Citologa del ciclo estral

Prctica de laboratorio de Biologa de Animales III Tanya Gonzlez Martnez

Objetivos:
1. Conocer una tcnica til en el diagnstico de la etapa del ciclo sexual en que se encuentran las hembras de los mamferos. 2. Aprender a identificar las caractersticas citolgicas de cada etapa del ciclo estral. 3. Identificar las aplicaciones de la tcnica de tincin de Papanicolaou y su importancia en el diagnstico de salud de los seres humanos.

Citologa Exfoliativa: Importancia

Diagnstico funcional:
Grado de proliferacin del epitelio vaginal Inferencias sobre el metabolismo hormonal (ovrico) Etapa de vida (pubertad, ciclo estral y gestacin)

Diagnstico patolgico:
Flora bacteriana Deteccin de clulas tumorales neoplsicas (carcinomas) Parsitos (trichomoniasis, amibiasis, coccidiosis, toxoplasmosis, trichuriasis, demodicosis, etc) Virus (enfermedad de Carre, encefalitis viral, viruela aviar, rabia, PHV) Micosis (candidiasis, aspergilosis, hitoplasmosis)

Aspectos importantes a considerar:

Historia clnica
Fecha y duracin del ltimo estro Nmero de gestaciones Aplicacin de frmacos u hormonas Tipo de alimentacin

Buena toma de muestra:

Frotis vestibular Frotis vaginal Tincin especfica (Papanicolaou, Harris,Wrights, Shorrs, Romanowsky, etc)

Citologa exfoliativa: fundamentos

La pared vaginal sufre cambios cclicos que corresponden con los cambios del ciclo del endometrio. Estos cambios se hallan bajo la influencia de las hormonas ovricas. Las fases del ciclo estral pueden identificarse a travs de las clulas descamadas obtenidas de la vagina.

Citologa exfoliativa: fundamentos

El ciclo hormonal (hipofisiario y ovrico) est estrechamente relacionado con los cambios en el epitelio del tracto reproductivo

Efecto de los estrgenos

Los cambios en las distintas fases indican que el efecto de los estrgenos sobre la mucosa vaginal es mucho ms pronunciado que el de la progesterona. Los estrgenos son responsables de los procesos de:
Proliferacin Diferenciacin (incremento en el tamao y cambio de forma de la clula, presencia de precursores de queratina y degeneracin del ncleo picnosis-) Exfoliacin de las clulas

El grado de cambios en el epitelio vaginal y en el frotis refleja la cantidad de estrgenos circulante (mayor concentracin de estrgenos en proestro y estro).

Frotis vaginal: ndices de medicin de tipos celulares

Se han creado varios ndices para describir las clulas que se observan en frotis vaginales: ndice eosinoflico (EI) ndice de clulas superficiales (SCI) ndice cariopicntico (KPI) *en qu consiste cada ndice?

Frotis vaginal: Los cinco tipos celulares del epitelio vaginal

Aunque los cambios inducidos en las clulas vaginales son continuos, las clulas en un frotis pueden ser clasificadas en cinco tipos principales:
Clulas basales Clulas parabasales Clulas intermedias pequeas Clulas intermedias grandes Clulas superficiales

Identificacin: Clulas basales

Raramente se ven en un frotis, son las ms pequeas (10 a 12 micras) del epitelio plano estratificado observables en un frotis. Uniformes en tamao y de forma redonda u oval. Citoplasma pequeo, espeso y homogneo con bordes lisos. Ncleo redondo, central, relativamente grande ocupando casi todo el citoplasma. Se observan ocasionalmente en frotis normales, siendo ms comunes en ulceraciones de la mucosa

Identificacin: Clulas parabasales e intermedias grandes

Tambin llamadas clulas espumosas Caractersticas del diestro temprano, metaestro y anestro. Se originan en la capa profunda del epitelio escamoso estratificado. 15 a 25 micras dimetro. Citoplasma con borde liso y cantidad variable dependiendo de su grado de maduracin. Ncleo grande (8-12 micras), redondo u oval, central. Degeneran o maduran rpidamente con una irritacin excesiva o una reaccin hormonal estrognica. Tipo celular predominante en organismos prepberes.

Identificacin: Clulas intermedias pequeas

Transicin entre las parabasales y las superficiales Tamao igual o menor que las superficiales, dependiendo su grado de maduracin (20 a 40 micras) Forma poligonal, con bordes usualmente angulosos y doblados

Identificacin: Clulas superficiales

Son las clulas epiteliales ms grandes observadas en un frotis (40 a 60 micras). Se originan en la capa madura ms elevada del epitelio escamoso estratificado. Se observan solas, de forma poligonal con variaciones y bordes angulosos y doblados. Algunas presentan prequeratinizacin y se llaman clulas precornificadas. Sin vacuolas. Ncleo pequeo no mayor a 6 micras. Comunes en la etapa preovulatoria, despus de una terapia estrognica, o en caso de un tumor ovrico.

Frotis vaginal: Los tipos celulares accesorios

El frotis vaginal contiene otras clulas que no tienen su origen en los epitelios que cubren el aparato genital. Entre ellas estn: Leucocitos (linfocitos, monocitos, basfilos, acidfilos y neutrfilos) Eritrocitos (huecos) con bordes crenados Clulas plasmticas. Ncleo de rueda, excntrico.

