Agentes antibacterianos

En nuestros das han sido puestos a nuestra disposicin para la lucha contra las enfermedades bacterianas gran cantidad de agentes antibacterianos. Los antibiticos son sustancias qumicas producidas por microorganismos o derivados semisintticos de stas, mientras que los quimioterpicos son productos de sntesis qumica, pero ambos tienen la propiedad de estar dotados de actividad antibacteriana. Todas las bacterias no tienen la misma sensibilidad a los distintos antibacterianos. La evaluacin de esta sensibilidad va a ayudar en la seleccin del compuesto ms adecuado para el tratamiento de una infeccin bacteriana. Las pruebas ms utilizadas para evaluar la sensibilidad de una bacteria a un agente antibacteriano estn basadas en el enfrentamiento in vitro de la bacteria con distintas concentraciones del agente.

CLASIFICACIN
POR SU ORIGEN
Biolgicos: Ejemplos Bacterias: Bacillus polymyxa ( polimixina) Actimomycetes: Streptomyces venezuelae (cloranfenicol) Streptomyces griseus (produce 40 diferentes antibiticos) Mohos: Penicillium notatum (Penicilina) Cephalosporium acremonium ( cefalosporina) Sintticos: Nitrofuranos y las sulfamidas Semisintticos

POR EL ESPECTRO DE ACCIN

De amplio espectro: actan sobre bacterias gram positivas y gram negativas De espectro intermedio: actan sobre un grupo microbiano( bacterias gram positivas o gram negativas) De espectro corto: efectivo solo sobre una especie bacteriana

POR SU FORMA DE ACCIN

Bacteriosttico: cuando se inhibe el crecimiento, pero no produce la muerte. Son con frecuencia inhibidores de la sntesis de protenas y actan unindose a los ribosomas Bactericida: matan a la clula, pero no se produce la lisis o rotura de la clula. Son clase de agentes qumicos que generalmente se unen fuertemente a sus dianas situadas en la clula y no se eliminan por dilucin Bacterioltico: inducen a la muerte mediante lisis de la clula, lo que se observa como una disminucin del nmero de clulas o de la turbidez despus de aadir el agente. Incluyen a los antibiticos que inhiben la sntesis de la pared celular as como agentes que daan la membrana

POR SU ESTRUCTURA QUMICA

COMPUESTOS QUE CONTIENEN CARBOHIDRATOS: ESTREPTOMICINA, VANCOMICINA LACTONAS MACROCICLINAS : ERITROMICINA, RIFAMPICINA QUINONAS Y COMPUESTOS RELACIONADOS: TETRACICLINAS, MITOMICINA AMINOCIDOS Y PPTIDOS ANLOGOS: CICLOCERINA, PENICILINA BACITRACINA COMPUESTOS HETEROCCLICOS QUE CONTIENEN NITRGENO: POLIOXINA COMPUESTOS HETEROCCLICOS QUE CONTIENEN OXGENO:MONENSINAS DERIVADOS ACCLICOS: CICLOHEXIMIDA, CIDO FSIDICO COMPUESTOS AROMTICOS: CLORANFENICOL, GRISEOFULVINA, NOVOBIOCINA COMPUESTOS ALIFTICOS: FOSFOMICINA COMESTOS QUINOLONAS: CIDO NALIDIXICO, NORFLOXACINA OXAZILIDINONA: 2.OXAZOLIDINONA

 POR SU MECANISMOS DE ACCIN

ANTIBIOGRAMA
Consiste en el estudio de la sensibilidad o resistencia de determinado microorganismo (o grupo de ellos) a varios antibiticos. Se puede utilizar para tratar un patgeno, aadir a alimentos, en definitiva para saber como se comporta un germen frente a determinado antibitico El antibiograma se puede hacer tanto en medio lquido como en medio slido

Estos mtodos pueden clasificarse en mtodos cuantitativos y cualitativos

Mtodos cuantitativos son aquellos procedimientos que permiten determinar la concentracin inhibitoria mnima (CIM) y la concentracin bactericida mnima (CBM).

