ESCUELA PROFESIONAL DE MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA

UNIVERSIDAD NACIONAL DEL ALTIPLANO

Pract. # 14 Sensibilidad bacteriana

PUNO - PERU 2013

Aspectos histricos de la prueba de susceptibilidad 1929 Alexander Fleming

Cientfico ingls, descubre, en forma accidental, la penicilina Producida por el

Penicillium notatum

Antecedentes

A partir de 1929, Fleming descubri la penicilina, poca de los antibiticos Se produjo incremento de forma exponencial en la creacin de nuevas clases de estos agentes, especialmente en pases desarrollados. En los aos recientes la produccin de nuevos antibiticos ha disminuido de forma considerable y ha surgido como un problema de consecuencias impredecibles la resistencia bacteriana.

EVOLUCION DE LA RESISTENCIA BACTERIANA

Penicillina Methicillina Penicillin-resistant S. aureus 1970s Methicillin-resistant S. aureus (MRSA) nosocomial Vancomicin 1990s

S. aureus
1950s

MRSA comunidad

1997 2002 Vancomicin -resistant S. aureus (VRSA) Vancomicinintermediate S. aureus (VISA)

Vancomicin-resistant enterococco (VRE)

MMWR Morb Mortal Wkly Rep 2002;51:565567

ESTRUCTURA BACTERIANA
Bacteria Gram-Negativa, tpica - Pared y la membrana celular. - El interior de la clula contiene DNA cromosomal y - un numero de ribosomas constituido de protenas y RNA. Los ribosomas estn comprendidos por subunidades.

ESTRUCTURA BACTERIANA

ESTRUCTURA DE LA PARED DE UNA BACTERIA GRAMNEGATIVA

ACCIN DE AGENTES ANTIMICROBIANOS

Los agentes antimicrobianos se pueden clasificar en dos grupos, segn su accin en la bacteria.

Bacteriosttico. Inhiben el desarrollo y la multiplicacin de las bacterias. Bactericidas. Matan las bacterias.

Modo de Accin de los Antimicrobianos

Los agentes antimicrobianos son mayormente clasificados por su especifico modo de accin frente las clulas bacterianas. Los antimicrobianos pueden:
Interferir

con la sntesis de la pared celular Inhibir la sntesis de protenas Interferir con la sntesis de DNA Inhibir un metabolismo especifico

PROCEDIMIENTOS PARA SENSIBILIDAD ANTIMICROBIANA

METODOS BASICOS

Mtodos de difusin Difusin en Agar (Kirby-Bauer) Epsilon Test Mtodos de dilucin Dilucin en agar Dilucin en caldo (concentracin inhibitoria mnima CIM)

METODOS ESPECIALES Capacidad Bactericida Concentracin CBM Curvas de letalidad o curvas de muerte Actividad bactericida del suero Actividad combinada de antimicrobianos

Deteccin de mecanismos de resistencia Beta-Lactamasas Resistencia en S. aureus (MRSA, VISA) Resistencia en Enterococcus ANRA

Cuando se debe realizar un antibiograma

El fin esencial del antibiograma es ayudar en la desicin teraputica

PRUEBA DE SENSIBILIDAD ANTIMICROBIANA POR EL MTODO DE DISCO DIFUSION

PRINCIPIO La sensibilidad del microorganismo estar indicada por el tamao de la zona de inhibicin del crecimiento bacteriano

Factores que influyen en la susceptibilidad antimicrobiana

Composicin del agar Profundidad del agar Densidad del inculo Concentracin del antimicrobiano en el disco Tiempo de aplicacin de los discos Temperatura de incubacin Tiempo de incubacin pH del medio Concentracin de Timina y Timidina Concentracin de cationes divalentes (Ca y Mg)

Reactivos y medios

Medio : - Agar Mueller Hinton MH - HTM (Haemophilus test medium) - MH + 5% de sangre de carnero Caldo Mueller Hinton Estndar de turbidez (Mc Farland 0.5 ) Inoculo (Muestra problema) Discos de sensibilidad Estndar de turbidez (0.5 Mc. Farland)

Medio: Agar Mueller Hinton

Muestra buena reproducibilidad lote a lote en las pruebas de sensibilidad Contiene bajo nivel de inhibidores de sulfonamidas, trimetoprima y tetraciclina Es adecuado para el desarrollo de la mayora de bacterias patgenas Existen suficientes datos recopilados que avalan la experiencia de otras pruebas de sensibilidad realizadas en este medio

Preparacin del inculo

Mtodo directo Mtodo del desarrollo previo

Seleccin de colonias bien aisladas para el inculo

Inoculacin en caldo Meller Hinton

Comparacin de la turbidez con la escala Mc Farland 0.5

Inoculacin de la placa

Dentro de los 15 minutos despus de ajustado el inculo Superficie seca del medio Esperar hasta 3 minutos antes de aplicar los discos

Colocacin de los discos de sensibilidad

Colocar los disco con ayuda de una pinza
Distancia entre discos mnimo de 25 mm uno del otro El dimetro de los discos segn la OMS debe ser de 6mm
25 mm

Incubacin

Incubar dentro de los 15 minutos posteriores a la aplicacin de los discos Temperatura: 35C Atmsfera de CO2 Para Haemophilus spp. y Streptococcus spp. Tiempo: 16 a 18 horas 24 horas para Staphylococcus spp: Oxacilina y Vancomicina Enterococcus spp. Vancomicina 20-24 horas para Streptococcus spp.

