PRUEBAS MICROBIOLGICAS

Alcntar Arenas Mayra Miroslava Ramrez Santos Diana Elizabeth Vega Moreno Daniel Alejandro Villareal Centeno Paulina Karime

Obtencin de la muestra y tincin de Gram.

Metodologa de tincin de Gram.

Recoger muestra

Hacer el extendido en espiral

Fijar al fuego (pasar tres veces) Agregar azul violeta y esperar un minuto Enjuagar Agregar lugol y esperar un minuto Enjuagar Agregar alcohol acetona y esperar 30 segundos Enjuagar Agregar tincin de contraste (safranina o fucsina bsica)

Medios de transporte.
Torulin en Tubo con Sello Seguro:

Es til por 72 horas al eliminar la entrada de O2 al medio y la rotura de la columna de agar.

T en T inmediato.

Medio de Stuart
Viabilidad de seis das a ocho semanas. til para V. cholerae por 30 das.

Medio de AMIES
Viabilidad por hasta 48 horas

V. cholerae permanece hasta por 60 das

til para exudados en busca de flora fastidiosa.

Medios de cultivo.
Caractersticas generales:

Disponibilidad de nutrientes.- mnimo C, N, S, P y sales

inorgnicas. Presencia o ausencia de O2 Luz ambiental pH Temperatura Esterilidad del medio Humedad.

Agar sangre. (gelatina vegetal de origen marino)

Combinacin de agar nutritivo con sangre humana o de bovino.

Streptococcus spp.

Agar chocolate.
Es una variante del agar sangre.

Se usa para crecimiento de bacterias respiratorias.

Agar McConkey
Especfico para gram negativos.

Agar Sal-Manitol
Impide el crecimiento de gram negativos.

Agar Nutritivo
Todo tipo de crecimiento bacteriano

Chromoagar y Sabouraud

ESTUDIO DE ESPECMENES GINECOLGICOS

Flujo vaginal

Flujo vaginal
Para llamarse normal, debe tener: Escasa cuanta, aspecto claro

o lechoso, con olor no desagradable y no irritante; glucoprotenas, mucopolisacridos, electrolitos y agua. Detritus epiteliales, leucocitos, hemates y moco claro, con bacilos grampositivos lactfilos (pH cido).

Vulvovaginitis infecciosa
Hongos: Candida albicans
Frecuente durante el embarazo. Eritema intenso, dispareunia y

leucorrea. 20-25% de las vv, cursando con pH normal.

Se realiza estudio en fresco con hidrxido de potasio. Frotis con Gram en el que se observan levaduras (blastoconidios)

con o sin seudomicelio. + de 4 por campo y SM.

Cultivo en medio de Sabouraud: Colonias levaduriformes, de bordes

enteros, limitadas, poco elevadas y de color blanco. Crecen en un promedio de 3 a 5 das a temperatura ambiente (Bl,SM)
Agar

harina de maz con Tween 80: seudomicelio, hifas y clamidoconidios.

Trichomoniasis
pH cido (3.8 y 4.2), polimorfonucleares en el flujo. Requiere

de lactoferrina, dependiente de ciclo menstrual. VIH. Observacin en fresco del trofozoito. Cultivo PCR Aglutinacin en ltex

Vaginosis bacteriana
Polimicrobiana: G. vaginalis, Bacteroides. Se acompaa

de disminucin de flora normal de lactobacilos y pH > 4.5 (olor a pescado) El estudio microscpico muestra clulas epiteliales recubiertas de cocobacilos.

Produccin de aminas (trimetilamina, putrescina, cadaverina, entre ellas) por las bacterias anaerobias. Se volatilizan cuando aumenta el pH, lo cual sucede en presencia de semen. Criterio de laboratorio de NUGENT Cuantificacin lactobacilos y cocobacilos Gram variable/ gramnegativos.

 Criterio clnico de AMSEL 1) descarga transvaginal lechosa de color grisceo o amarillento 2) pH vaginal de ms de 4.5 3) prueba de aminas positiva (cuando se le agrega una solucin alcalina - KOH al 10% 4) presencia de grupos de clulas de descamacin, llamadas clulas clave.

Vaginitis atrfica
Insuficiencia estrognica que causa pH elevado con

aumento de polimorfonucleares y cep. Citologa de aspecto atronco y Gram cocobacilos gramnegativos con disminucin de lactobacilos.

