Manipulacin del sistema inmune: Vacunacin e inmunoterapias

Gualberto Gonzalez-Sapienza

La comprensin y manipulacin del sistema inmune tiene un enorme potencial preventivo y teraputico
VACUNAS 1796 Edward Jenner primer vacuna contra viruela 1885 Pasteur: atenuacin artificial de microorganismos, colera, antrax. Vacuna antirbica (aplicada a J. Meister) Siguieron: B. pertussis, BCG, Difteria, Tifus, Ttanos, Fiebre amarilla, Gripe, Polio, Sarampin, etc.

Vacunacin masiva contra la viruela

1979: dos aos despus del ltimo caso en Somalia

1991 Luis Fermin, ltimo caso de polio en las Americas (Peru)

La comprensin y manipulacin del sistema inmune tiene un enorme potencial preventivo y teraputico
TRANSPLANTES 1900 K. Landsteiner: Transfusiones seguras descubrimiento de los mayores grupos sanguneos 1950 George Snell: Descubrimiento del MHC, lo que permiti mejorar las posibilidades de xitos de los transplantes.

ANTICUERPOS TERAPUTICOS Fin del siglo XIX: Los anticuerpos preparados en animales se inyectan en humanos para neutralizar toxinas y venenos.

1990 Los avances en la tecnologa de produccin de anticuerpos permite la aparicin de los anticuerpos teraputicos
CITOQUINAS y FACTORES DE CRECIMIENTO EN INMUNOTERAPIA Citoquinas o factores de crecimiento recombinantes han encontrado aplicaciones en tratamiento de cancer, enfermedades autoimunes e infecciones virales como hepatitis. IL-2, INFs, G-CSF y GM-CSF aprobados.

Las vacunas pueden prepararse con organismos vivos, inactivados o componentes individuales de los patgenos
Vacuna: preparacin diseada para inducir una respuesta inmune de larga duracin (aos) que sea capaz de evitar el desarrollo de la enfermedad.

Tipos de vacunas Microorganismos vivos Patgenos similares o atenuados (respuesta B y T)

Microorganismos inactivados
Componentes individuales

Calor, radiaciones, tratamiento qumico etc.

Componentes purificados o recombinantes, se incluyen en esta categora las vacunas conjugadas Plsmido con fuerte promotor viral que contiene el gen del antgeno de inters (respuesta B y T)

DNA (experimentales)

Las vacunas atenuadas son usualmente ms potentes que la correspondiente vacuna con el patgeno inactivo
Atenuacin convencional

Atenuacin a travs de tcnicas de biologa molecular

Las vacunas atenuadas son particularmente riesgosas para individuos inmunodeprimidos

Comunmente las vacunas son preparadas con organismos vivos, patgenos inactivados (muertos) o componentes individuales de los mismos (subunidades)
El organismo causante es aislado de fluidos o tejidos Microorganismo atenuado

Purificacin

Vacuna organismos vivos

Agente causal Purificacin

Vacuna organismo muertos

Identificacin de componentes inmungenicos protectores

Purificacin

Produccin recombinante

Vacuna recombinante

Aislamiento del gen

Clonado en un vector viral

Purificacin Vacuna de DNA

Las vacunas deben activar la inmunidad innata y la adaptativa

epitelio

Foco inflamatorio Reclutamiento de clulas (ej, neutrfilos) y componentes solubles

Seales de peligro PAMPs y dao celular

antgeno

Clula dendrtica

Las vacunas a subunidades son ms seguras pero deben incluir un adyuvante para activar la respuesta inmune

epitelio

Adyuvante: Compuesto que aumenta la immunogenicidad de los antgenos con los cuales se mezclan.
Modo de accin: formacin de partculas, persistencia en el tejido, generacin de seales de peligro

Distintos tipos de adjuvantes han sido desarrollados para aumentar la inmunogenicidad de las vacunas
Los adyuvantes que tienen PAMPs, tienen una clara forma de accin, principalmente a travs de la estimulacin de los receptores TLR La respuesta a adyuvantes sin PAMPs (alumina, incompleto de Freund) es prcticamente normal en ratones MyD88-/- o TRIF-/- (que tienen bloqueada la sealizacin por TLRs)

