Tema N°1 BQM 302

Dra.
Gaby Lobo Rivera

Carrera: Bioqumica
QUMICA ANALTICA
INSTRUMENTAL
BQM 302
EVALUACION:2013
LABORATORIO30%
EVALUACIONES..45%
TAREAS.10%
ASISTENCIA..15%
TOTAL100%
Dra. Gaby Lobo Rivera
Tema No.1
Introduccin al Anlisis
Instrumental
Contenido:20%
Aspectos generales al anlisis
instrumental y Control de errores y
tratamiento analtico de datos
Caractersticas generales de la REM
con aplicacin analtica en salud
Leyes del anlisis cuantitativo en
Espectroscopa
I. Introduccin al Anlisis
Instrumental
Aspectos generales
del anlisis
instrumental
Qu es la Qumica Analtica
Instrumental?
Es una parte importante de todo proceso
analtico, pues aplica un conjunto de
mtodos fsicos, qumicos y fsico-qumicos
para realizar un anlisis qumico.
Etapas del anlisis qumico:
Muestreo
Conversin del analito en una forma
medible
Medicin: cualitativa y/o cuantitativa
Interpretacin de los resultados
En la etapa de medicin
puede realizarse con diferentes medios y la tcnica
que se utiliza en laboratorio ha llevado a la divisin
de los Mtodos Cuantitativos segn la naturaleza de
la medida final del anlisis en:
Volumtricos,
Gravimtricos e
Instrumentales,

Qu es un INSTRUMENTO ANALTICO?
Es un dispositivo que convierte una seal
que no es detectable, ni comprensible
directamente por los seres humanos en otra
seal que si lo es. As un instrumento
analtico se considera como un dispositivo
de comunicacin entre el sistema en estudio
y cientfico.
Cules son las VENTAJAS DE LOS
MTODOS INSTRUMENTALES?
Acortan la duracin de muchos anlisis que son
bastante tediosos por mtodos no instrumentales.

Se aplican a la determinacin de sustancias en
condiciones en las que fallan los mtodos clsicos.

Permiten una fcil adaptacin a dispositivos de
registro grfico, y a instrumentos de clculo y
computacin.
.
Cules son las DESVENTAJAS DE LOS
Limitaciones econmicas, costo elevado de
los equipos
Insuficiente capacitacin del personal para el
manejo de los instrumentos.

Descalibracin de los instrumentos utilizados
por la inexperiencia del personal.

Cul es el INTERS en el rea de salud de los
Los mtodos instrumentales proporcionan
informacin completa de las propiedades
fisicoqumicas de las sustancias que se
encuentran en lquidos biolgicos,
preparados medicnales, etc. en cualquier
estadio de su vida. Esta informacin se
consigue principalmente en cuatro formas
distintas:
1.- Identificacin y determinacin de la estructura
qumica tanto en medicamento como muestras
aplicadas.
Informacin que se obtiene a partir de la molcula
intacta con mtodos instrumentales fisicoqumicos,
con lo que se consigue un ahorro de tiempo y
mayor objetivacin de los resultados.
Por ejemplo la Resonancia Magntica Nuclear
para la identificacin de Hidrgeno y Carbono y su
entorno estructural,
Potenciometra para la identificacin de cationes,
bases orgnicas y funciones oxidables o reducibles
electrolticamente, etc.
2.- Determinacin de su homogeneidad y
pureza
Donde los mtodos instrumentales ptimos
son los de separacin como la
Cromatografa, Electroforesis o bien la
Espectroscopa de masas muy utilizados
en la determinacin de macromolculas,
inmunoglobulinas, antgenos, etc.