HEMOCULTIVO

Hemocultivos
Indicados en bacteremia en pacientes con o sin foco

aparente de infeccin (endocarditis, infecciones endovasculares) Perifricos o centrales Mtodos convencionales (manuales), en sistemas semiautomatizados (lisis-centrifugacin) o en sistemas automatizados (BACTEC, BacT/Alert, Septichek, etctera).

Toma de muestra
Despus de la palpacin de la vena, la piel debe ser

lavada con povidona yodada, gluconato de clorhexidina al 2-4% o lavador quirrgico. La puncin debe ser efectuada siempre con guantes. Se debe descontaminar con povidona yodada el tapn de goma antes de puncionar la botella y esperar a que sta se seque, ya que el fabricante no garantiza la esterilidad de ste. 3 hemocultivos en 24 horas.

Volumen de la muestra

Por cada ml adicional de muestra que se inocule en la botella, aumenta la positividad entre un 2 a 5%. Mximo de volumen que la botella sea capaz de tolerar, manteniendo la relacin 1:5 a 1:10 entre la muestra y el volumen de medio de cultivo. 10 ml para adultos y de 3 a 5 ml para nios.

Microorganismos
Staphylococcus coagulasa negativa: uso catteres

venosos centrales. Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Enterobacteriae , Pseudomonas aeruginosa, Streptococcus pneumoniae.
Bacillus sp
Propionibacteriun acnes Corynebacterium spp Clostridium perfringens

Streptococcus viridans

Cultivo
Las placas a utilizar son: Agar sangre Agar chocolate Agar MacConkey Agar Brucella (Anaerobiosis) Agar Sabouraud
Mtodo de estriacin con asa y tincin Gram

CULTIVOS FARINGEOS

La toma de la muestra se realiza con un hisopo y un abateleguas estriles. Se debe de pedir al paciente que abra la boca, saque la lengua y que trate de pronunciar la letra a, en ese momento con el abateleguas deprima la lengua y deje expuesta la orofaringe Con el hisopo se raspa ligeramente las amgdalas, girndolo al mismo tiempo, una vez realizada la toma, se hace la descarga de la muestra en el medio de cultivo correspondiente.

AGAR SANGRE

Medio de cultivo no selectivo.

Recuperacin de hongos y bacterias. Ejemplos:

Streptococcus pyogenes Streptococcus pneumoniae.

Streptococcus pyogenes

AGAR SAL MANITOL

Medio de cultivo selectivo y diferencial.
Selectivo para estafilococos. Diferencial para S. Aureus Colonias de color amarillo

BACILOSCOPIA
Examen microscpico para la deteccin de bacilos

cido alcohol resistentes mediante la tincin de ZiehlNeelsen

Baja sensibilidad, ya que se requieren a l menos

5 000 bacilos/ml de esputo para que la microscopa resulte positiva

Tcnica fundamental para : Deteccin de casos Control posterior al tratamiento

MYCOBACTERIUM TUBERCULOSIS
bacterias aerbicas grampositivas dbiles cido alcohol resistentes

M. tuberculosis en frote de esputo teido. Tcnica de Ziehl-Neelsen

Cultivos de Trasudado y Exudado

Trasudado pleural : se produce cuando hay un

desequilibrio entre la presin onctica y la presin hidrstatica Exudado pleural: Procesos de inflamacin
COLOR: Trasudado amarillo

Exudado color trslucido y opaco con la presencia de abundantes clulas Leucocitos ; Trasudado : menor a 1000 Exudado: mayor a 1000

CULTIVO DE GRAM Y EXAMEN EN FRESCO.

CULTIVOS PARA GRMENES AEROBIOS Y ANAEROBIOS

CULTIVO PARA MEDIO ESPECIFICO EN CASO DE TUBERCULOSIS O MICOSIS

Baciloscopia

Muestras nasofaringeas
Frotis, Aspirados Nasofaringeos, y lavados

Lavados o Frotis : Bordetella pertussis, Chlamydia

throcomatis y Corynebacterium difteriae El Aspirado se recoge con un tubo de plstico junto con una jeringa de 10mL o un catter para succionar . El lavado se obtiene con una pera de goma metiendo y sacando de 3mL a 7mL

ENFERMEDAD Chlamydia trachomatis

MUESTRA Torunda que puede utilizarse para cultivo , para el estudio de Elisa. Pero se sigue utilizando gram negativo Cultivo en agar Regan-Lowe

Bordetella Pertussis

Muestra de Garganta
Frotis se detectan en su mayora

Staphyloccus aureus, Streptococcus grupo A, Streptococcus Pneumonae

Infeccin

Streptococcus A Neisseria Gonorrhoeae

Corynebacterium diftarea

Cultivo Agar Thayer-Martin

Tincin con Giemsa

Lavado Broncoalveolar
Diagnstico de Neumonia y patgenos oportunistas

Broncoscopio se introduce por la luz de la va area , se

inyecta un volumen salino por lo general mayor de 140mL el volumen que se saca es aproximadamente 10mL a 100mL Examn microscpico directo y un cultivo celular Se tien con tincin de Gram Las preparaciones centrifugadas se pueden tenirse con la tincin cido-resistente Las muestra se inyecta en un medio agar usando un asa de inoculacin calibrado de 0,001 mL presencia de ms de 10, 000 colonias/mL padece la enfermedad.