Mtodos cualitativos (disco difusin) son aquellos procedimientos que permiten clasificar directamente a un microorganismo como sensible o resistente. Este es uno de los mtodos ms utilizados en la prctica diaria

Objetivos del antibiograma

El primer objetivo del antibiograma es el de medir la sensibilidad de una cepa bacteriana que se sospecha es la responsable de una infeccin a uno o varios antibiticos. En efecto, la sensibilidad in vitro es uno de los requisitos previos para la eficacia in vivo de un tratamiento antibitico. El antibiograma sirve, en primer lugar, para orientar las decisiones teraputicas individuales. El segundo objetivo del antibiograma es el de seguir la evolucin de las resistencias bacterianas. Gracias a este seguimiento epidemiolgico, a escala de un servicio, un centro de atencin mdica, una regin o un pas, es como puede adaptarse la antibioterapia emprica, revisarse regularmente los espectros clnicos de los antibiticos y adoptarse ciertas decisiones sanitarias, como el establecimiento de programas de prevencin en los hospitales.

A Mtodo de Dilucin
Es una evaluacin cuantitativa del agente Antimicrobiano Concentracin mnima inhibitoria (CMI). se define como la menor concentracin de una gama de diluciones de antibitico que provoca una inhibicin de cualquier crecimiento bacteriano visible. Es el valor fundamental de referencia que permite establecer una escala de actividad del antibitico frente a diferentes especies bacterianas. la concentracin mnima inhibitoria no slo se usa para determinar la concentracin de antimicrobiano que recibir el paciente sino tambin el tipo de antimicrobianos a utilizar, lo que a su vez reduce la oportunidad de resistencia microbiana a agentes antimicrobianos especficos.

Concentracin mnima bactericida (CMB) se define como la menor concentracin de antimicrobiano capaz de destruir una cepa bacteriana dada.

CONCENTRACIN MNIMA INHIBITORIA (CMI). Procedimiento

Enumerar tubos estriles de13 x 100 mm del 1 al 10

10

 Agregar 0,5 ml de caldo tripticasa soya en los tubos del 2 al 10.

10

Agregar 0,5 ml de la dilucin del antibitico a ensayar en la proporcin 1:5( 200mg/ml o 200 unidades por ml) a los tubos 1 y 2

10

 Mezcle el contenido del 2do tubo y trasvase 0,5 ml al tubo 3, continuando hasta el tubo 9.El tubo 10 no tiene antibitico

10

Agregue a todos los tubos 0,5 ml de la cepa bacteriana a ensayar.

 Agregue a todos los tubos 0,5 ml de la cepa bacteriana a ensayar.

3 4 5 6 7 8 9
10

Incube a 35 37C por 18 a 24 horas y luego observe desde que tubo aparece turbidez , teniendo en cuenta que la concentracin del antibitico va de 100 mg a 0,39 mg/ml en orden decreciente

 INTERPRETACIN La concentracin ms baja que impide el crecimiento despus de una noche de incubacin se considera la Mnima Inhibitoria del antimicrobiano (CMI)

METODO DE DIFUSIN Mtodo de Kirby Bauer Modificado

Despus de sembrar uniformemente el microorganismo problema en un medio de agar, se colocan en la superficie de ste varios discos de papel impregnados con el antibitico. Este se difunde a partir del disco siguiendo un gradiente de concentracin, de manera que el crecimiento microbiano resulta inhibiendo a una distancia del disco relacionada, entre otras cosas, con la sensibilidad del germen.