Exceptuando la alumina (fosfato o hidrxido de aluminio) para otros adyuvantes, la FDA aprueba individualmente la combinacin antgeno-adyuvante de las nuevas vacunas

El poder de los adyuvantes depende de la activacin del adyuvante fisiolgico, la clula dendrtica
Ejemplos de PAMPs que vienen siendo estudiados experimentalmente como componentes de adyuvantes Monofosforil lpido A (LPS) TLR4 CpG demetilado TLR9 Pam3Cys y BCG PGs TLR2 Flagelina TLR5 Resquimod TLR 7/8 Muramidil dipptido NOD2

Mecanismo de accin de adyuvantes que carecen de PAMPs

La super vacuna
Una nica picadura de avispa injecta solamente 0.1 mg de venno y da lugar a una importante produccin de IgG e IgE

hialuronano

cido hialurnico

hialuronidasa

Las vacunas conjugadas activan las clulas T y permiten la vacunacin contra polisacridos
Los ejemplos ms destacado de estas vacunas son la vacuna contra Haemophilus influenzae tipo b, y contra Streptococcus pneumoniae

Los polisacrido de las capsulas bacterianas son altamente inmunognicos en el curso de la infeccin, sin embargo el polisacrido purificado no da lugar a respuestas T dependientes, y por lo tanto es necesario conjugarlo (generalmente al toxoide tetnico o diftrico, que ya han sido aprobados para vacunas)

La aplicacin de esta vacuna es un buen ejemplo de la inmunidad de rebao que se logra con la vacunacin. La aplicacin en nios redujo dramticamente la incidencia en los mismos pero tambin en los adultos

Existen vacunas contra un gran nmero de agentes infecciosos, pero importantes enfermedades an no cuentan con vacunas
Principal mecanismo de accin: anticuerpos

Vacunas aprobadas

Aunque algunas de las vacunas en uso producen respuestas de clulas T, y respuestas de anticuerpo T independiente, la eficacia de las vacunas que han resultado exitosas reposa en la generacin de anticuerpos de alta afinidad contra el patgeno blanco.

Existen vacunas contra un gran nmero de agentes infecciosos, pero importantes enfermedades an no cuentan con vacunas

Existen vacunas contra un gran nmero de agentes infecciosos, pero importantes enfermedades an no cuentan con vacunas

Los eptopes T del core de la protena no son tan fciles de mutar, y por tanto los nuevos esfuerzos de generacin de una vacuna contra el HIV estn tambin dirigidos a generar clulas T CD8+ contra el virus, particularmente en el sitio de entrada en las mucosas

Glicosilacin residuos de manosa

Nature 420, 678-682 (2002)

Junto a los antibiticos las vacunas son las principales herramientas para el control de las infecciones
Difteria Hepatitis A Hepatitis B Paperas Poliomielitis Rubeola Sarampin Ttanos Tos Convulsa Tuberculosis Varicela "Haemophilus Influenza b (Hib) Neumococo (7 serotipos) Gripe Virus papiloma humano (HPV)

(Sarampin, Rubeola, Paperas)

(Difteria, Pertusi, Ttanos)

Debido al su carcter preventivo y su aplicacin masiva las vacunas deben cumplir altos estndares de seguridad

La experiencia ha mostrado que se requiere una cobertura del 95% para que se produzca la denominad inmunidad de rebao. Cuando la incidencia de una enfermedad cae por la vacunacin, la poblacin deja de percibir la necesidad de vacunacin y es particularmente susceptible a los posibles efectos secundarios

La vacunacin puede utilizarse para reforzar la respuesta inmune contra tumores

El mayor adelanto en la vacunacin contra el cancer ha sido en aquellos de claro origen viral: Hepatitis B y HPV

Los tumores generalmente desarrollan mecanismos de evasin de la respuesta inmune que les permite sobrevivir y por tanto la vacunacin es de por si difcil
Vacunas con clulas dendrticas
GM-CSF IL-4, 7 dias

PBL
Activacin (TNF-, IL-1, IL-6) y pulso con antgenos tumorales

Antgenos tumorales del paciente o antgenos sintticos

Ac

Quimera antgeno tumoralFragmento de Ac

DC-SING Clec9A Dec-205 Dectin 1

Los avances en la ingeniera de anticuerpos ha permitido su utilizacin teraputica: magic bullets