3.- Valoracin Cuantitativa
Es la aplicacin ms importante,
Por ejemplo, la Fluorimetra junto con la
Cromatografa de Gases son utilizadas para la
determinacin de trazas de frmacos en lquidos
biolgicos y en rganos de animales,
La titulacin fotomtrica para la valoracin en
liquidos biolgicos
4. Determinacin de Constantes Fsicas y
Fisicoqumicas
Caractersticas y propias de los sustancias tales
como el punto de fusin, intervalo de destilacin,
peso especfico, viscosidad, ndice de refraccin,
poder rotatorio especifico, conductividad, pH,
descenso crioscpico, etc. son en general muy
empleadas en el proceso de fabricacin y control de
medicamentos, aditivos, colorantes, etc. Por ejemplo
la utilizacin de la Densitometra, Refractometra
(Lactmetro de Bertuzzi para determinar el aguado
de la leche)

PROCESO DE UNA MEDICION
INSTRUMENTAL:
Independientemente de la complejidad del
anlisis o tcnica empleada, los pasos en una
medicin instrumental son:
1.Generador de la seal analtica.
2.Transductor de entrada o detector.
3.Procesador de la seal analtica.
4.Transductor de salida o dispositivo de
lectura.
1. Generador de la seal analtica
Son dispositivos que producen seales analticas a
partir de los componentes de la muestra.
Un generador de seales produce una seal que
denota la presencia y, con frecuencia tambin, la
cantidad de la especie a analizar.
En muchos casos, el generador es simplemente un
compuesto o un ion generado a partir de la propia
especie a analizar,
Algunos ejemplos:
Para un anlisis por emisin atmica, el
generador de seales son los tomos
excitados o los iones que se generan al
aportar gran energa al material a analizar,
pues son los responsables de emitir fotones
de radiacin.
En una determinacin de pH, la seal es la
actividad (concentracin) del ion hidrgeno
de la disolucin a analiza
2. Transductor detector de entrada

Es un dispositivo que convierte una seal de
un determinado tipo en otra diferente.
Algunos ejemplos..
Espectroscopa IR el termopar trasforma la
seal trmica en seal elctrica.
En Fotometra la fotoclula convierte la REM
en una corriente elctrica

Las mismas tienen que ser fcilmente
procesadas

3. Procesador de la seal
Procesan la seal transducida para hacerla
ms adecuada para el funcionamiento de los
dispositivos de lectura. Entre las
modificaciones frecuentes estn: la
amplificacin, atenuacin, rectificacin.

4. Dispositivos de lectura
transductores de salida:
Son los que convierten la seal amplificada,
atenuada rectificada en una seal que
puede ser leda por el hombre. Los
dispositivos de lectura ms comunes son:
Medidores con aguja sobre un cuadrante.
Registradores de rollo de papel.
Dispositivos digitales.

El desarrollo del anlisis instrumental se
tradujo en forma paralela al de la electrnica,
por que todos los procesos de una seal
instrumental se pueden hacer en forma
rpida y conveniente por medio de circuitos
electrnicos.
Los instrumentos de caracterizacin
modernos generalmente emplean uno o
varios dispositivos electrnicos sofisticados,
tales como amplificadores operacionales,
circuitos integrados, convertidores analgico-
digitales y digital-analgicos, contadores,
microprocesadores y ordenadores
CRITERIOS DE SELECCIN EN EL
ANLISIS INSTRUMENTAL

Un anlisis instrumental puede aplicarse a un
gran nmero de determinaciones analticas.
Considerar las caractersticas de la muestra
a determinar
Si se realiza un anlisis cualitativo y/o
cuantitativo
CRITERIOS DE SELECCIN EN EL
ANLISIS INSTRUMENTAL
Exactitud y precisin del mtodo
Selectividad
Sensibilidad
Tiempo de duracin del anlisis
Costo del anlisis
Infraestructura para realizar el anlisis
Confiabilidad en los resultados
obtenidos, etc.
La Evaluacin de un mtodo de
anlisis involucra:
a) En qu consiste la tcnica y el mtodo a
emplear?
Es preciso conocer los fundamentos
qumico-fsicos involucrados en la tcnica,
as como las funciones de los componentes
instrumentales para poder entender los
distintos mtodos de trabajo que se pueden
emplear.
b) Qu Ventajas y limitaciones tiene?
Es necesario conocer las capacidades y
limitaciones del mtodo as como la
presentacin e interpretacin de los datos.
En este apartado se considera el tipo de
muestras que se pueden manejar (estado de
agregacin, dimensiones, etc), la exactitud y
la precisin en la medida as como los
lmites de deteccin (la sensibilidad).
c) Qu instrumentos son necesarios?
Es necesario conocer varios sistemas
representativos de los instrumentos actuales
y tambin aspectos bsicos del mtodo tales
como: el costo relativo, el entrenamiento
requerido para operar con el instrumento e
interpretar los resultados, as como el tiempo
requerido para realizar los anlisis o
determinaciones.