Procedimiento (como preparar el inoculo):

Mtodo del medio de cultivo lquido o de Kirby-Bauer: con un asa bacteriolgica se tocan cuatro o cinco colonias bien aisladas del mismo tipo morfolgico y se inocula en 4 a 5 ml de caldo apropiado, como caldo Tripticasa soya o BHI. Los cultivos de caldo se dejan incubar a 35C hasta que aparece una turbidez ligeramente visible (generalmente 2 a 5 hs). La turbidez se ajusta con suero fisiolgico estril o caldo para obtener una turbidez visualmente comparable a la de un estndar preparado previamente (llamado 0.5 de Mc Farland). Este estndar debe agitarse antes de usar y ser comparado en forma visual con el inculo preparado. Para ello se miran ambos tubos al mismo tiempo contra un fondo blanco con una lnea negra como contraste Este mtodo es recomendado cuando el cultivo tiene ms de 24 hs de incubacin.
1.

 2. Mtodo de suspensin directa de colonias o Kirby-Bauer modificado: se colocan entre 4 y 5 ml de suero fisiolgico estril en un tubo de ensayo. Se toma con un asa bacteriolgica tres o cuatro colonias morfolgicamente similares y se suspenden en el tubo hasta alcanzar una turbidez comparable a la solucin de Mc Farland 0.5

Luego de preparado el inculo bacteriano con la cepa en estudio se deben seguir los siguientes pasos:

Introducir el hisopo estril en el inoculo bacteriano preparado, de manera de embeberlo completamente. Antes de retirarlo se debe escurrir sobre las paredes del tubo para retirar el exceso de lquido del mismo

 Patrn de turbidez: para estandarizar la densidad del inculo se usa una suspensin de sulfato de bario como estndar de turbidez que corresponde a un 0,5 del nefelmetro de McFarland. La densidad se corrobora con un espectrofotmetro. Luego de preparado el patrn de turbidez se distribuye en tubos de ensayo (4 a 6 ml por cada tubo). Estos deben ser guardados a temperatura ambiente y protegidos de la luz. Esta turbidez corresponde a 1.5 x 108 UFC/ml.

 Sembrar la placa de Mueller Hinton de manera de obtener un crecimiento confluente, para lo cual se estra con el hisopo en forma paralela y bien compacta abarcando toda la superficie de la misma. Luego se repite el procedimiento rotando la placa 60 en dos oportunidades ms. Deben extremarse los cuidados en sembrar las placas de borde a borde, porque de lo contrario pueden haber problemas en la realizacin de las lecturas Dejar secar 3 a 5 minutos antes de colocar los discos

 Colocar los discos. Estos deben ser colocados con dispensador o pinza estril o aguja estril. Luego de estar sobre el agar se debe presionar los discos levemente para que queden adheridos al mismo. Deben estar a ms de 15 mm del borde de la placa y deben distribuirse de manera de que no haya superposicin de los halos de inhibicin. En las placas de 150 mm no se colocarn ms de 12 discos, y en las placas de 100 mm no es aconsejable colocar ms de 6.

 Luego de colocados los discos las placas deben incubarse a 35C a 37C en grupos no mayores a cinco placas durante 18 hs. Para detectar la meticilinorresistencia las placas deben incubarse 24hs completas. Las placas deben colocarse en forma invertida para que el agua condensada no caiga sobre el agar, lo que cambiara las condiciones del medio y por lo tanto no servira para la lectura de los halos.

Interpretacin
Para un determinado antibitico, una cepa bacteriana es: Sensible, si existe una buena probabilidad de xito teraputico en el caso de un tratamiento a la doss habitual. Resistente, si la probabilidad de xito teraputico es nula o muy reducida. No es de esperar ningn efecto teraputico sea cual fuere el tipo de tratamiento. Intermedia, cuando el xito teraputico es imprevisible. Se puede conseguir efecto teraputico en ciertas condiciones (fuertes concentraciones locales o aumento de la posologa).

aparicin de mutantes resistentes de dicho microorganismo capaces de soportar en mayor medida que el resto el efecto inhibitorio del antibitico