ASCITIS
ACUMULACIN PATOLOGICA DE LQUIDO

EN LA CAVIDAD PERITONEAL

 Mediante la extensin del lquido ascitico sin centrifugar

en el portaobjetos. Se deben hacer en la primer en la primer paracentess Debe recogerse 50 ml de lquido Se solicitan estudios para grmenes aerobios y anaerobios.

Liquido vaginal
AGENTE INFECCIOSO ESTUDIO

TRICOMONIASIS
CANDIDA Albicans

EXAMEN EN FRESCO
ESTUDIO EN FRESCO CON HIDRXIDO DE POSTASIO Cultivo en medio Sabouraud

G. vaginalis

Cultivo

UROCULTIVO
Recogida a la mitad de la miccin: No mas de 24 horas excepto en Schistosoma

haematobium Se desechan los primeros mililitros de orina Sondaje producen infeccin nosocomial , personas incapacitadas para la recogida a la mitad de la miccin. Aspiracin Suprapbica neonatos Vejiga llena , se pincha la vejiga por encima de la snfisis pubiana y se aspira aprox. 10 ml

 Los cultivos de orina para bacterias se hacen

inyectando el medio adecuado en una determinada cantidad de orina con una asa calibrada ( asa de 0.001en todas las muestras excepto en mujeres con sospecha de sndrome ureteral agudo) Despus se extiende sobre una placa de agar sangre

PROCEDIMIENTO
# de colonias en la placa agar x 1000 Crecimiento de 3 especies o ms indica

contaminacin Excepciones: nmero menor a 10,000 se dejan si: Es un cultivo puro de Staphylococcus aureus, en infecciones que tienen que ver con sondas y en hombres con sintomatologia
Comprobar las muestras de orina con tincin

Gramm.

SIGNIFCATIVO Mujeres sexualmente activas Bebs, nios, Hombres, personas que estn sondadas 10 2 CFU/mL 10 5 CFU /mL

HECES TOMA DE MUESTRA

Se recogen en un recipiente limpio de tapa

ancha Si no se puede recoger se utiliza una torunda a travs del esfnter anal Las muestras deben meter en un frigorfico si no se llevan inmediatamente en el laboratorio.

 El anlisis de las muestras de heces o los exudados

rectales para bacterias, se basa en el organismo o grupo de organismos que esperemos que estn presentes. Las muestraspara Yeyuni / coli se colocan directamente en un medio adecuado se pueden filtrar utilizando un filtro de acetato de celulosa de 0,65 mm y dejar el filtro en agar sangre de oveja brucela o agar chocolate. Aeromonas: utilizan un medio selectivo (cefsulodinairgasn- novobiocina) Muestras de heces sanguinolentas para detectar la STEC se inyecta en agar sorbitol-MacConkey Yersenia eneterocolitica: agar CIN se inyecta y se incuba a temperatura ambiente , la placa MacConkey se incuba a 35 C las primeras 24 hrs. Y a temperatura ambiente durante otras 24 hrs.

Especies de Vibrio. Crecen en el medio que se utiliza habitualmente pero para recuperarla se inyecta agar citrato tiosulfato sales biliares sucrosa TBS y agua alcalina para enriquecer Shigelloides. Se aslan en la lactosa fermentada aunque se debe pedir de manera especifica Clostridium Difficile : Ensayo de cultivo celular : Deben recogerse 25 g (transporte anaerobio) se analiza despus de dos horas , y para extraer la toxina se debe centrifugar y se filtra a travs de una membrana de 0.45 MM y se detectan mediante ELISA y epidemiolgicos se pone en agar cicloserina cefoxitina fructuosa yema de huevo (CCFA) Clostridium Perfinges: (Transporte anaerobio) las placas de agar alcohol feniletlico se inyectan y se incuban anaerbicamente durante 48 hrs. Un recuento de 10 5 es significativo