d) Cules son las aplicaciones en el rea?
Conocer ejemplos especficos de aplicacin
tanto de la tcnica en general como del
mtodo en particular que ilustren la utilidad
de los mismos.

CLASIFICACIN DE LOS MTODOS
ANALTICOS
Segn Paul Delahay clasifica en:
Mtodos derivados de la Electroqumica por
ejemplo: Potenciometra, Conductometra,
Polarografa, etc.
Mtodos basados en la absorcin emisin de la
REM por la materia por ejemplo: Espectroscopa
Ultravioleta, Fluorescencia molecular, Resonancia
magntica nuclear, etc.
Miscelnea de mtodos por ejemplo Refractometra,
Dispersin ptica, Polarimetra, etc.

2.- Con fines analticos los mtodos
instrumentales se clasifican en funcin a las
seales analticas.
Estas pueden ser la absorcin de la
radiacin electromagntica (REM), emisin
de la radiacin electromagntica, peso,
masa, volumen, conductancia, ndice de
refraccin, etc.

Algunos ejemplos:
SEAL ANALITICA MTODO
INSTRUMENTAL
Absorcin REM Espectrofotometra,
Resonancia Magntica
Nuclear

Emisin REM Espectrofotometra de
emisin
Fotometra de llama
Cont.
Dispersin REM Espectroscopa Raman
Turbidimetra,
Nefelometra
ndice de refraccin Refractometra,
Interferometra
Rotacin ptica Polarimetra
CONTROL DE ERRORES Y TRATAMIENTO
ANALTICO DE DATOS:
Cuando se realiza cualquier medicin
cientfica es necesario considerar que se
puede cometer un error, por tanto, es
importante desarrollar la habilidad de evaluar
los datos, sacar conclusiones justificadas, y
rechazar interpretaciones que no estn
garantizadas debido a las limitaciones de las
mediciones.
DEFINICIN DE TRMINOS:
Exactitud: Nos indica la proximidad de una
medida a su valor aceptable o real, y se expresa en
trminos de error.
Un resultado exacto es aquel que concuerda de
cerca con el valor real de una cantidad medida.
Mientras ms pequeo es el error mayor es la
exactitud.
Error
Es la diferencia numrica entre el valor medido y
el valor real.
Los valores dados por la Oficina Nacional de
Estndares se considera como valor real.
Los errores pueden expresarse como:
1. Error absoluto:
Es la diferencia entre el valor medido (V
X
) y
el valor real (V
REAL
).
EA = VREAL - V X
2. Error relativo
Es el error absoluto dividido entre la magnitud de la
cantidad medida.
Se expresa con mucha frecuencia como relativo al
tamao de la cantidad medida en %, partes por mil,
partes por milln.

% E
R
= ( E
A
/ V
X
) . 100

CLASIFICACIN DE ERRORES:

1. Errores determinados:
Son aquellos que pueden ser atribuidos por lo
menos en teora a causas definidas
Son a menudo reproducibles y pueden ser
predecibles por una persona que entienda por
completo todos los aspectos de la medicin.

