforti None

Blue

Lactococcus lactis ssp. cremoris


Buttermilk Lactococcus lactis ssp. lactis Lactococcus lactis ssp. cremoris Sour cream Lactococcus lactis ssp. lactis

Leuconostoc spp. Citrate+ Lactococcus lactis ssp. lactis

None

Nombre antiguo

Nombre nuevo

Producto

Streptococcus cremoris

Lactococcus lactis ssp. cremoris

Queso Cheddar Queso continental (con ojos) Mantequilla lctica Queso Feta Queso Cottage Quarg Queso maduro con mohos

Streptococcus lactis

Lactococcus lactis ssp. lactis

Queso colby, queso Cheddar, queso cottage, queso azul, queso feta.

BACTERIOSINAS
LA NISINA La nisina es una bacteriocina capaz de inhibir el crecimiento de microorganismos Gram positivos, entre ellos Staphylococcus aureus, Listeria monocytogenes y Clostridium spp. No tiene gran influencia sobre las bacterias Gram-negativas y no tiene ninguna accin sobre hongos y levaduras. El objetivo principal de la nisina se cree que es la membrana celular, no necesita un receptor para su interaccin con la membrana celular, sin embargo, la presencia de un potencial de membrana se requiere. Conservante en alimentos procesados, productos lcteos pasteurizados y vegetales enlatados, al horno de alta humedad y productos de harina, huevo lquido pasteurizado. La nisina no pueden ser sintetizados qumicamente, los productores de nisina de cepas de Lactococcus lactis se utilizan para su sntesis industrial. Usos de la nisina para controlar bacterias de descomposicin del cido lctico en la produccin de alcohol. Uso de la nisina para la terapia de la lcera humana y control de la mastitis en el ganado bovino. Adyuvante del tratamiento trmico.

La aplicacin de la nisina es efectiva para la preservacin de los siguientes productos:

Queso y preparaciones de queso procesado. La adicin de nisina a 100-250 mg/kg incrementa la vida de anaquel del queso al menos por 6 meses.
Leche pasteurizada y esterilizada y saborizada. La adicin de nisina a 50 mg/kg antes de la pasteurizacin incrementa la vida de anaquel a temperatura ambiente de 2 a 6 dias. Leche evaporada enlatada. La adicin de nisina a 80-100 mg/kg previene completamente el crecimiento de bacterias tpicas formadoras de esporas. Y permite la reduccin del tiempo de proceso por 10 minutos. Postres de leche, incluyendo harinas, azcar, crema o leche. La adicin de nisina a 50-100 mg/kg hace posible la reduccin del nivel de calor de proceso y mejora la calidad del producto. Chcharos, frijoles y papas enlatadas. La adicin de nisina a 100-150 mg/kg aumenta la vida de anaquel en climas clidos por al menos 2 aos y permite procesarlos a menor temperatura, mantener las propiedades de sabor e integridad del producto. Hongos enlatados. La adicin de nisina a 100-200 mg/kg previene la germinacin de esporas despus del proceso trmico y hace posible el garantizar la mayor vida de anaquel en climas clidos.

Proceso inhibitorio de la nisina.

La molcula de nisina posee una treintena de aminocidos, algunos de ellos poco comunes como son: la lantionina, la metilantionina, la dehidroalanina y el acido dehidroaminobutrico. En la industria alimentaria es empleada y codificada como E 234, principalmente en la elaboracin de quesos.

LACTOSINA A
Aplicaciones prcticas en la industria lctea ya que ejerce un efecto ltico sobre lactococos empleados como cultivos iniciadores en las industrias queseras. PEDIOCINA PA-1 Tiene actividad antilisteria.

Bacteriocinas producidas por bacterias del gnero Lactococcus

LACTOCOCCUS Y ADMINISTRACIN DE VACUNAS


La bacteria puede ser diseada genticamente para producir protenas de especies patgenas en su superficie celular. Inoculacin intranasal de un animal con la cepa modificada provocar una respuesta inmune a la protena clonada y proporcionar inmunidad contra el patgeno. EL GENOMA DE LACTOCOCOS El genoma de L. lactis es un cromosoma circular con un par de bases 2.365.589, donde el 86% del cdigo genoma de protena, 1,4% para el ARN, y 12,6% para la regin no codificante. 64,2% del cdigo de genes para protenas funcionales conocidos y 20,1% de los genes de la protena conocida con funcin desconocida. El restante 15,7% de los genes identificados son protenas que pueden ser exclusivos de la Lactococcus.

Genome atlas of the chromosome of L. lactis MG1363.

APLICACIONES A LA BIOTECNOLOGA Lactococcus lactis se especializa en la excrecin de cido lactato deshidrogenasa lctica. Administracin de vacunas. Recombinacin de genes, para tener un mejor control sobre las actividades del organismo. Un nuevo mtodo de optimizacin de la fermentacin del cido lctico, Inmovilizacin de las clulas . Las clulas son atrapadas dentro de perlas de alginato o microcpsulas de membrana de alginato. Produccin de L-alanina, que se usa como edulcorante en productos lcteos.

Lactococcus garviae
Conocido como el grupo lctico del gnero Streptococcus, siendo separado de ste en 1985. Cocos Gram positivos, catalasa negativa y de crecimiento anaerbico facultativo. Son bacterias productoras de cido lctico. Es un patgeno emergente zoontica. Aislado de los peces (salmn escocs) y los seres humanos y fuentes bovinas, principalmente de casos de mastitis. Resistente a la clindamicina, penicilina, sensible a la vancomicina. Responsable de mastitis de rumiantes y septicemia en peces, peces infectados que no desarrollan la enfermedad pueden contribuir a la diseminacin. Es considerado patgeno raro en humanos, oportunista y de baja virulencia.

Mastitis de rumiantes y septicemia en peces

Lactococcus rafnolactis
Son cocos, y se encontraron en pares o en cadenas cortas. No crece en 40 C, a pH 9,2, o en presencia de 4% de NaCl y no puede hidrolizar arginina. No es utilizado actualmente por el industria lechera, principalmente a causa de su falta de actividad caseinoltica. Caracterstica peculiar de poder fermentar -galactsidos, tales como melibiosa y rafinosa.