Tipos celulares del ciclo estral de la rata

Protocolo de la prctica:
Se practicar previamente la tcnica para realizar el frotis vaginal de rata en individuos anestesiados. Se tomarn muestras durante cinco das (de lunes a viernes) con los individuos que se encuentran asignados para ello en el bioterio (ratas o hmsters).
Atn. con el M.V.Z. Mario Solrzano

De cada toma muestra habr que realizar una preparacin teida con azul de toluidina o azul de metileno, observarla al microscopio y realizar esquemas de los tipos celulares observados. Es recomendable tomar fotos de la preparacin y fijarla con citospray para futuras observaciones. Es importante registrar la asistencia al bioterio firmando la hoja de control.

Resultados
1. Realicen dibujos a mano de tus observaciones diarias y describe las caractersticas de cada una de las etapas indicando qu poblaciones celulares se encuentran en cada una de ellas. Puedes acomodar tus resultados en un cuadro donde muestres la etapa del ciclo estral, el da, el esquema o dibujo y una foto.

2. Construyan una grfica en donde esbocen el patrn general del perfil hormonal a travs del ciclo estral de la rata o el hmster.

Ejemplo: Ciclo estral candeo

Despus de hacer el seguimiento de la citologa vaginal de la perra se obtuvieron los siguientes porcentajes celulares para cada etapa del ciclo:

Tincin de Papanicolaou

Proestro
Al principio hay clulas parabasales e intermedias pequeas, eritrocitos en nmero variable y gran cantidad de neutrfilos. ndices EI y SCI relativamente bajos. Frotis poco claro (sucio)

Proestro tardo
Predominan clulas superficiales e intermedias grandes, ncleos celulares picnticos, disminucin de la cantidad de eritrocitos y neutrfilos. ndices EI y SCI incrementan progresivamente. El frotis aparece sucio debido a detritus e hilos de mucina.

Estro
Ms del 90% de las clulas estn queratinizadas y anucleadas. Clulas epiteliales cornificadas con ncleos picnticos y margen angular. ndices EI y SCI por arriba del 90% Frotis de aspecto claro, con o sin eritrocitos.

Estro tardo
Las clulas tienden a aglomerarse formando capas de apariencia arrugada. Disminucin abrupta de clulas cornificadas das despus del pico de LH

Despus de la ovulacin disminuye la cantidad de estrgenos, por lo que el epiteli vaginal disminuye su grosor y en el frotis vuelven a aparecer clulas parabasales y neutrfilos.

Diestro o Metaestro
Clulas no cornificadas y neutrfilos. Al principio existen gran muchas polimorfonucleares y muy pocas clulas superficiales. Pocas clulas parabasales e intermedias que aumentan progresivamente. Frotis similar al del proestro
(Laboratorio de B. De la Reproduccin UAM, 40x)

Neutrfilos en cantidades variables, algunos dentro de clulas epiteliales, conformacin conocida como las clulas del diestro o metaestrales. Ausencia de eritrocitos ndices EI y SCI descienden abruptamente.

Predominan clulas de la capa profunda de la mucosa vaginal (clulas parabasales), hay algunas clulas queratinizadas redondas u ovaladas de ncleo bien definido y tamao uniforme. Presencia de neutrfilos y monocitos, poca cantidad de detritos y algunas bacterias en el fondo.

Anestro

Anestro y Clulas parabasales

Cuestionario (1a parte)

1. Describe el ciclo estral de la rata y/o hmster 2. Por qu las hembras de estas especies se ciclan al mismo tiempo cuando comparten el mismo espacio fsico? En qu otras especies ocurre este fenmeno? 3. Qu factores externos pueden afectar el ciclo y por lo tanto el diagnstico (alimentacin, temperatura, etc) en distintas especies de mamferos?

Cuestionario (2a parte)

4. Cules son las diferentes aplicaciones que tiene esta tcnica? 5. Cul es el objetivo del examen de Papanicolau y con qu frecuencia debe realizarse? Explica en qu consiste esta prueba en las mujeres. Cul es la prueba equivalente en los hombres y cada cundo debe realizarse? 6. Investiga cmo se observan los resultados de los exmenes de este tipo. Qu parmetros se evalan?

Cuestionario (2a parte)

7. Cules son las caractersticas que describen al Virus de Papiloma Humano (PVH)? Cuntos tipos de PVH existen, cules de ellos son los de mayor riesgo? 8. Por qu vas de contagio se puede transmitir el PVH y cmo se manifiesta? Qu consecuencias puede traer la adquisicin de este virus, por qu es tan riesgoso para la salud? 9. Investiga los datos estadsticos sobre la incidencia de enfermedades provocadas por PVH en Mxico y el Mundo. Utiliza fuentes confiables. 10. Creen que sea importante prevenir el contagio? De qu forma?

Glosario y Bibliografa
Hernndez Pichardo, E., Fernndez Reyes, F. y Corts Surez S. Fundamentos terico prcticos de la citologa exfoliativa en medicina veterinaria. CBS,Manual 5. UAM Unidad Xochimilco.
Agradecemos especialmente la amable colaboracin y participacin del M.V.Z Mario Solrzano, Jefe del Bioterio de la Facultad de Ciencias y de todo su equipo de trabajo.