Clasificacin de los errores
determinados:
a) Errores Instrumentales, debidas a
imperfecciones en los aparatos de medida.

b) Errores de Mtodo, causadas por la conducta
fsica o qumica no ideal del sistema de
anlisis.

c) Errores Personales, que resultan de las
limitaciones fsicas o psicolgicas del analista
Otro criterios de clasificacin:
Los errores constantes aditivos, son
aquellos que su valor relativo disminuye
conforme aumenta el tamao de la muestra.
Los errores proporcionales son aquellos
que varan con el tamao de la muestra en
tal forma que el error relativo permanece
constante.
2. Errores Indeterminados:

Se manifiesta por la fluctuacin aleatoria de los
resultados que se obtienen al repetir varias veces el
anlisis.
Las causas especficas de este tipo de error se
desconocen dado que no tienen un nico origen,
sino que proceden de la acumulacin de
incertidumbres individuales demasiado pequeas
para detectarse.
Precisin:
Es la concordancia que tienen entre s un grupo de
resultados experimentales.
El trmino precisin se utiliza para describir la
reproducibilidad de los resultados obtenidos.
Puede evaluarse la precisin con datos estadsticos
obtenidos mediante:
a) Mtodos absolutos: desviacin estndar, desviacin
media, rango, varianza coeficiente de variacin,
etc.
b) Mtodos relativos: donde se indica la desviacin
relativa respecto a la media en trminos de %,
partes por mil.
Sensibilidad
Es la capacidad de discriminar entre pequeas
diferencias en la propiedad o seal que se mide de
un material.
Dos factores limitan la sensibilidad: la pendiente de
la curva de calibracin y la reproducibilidad o
precisin del sistema de medida.
Para dos mtodos que tengan igual precisin, el que
tenga mayor pendiente de la curva de calibracin
ser el ms sensible. Por otro lado, si dos mtodos
tienen curvas de calibracin con igual pendiente, el
ms sensible ser aqul que presente mejor
precisin.
Selectividad o especificidad
La selectividad de un mtodo de anlisis
denota el grado de ausencia de
interferencias debidas a otras especies
contenidas en la matriz de la muestra.
Relacin seal/Ruido
Conforme las fuentes de seales se tornan
dbiles, el problema de distinguirlas respecto
del ruido se hace cada vez ms difcil, lo que
ocasiona una disminucin en la exactitud y
en la precisin de las mediciones.

Cont.
La capacidad de un sistema instrumental
para discriminar entre seales y ruido se
expresa normalmente como la relacin S/N

S N =Amplitud media de la seal/Amplitud media del ruido
Lmite de deteccin
Es el menor valor de ella que puede
detectarse para un nivel de confianza dado.
Este lmite depende de la relacin entre la
magnitud de la seal analtica y el valor de
las fluctuaciones estadsticas de la seal del
blanco.
Es la mnima seal analtica distinguible,
OBTENCIN DE CURVAS DE
CALIBRACIN:
Mtodo de los Mnimos Cuadrados: La mayora de los
mtodos analticos requieren una etapa de calibracin en la
que los patrones que contienen cantidades conocidas de X
estndar se tratan de la misma manera que las muestras.

La cantidad experimental medida Y se representa frente a X
para obtener una curva de calibracin, tal representacin
normalmente se aproxima a una lnea recta.
Existen mtodos estadsticos para la
elaboracin objetiva de tal lnea, y para la
consideracin de las incertidumbres
asociadas con su uso.
Los estadistas se refieren a stas tcnicas
como Anlisis de Regresin, donde se
considera a X como libre de error (valores
del estndar)

La ecuacin para una lnea recta es:
y = a x + b
Donde: a = pendiente
b = ordenada en el origen

Para calcular el valor de la pendiente de la recta y la ordenada
en el origen, se aplica expresiones matemticas como

b = E y - a E x / N
Donde N es el nmero de determinaciones realizadas.
( )
2
2

=
x x N
y x xy N
a
El coeficiente de correlacin lineal de
Pearson (r)
Permite estudiar la intensidad de asociacin entre estas
dos variables. As el coeficiente de correlacin oscila entre
1 a +1,
1 describe una relacin negativa que significa que al
aumentar una variable disminuye la otra,
+1 describe una relacin positiva que significa que ambas
variables aumentan o disminuyen a la vez,
0 significa que no existe una correlacin lineal entre las dos
variables.
II. Caractersticas generales del la
REM con aplicacin analtica en salud:
RADIACIN ELECTROMAGNETICA (R.E.M.)

Es una forma de energa que se transmite
a travs del espacio a grandes
velocidades.