Lectura de las placas e interpretacin de los resultados

Medir los dimetros de las zonas de inhibicin Interpretar basndose en las tablas publicadas por NCCLS (CLSI) Se reportara como sensible (S), intermedio (I), o resistente (R). segn corresponda

CMO INTERPRETAR LOS RESULTADOS Cmo Medir Zonas de inhibicin Inusuales

Doble zona de inhibicin

Zona con colonias internas

Zona afelpada

Zona con brotes

Como interpretar colonias dentro de las zonas

Seleccin de los discos de sensibilidad antibitica

Criterios de seleccin: Eficacia clnica documentada Representatividad de una familia de antibiticos Disponibilidad de criterios tcnicos fiables para la determinacin in vitro de su eficacia clnica Estabilidad de la molcula en los discos de sensibilidad Presencia en el mercado nacional Importancia para la vigilancia de la resistencia bacteriana

Seleccin de los discos de sensibilidad antibitica

Los antibiticos han sido distribuidos para este efecto en dos grupos: Grupo 1: Antibiticos de base indispensable para orientar el tratamiento de las diferentes infecciones, cuya inclusin en el antibiograma y reporte de los mismos es de carcter OBLIGATORIO
Grupo 2: Antibiticos complementarios cuya inclusin en el antibiograma y reporte es de carcter OPCIONAL, depende de los esquemas de antibioterapia vigentes en cada hospital y de la epidemiologa local de la resistencia bacteriana

Antibiograma para Staphylococcus spp

DISCOS DE SENSIBILIDAD ANTIBITICA A INCLUIR EN EL ANTIBIOGRAMA

Grupo I: Penicilina Oxacilina Eritromicina Clindamicina Vancomicina Ciprofloxacina Cotrimoxazol Gentamicina

Grupo II : Cloramfenicol. Rifampicina. Tetraciclina. Teicoplanina Nitrofurantona(1) Norfloxacina(1) (1) Disco utilizado exclusivamente en cepas provenientes de infecciones de las vas urinarias

Antibiograma para Enterococcus spp.

DISCOS DE SENSIBILIDAD ANTIBITICA A INCLUIR EN EL ANTIBIOGRAMA

Grupo I: Ampicilina Gentamicina (disco con contenido de 120 mg) Estreptomicina (disco con contenido de 300 mg) Vancomicina

Grupo II: Teicoplanina Rifampicina Cloramfenicol Tetraciclina Eritromicina Nitrofurantona(1) Norfloxacina(1) Ciprofloxacina(1) Levofloxacina(1)
(1) Disco utilizado exclusivamente en cepas provenientes de infecciones de las vas urinarias

Antibiograma para Pseudomonas aeruginosa

DISCOS DE SENSIBILIDAD ANTIBITICA A INCLUIR EN EL ANTIBIOGRAMA

Grupo I: Ceftazidima Imipenem y/o Meropenem Gentamicina Amikacina Ciprofloxacina

Grupo II: Aztreonam Cefoperazona/sulbactam Cefepime Norfloxacina(1) Ofloxacina(1)

(1) Disco utilizado exclusivamente en cepas provenientes de infecciones de las vas urinarias

Antibiograma para Enterobacterias

DISCOS DE SENSIBILIDAD ANTIBITICA A INCLUIR EN EL ANTIBIOGRAMA Grupo I: Ampicilina Cefalotina Ampicilina/Sulbactam o Amoxicilina/Acido clavulnico Cefuroxima Cefotaxima o Ceftriaxona Gentamicina Amikacina Ciprofloxacina Trimetoprim/Sulfametoxazol Norfloxacina (1) cido Nalidxico (1) Nitrofurantoina (1) Grupo II: Cefoxitina Aztreonam Ceftazidima Cefixima Cefoperazona/Sulbactam Cefepime o cefpirome Imipenem o Meropenem Cloranfenicol Ofloxacina (1) (1) Disco utilizado exclusivamente en
cepas provenientes de infecciones de las vas urinarias

Normas para la interpretacin del dimetro del halo de inhibicin y puntos de corte equivalentes de concentracin inhibitoria mnima para Enterobactereaceae

Resistencias Naturales

Estafilococos son resistentes a cido Nalidxico, cido Pipemdico y Aztreonam S. saprophyticus es resistente a Fosfomicina y Novobiocina Enterococos son resistentes a oxacilina, cefalosporinas, Clindamicina, y Cotrimoxazol. Pseudomonas aeruginosa es resistente a Penicilina, Ampicilina, Amoxicilina, cefalosporinas de primera y segunda generacin, Cefotaxima, Ceftriaxona, Kanamicina, Tetraciclina, Cloramfenicol, cidoNalidxico y cido Pipemdico. Acinetobacter baumanni y Acinetobacter calcoacticus son resistentes a Penicilina, Ampicilina, Amoxicilina, cefalosporinas de primera y segunda generacin. Enterobacterias son resistentes a penicilina, Oxacilina, Macrlidos, Clindamicina y glicopptidos. Klebsiella spp. Es resistente a las aminopenicilinas Citrobacter freundii, Enterobacter cloacae y E. aerogenes son resistente a las aminopenicilinas, aminopenicilinas/Inhibidores de betalactamasas, cefalosporinas de primera generacin y Cefuroxima.

PREGUNTAS

GRACIAS