Una fraccin de los anticuerpos de camlidos carece de cadena liviana

Adems de la molcula completa, distitntos fragmentos de anticuerpos han sido ensayados por su potencial teraputico

Los avances en la ingeniera de anticuerpos ha permitido su utilizacin teraputica: magic bullets

CAMPATH-1H
CAMPATH-1H : Anticuerpo humanizado generado por injerto de los CDRs del anticuerpo de rata contra CD52 un marcador de linfocitos maduros pero no de precursores, que se usa para eliminar los mismos y como tal tiene aplicaciones en desordenes linfoproliferativos y est siendo utilizado (alemtuzumab ) en ensayos clnicos en esclerosis mltiple

Anticuerpos monoclonales teraputicos aprobados por la FDA

Anticuerpo Muromonab-CD3 Fecha 1986 Type murine Blanco T cell CD3 Transplant rejection Aprobado para

Abciximab
Daclizumab Rituximab Palivizumab Basiliximab Infliximab Trastuzumab Gemtuzumab Alemtuzumab Ibritumomab Efalizumab Adalimumab Tositumomab

1994
1997 1997 1998 1998 1998 1998 2000 2001 2002 2002 2002 2003

chimeric
humanized chimeric humanized chimeric chimeric humanized humanized humanized murine humanized human murine

glycoprotein IIb/IIIa
IL-2 receptor a CD20 F protein of RSV IL-2 receptor a TNF-a ErbB2 CD33 CD52 CD20 CD11a TNF-a CD20

Cardiovascular disease
Transplant rejection Non-Hodgkin lymphoma Viral infection (especially Respiratory Syncytial Virus (RSV) Transplant rejection Inflammatory diseases (mostly auto-immune disorders) Breast cancer Acute myelogenous leukemia (with calicheamicin) Chronic lymphocytic leukemia Non-Hodgkin lymphoma (with yttrium-90 or indium-111) Inflammatory diseases (psoriasis) Inflammatory diseases (mostly auto-immune disorders) Non-Hodgkin lymphoma

Omalizumab
Bevacizumab Cetuximab Ranibizumab Natalizumab Panitumumab Eculizumab

2004
2004 2004 2006 2006 2006 2007

humanized
humanized chimeric humanized humanized human humanized

IgE
VEGF EGFR VEGF

Inflammatory diseases (mainly allergy-related asthma therapy)

Colorectal cancer Colorectal cancer Macular degeneration

T cell VLA4 receptor Inflammatory diseases (mainly multiple sclerosis therapy) EGFR C5 (complement) Colorectal cancer Inflammatory diseases (paroxysmal nocturnal hemoglobinuria)

Fragmentos de anticuerpos monoclonales pueden seleccionarse in vitro a partir de bibliotecas de phage display
Fragmento de anticuerpo

Los genes de las Igs son amplificados por PCR

Panning

Amplified output Amplification in E. coli

PBL

Los fragmentos son clonados en un vector que permite generar bibliotecas de anticuerpos en fagos filamentosos size =108-1010

Con la molcula selectora de inters se seleccionan los fagos especficos

Elution Selection of individual clones

La afinidad de interaccin del Fc por los receptores FcR es crtica para la accin de los anticuerpos teraputicos

Idealmente el anticuerpo debe interactuar con alta afinidad con los FcR activadores, pero no con los inhibidores. La glicosilacin por ejemplo es crtica en este sentido

La afinidad de interaccin del Fc por los receptores FcR es crtica para la accin de los anticuerpos teraputicos
La interaccin con el receptor FcRn (neonatal receptor) prolonga la vida de las Igs de das a semanas Vida media IgG1 21 das, IgG3 7 das Unin a FcRn IgG1 > IgG3

FcRn

pH bajo

Idealmente el anticuerpo debe interactuar con alta afinidad con los FcR activadores, pero no con los inhibidores. La glicosilacin por ejemplo es crtica en este sentido

Estrategias para la modulacin de la inmunidad contra el cancer

Nat Rev Immunol. 2008, 8(12):970-6

Estrategias para la modulacin de la autoinmunidad