PROPIEDADES DE LA R.E.M
Propiedades ondulatorias de la REM

Propiedades Corpusculares de la
REM

Propiedades Corpusculares de la REM
La REM es
considerada como
paquetes de energa,
llamados fotones
cuantos.
La energa de un fotn
depende de la
frecuencia de la
radiacin y viene dada
por la expresin de
energa de Planck:

v h E . =
ESPECTRO ELECTROMAGNTICO
Representa la gama completa de
radiaciones electromagnticas y
abarca un intervalo muy amplio de
longitudes de onda, frecuencias y
energas que caracterizan cada regin
espectral.

CARACTERSTICAS GENERALES DE LAS
REGIONES DEL ESPECTRO
1. Rayos X:
Constituyen radiaciones de menor longitud de onda
entre 1 a 10 nm
Se generan bombardeando con electrones de
gran velocidad metales de nmero atmico
relativamente elevado tales como el W y Mo
En el proceso de transicin, participan los
electrones internos.

2. Ultravioleta: (UV)
Regin comprendida entre longitudes de
onda de (10) 150 a 400 nm ( visible y rayos
X)
La regin ms utilizada es UV cercano y
fundamental donde se dan lugar las
principales transiciones electrnicas de los
compuestos orgnicos
Pueden ser nocivos para el ser humano

3. Visible: (VIS)
Comprende longitudes de onda entre 400 a
800 nm aproximadamente
Predominan transiciones con electrones
externos:
La excitacin de los electrones externos
puede efectuarse: Por la interaccin
electrnica (la absorcin, emisin de la
REM) o las temperaturas elevadas.

Tabla de colores complementarios
( nm ) Color absorbido Color complementario

400-435 violeta amarillo-verdoso
435-480 azul amarillo
480-490 verde-azulado anaranjado
490-500 azul-verdoso rojo
500-560 verde prpura
560-580 amarillo-verde violeta
580-595 amarillo azul
595-610 anaranjado verde-azulado
610-780 rojo azul-verdoso
4.Infrarrojo (IR)
Corresponde a una radiacin de longitudes
de onda del orden de 0,8 a 1000 m.

Aplicado en tcnicas analticas para realizar
anlisis cualitativo.

En medicina, la radiacin infrarroja es una
herramienta de diagnstico muy til.

5.Micro-ondas
Esta regin abarca de los 0,05 a 3 cm aprox.
Se dan lugar las transiciones rotacionales puras.
Las molculas con momento dipolar pueden
interaccionar con la radiacin de microondas dando
lugar a espectros de absorcin de bandas estrechas
y definidas.
Esta regin se utiliza para estudios de resonancia
de spin electrnico.

6. Radiofrecuencia
Comprende longitudes de onda larga de 1 a 300 m.
Es muy utilizada para Resonancia Magntica
Nuclear en ncleos que poseen momento
magntico de spin
Tiene mucha importancia en el rea de salud
gracias al avance de la medicina, desarrollndose
en la actualidad instrumentos que permiten
diagnosticar numerosas enfermedades en el
hombre
INTERACCIN DE LA RADIACIN
ELECTROMAGNETICA CON LA MATERIA:
Los mecanismos especficos de interaccin
que intervienen en los mtodos
espectroscpicos se basan principalmente
en la absorcin, emisin y dispersin de
energa:

Absorcin:
Es el proceso mediante el cual una especie,
en un medio transparente, capta
selectivamente ciertas frecuencias de la
radiacin electromagntica.
Deben cumplir dos requisitos para que el
proceso de absorcin de la REM
Espectros de Absorcin
Es la representacin grfica que relaciona
las caractersticas de absorcin del analito
con la longitud de onda o frecuencia de la
REM
Emisin:
El proceso de emisin es inverso al de
absorcin, el analito previamente excitado,
emite radiacin electromagntica
caracterstica hasta alcanzar un estado
energtico estable.
El mecanismo por el cual el analito ha
alcanzado el estado energticos superior
depende del mtodo instrumental aplicado
Espectros de emisin:
Es la representacin grfica de la energa
radiante emitida por las especies
excitadas en funcin a la longitud de onda o
frecuencia. Se caracterizan por que la lneas
de emisin son mas definidas, en relacin a
los espectros de absorcin.

III. LEYES DEL ANALISIS
CUANTITATIVO EN ESPECTROSCOPA
Los instrumentos analticos que miden el
proceso de absorcin se llaman fotmetros
y espectrofotmetros, los cuales utilizan
como unidad de medida la Absorbancia,
Transmitancia (%) o ambas
La TRANSMITANCIA (T) de la solucin es
la fraccin de la radiacin incidente
transmitida por la solucin:

ABSORBANCIA: Suele definirse como la
siguiente expresin:

LEYES DEL ANALISIS CUANTITATIVO

1. LEY DE LAMBERT:
La primera de estas leyes formulada por Bouguer en
1729 y reestablecida por Lambert en 1768 se
conoce como la ley de Lambert.

Predice el efecto que produce el espesor del medio-
muestra sobre la fraccin de radiacin que se
absorbe, cuando la concentracin permanece
constante

Cada unidad de longitud del material a
travs del cual pasa la radiacin absorbe
la misma fraccin de radiacin por tanto
la energa de la radiacin transmitida
disminuye en forma exponencial al
aumentar en forma aritmtica el espesor
del medio absorbente.
A = K . b

2. LEY DE BEER:

En 1852 Beer establece el efecto de la concentracin sobre la
fraccin de radiacin que se absorbe.

Beer observ que un aumento de concentracin de partculas
absorbentes produca igual efecto que un aumento del espesor
atravesado por la radiacin.

De forma que la constante de proporcionalidad k de la Ley de
Lambert es a su vez proporcional a la concentracin c de
partculas absorbentes.

La ley de Beer establece que la energa
de la radiacin transmitida disminuye en
forma exponencial al aumentar la
concentracin de la solucin absorbente,
cuando se mantiene constante el espesor
del medio
A= k c

REQUISITOS DE LA LEY DE LAMBERT-
BEER
Radiacin incidente monocromtica
Especies absorbentes que acten
independientemente unas de otras en el proceso de
absorcin
La absorcin debe ocurrir dentro de un volumen de
seccin transversal uniforme
Cuando se trabajan con concentraciones diluidas
( menores a 10
-2
M)
Control de pH, y disolventes utilizados.

BARRIDO ESPECTRAL
Es la bsqueda de la longitud de onda
ptima, a la cual el analito presente un
mximo de absorcin un mnimo de
transmisin.

La Ley de Lambert y Beer es la base del anlisis cuantitativo, ya que
se observa una relacin directamente proporcional entre la
Absorbancia y la concentracin de un determinado soluto(St).
SISTEMAS DE COMPONENTES MLTIPLES
(MEZCLAS)
A
m
= c
1
b c
1
+ c
2
b c
2
+ .... n

Donde:
A
m
= absorbancia de la mezcla a una longitud de onda ptima
c = Constante de absortividad molar caracterstica del
componente absorbente 1 y 2
c = Concentracin de las especies absorbentes a la longitud de
onda ptima.

DESVIACIONES DE LA LEY DE LAMBERT Y BEER:
Es importante conocer los motivos que dan
lugar a estas desviaciones para poder dar
algunas indicaciones respecto a las
limitaciones cuantitativas de las medidas de
absorcin, por tanto las mismas pueden
agruparse en:

DESVIACIONES REALES:

Se presentan solo en sistemas en donde las
concentraciones de las especies absorbentes es tan
alta que el ndice de refraccin de la radiacin
absorbida vara.

Desviaciones Aparentes
Errores instrumentales, debidos a la mala
utilizacin del instrumento analtico y por la
presencia de radiaciones parsitas.
Errores qumicos o debidos a sistemas en
equilibrio por ejemplo: dimerizacin, equilibrio cido-
base, efectos del disolvente, formacin de
complejos.
Errores personales, por ejemplo mala utilizacin de
las cubetas, deficiencias en el manejo y lavado de
las mismas, descuido del analista al trabajar en
laboratorio


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