CONTROLES POSTERIORES TRANSCRIO

- Embora o controle de incio da transcrio seja predominante para a maioria dos genes, outros controles podem agir, posteriormente, na via do RNA protena regulando a quantidade de produto gnico a ser feito. - Nveis de controle posteriores transcrio:

Edio de RNA
Processo que resulta na produo de uma molcula de RNA que possui uma seqncia codificadora diferente da correspondente no DNA; Pode ocorrer em rRNAs, tRNAs e mRNAs; Insero ou deleo de U ou substituies de C por U ou de A por I. RNA-guia com cauda poli (U);

Transporte para o citoplasma

- mRNA necessita de CAP e cauda de poli(A); - No ncleo, transcritos primrios se associam a vrias protenas formando hnRNPs; - RNPs com RNAs processados (mRNPs) so transportadas para o citoplasma atravs do complexo do poro nuclear;

- As protenas hnRNPs contm sinais de exportao nuclear (NES) que estimulam seu transporte ativo pelo poro nuclear; - Pr-mRNAs nos spliceossomos no so exportados do ncleo; - O mRNA transcrito e processado pode ser alvo seletivo da degradao intranuclear e/ou ter seu transporte bloqueado, devido ausncia de uma seqncia sinal ou por no estar completamente processado.

Localizao especfica do mRNA

- Protenas secretadas ou de membrana possuem uma seqncia sinal em sua extremidade N-terminal que, uma vez reconhecida por SRPs, leva ao seu direcionamento para o RE.

- O direcionamento a outros stios depende de outros sinais presentes na cadeia polipeptdica finalizada ou no prprio mRNA (3UTR) e da ligao a elementos do citoesqueleto.

Estabilidade do mRNA no citoplasma

- A expresso gnica pode ser controlada pela mudana na estabilidade do mRNA: mRNA de genes para -globina: meia-vida maior que 10 horas (estveis) mRNA para protenas reguladoras (fatores de crescimento): 30 minutos ou menos (instveis) - A meia-vida mdia de um mRNA eucarioto de ~ 3 horas; - Seqncias longas na regio 3UTR, ricas em A e U, podem acelerar a degradao do mRNA pelo estmulo da remoo da cauda poli-A ou pelo reconhecimento de endonucleases especficas. - A estabilidade do mRNA de histonas depende da formao de uma ala em sua extremidade 3, sendo que sua degradao por nucleases parece estar acoplada traduo; - O tamanho da cauda poli-A de mRNAs de eucariotos pode ser especificamente controlado, podendo sofrer remoo ou adio de As.

RNA anti-senso
Ao de um RNA regulador, sintetizado independentemente, que pareia com o RNA senso, inibindo sua traduo devido a: - bloqueio do seu processamento ou transporte; - indisponibilidade do stio de incio da traduo; - degradao seletiva do dsRNA pela ao de endonucleases.

Interferncia por RNA (RNAi)

Controle da Traduo: Vigilncia do mRNA no citoplasma

Controle da Traduo (cont.)

Bloqueio da seqncia Shine-Dalgarno extremidade 5 do mRNA (em eucariotos). (em procariotos) ou da

Sntese protica em eucariotos eIFs: mltiplos fatores de iniciao A) Semelhanas com procariotos: - Subunidade menor (40S) forma um complexo de iniciao com o mRNA e o tRNA iniciador - GTP clivado para fazer a ligao com a subunidade maior (60S)

B) Diferenas com procariotos:

- tRNA iniciador no formilado - tRNA iniciador e GTP formam um complexo isolado com eIF2, INDEPENDENTE da subunidade menor - tRNA iniciador est ligado subunidade menor ANTES do mRNA se ligar - Hidrlise de ATP necessria para a ligao do mRNA - Existe um nmero muito maior de fatores de iniciao e estes so protenas com muitas subunidades - Presena da extremidade 5-cap no mRNA necessria para a iniciao

- Escolha do AUG - Somente o cdon AUG o cdon de iniciao eficiente -AUG localizado mais prximo extremidade 5 quase sempre o escolhido (10 a 100 nt) +1 A/G NNAUG G: seqncia Kozak -3 se Y nessa posio, esse AUG no ser utilizado
-Rpida dissociao dos ribossomos eucariticos aps o termino da traduo limita a utilizao de cdons AUG internos. - A fosforilao do fator de iniciao eIF2 por protenas quinases diminui a taxa total de sntese protica, uma vez que tambm causa a reduo do fator eIF2B, responsvel por sua reciclagem.

Exemplo: Controle da expresso do grupo heme pela ativao de um inibidor da sntese protica -Deficincia de heme: ativa um inibidor da iniciao da sntese protica chamado: inibidor controlado pelo heme (HCI) -presena de heme: HCI INATIVO; ausncia de heme: HCI ATIVO. - HCI ativo: quinase especfica que fosforila a subunidade do eIF2

- A fosforilao de apenas 20 a 30% do eIF2 suficiente para PARAR a sntese protica, pois todo o eIF2B (que est presente em quantidades muito menores que eIF2) fica seqestrado no complexo eIF2-eIF2B e no fica mais disponvel para reciclar os eIF2 remanescentes no fosforilados.

- eIF2 fosforilado tem baixa afinidade por GTP .

- Protenas que se ligam extremidade 5 dos mRNAs promovem um controle negativo da traduo Exemplo: controle do estoque de ons ferro na clula
- Ferritina: protena que estoca ons Fe intracelular - Transferrina: protena que promove a entrada de ons Fe na clula

- A concentrao de ferritina depende da quantidade de tomos de Fe solveis. Varia de um complexo ribonucleoprotico INATIVO para um complexo polissmico ATIVO (ativamente traduzindo), aps a exposio ao Fe - Seqncia de 30 nt na extremidade 5 do mRNA para ferritina elemento que responde ao Fe (IRE): se dobra em forma de ala, onde se liga uma protena reguladora negativa (aconitase citoslica) quando essa protena no est ligada ao Fe - Quando existe Fe, a aconitase se dissocia do mRNA, pois est ligada ao Fe, e a taxa de traduo elevada em mais de 100 vezes

Exportao de protenas secretadas

SRP: partcula de reconhecimento de sinalpequeno complexo RNAprotena que inicia a exportao de protenas secretadas. As protenas eucariticas mais bem entendidas so as sintetizadas por polissomas ligados ao retculo endoplasmtico (RE). A translocao atravs da membrana do RE iniciada enquanto a protena ainda est sendo sintetizada (secreo simultnea traduo). Caracterstica comum a todas as protenas que entram no RE: extenso especial N-terminalseqncia sinal (ou peptdeo sinal): 15 a 30 aminocidos, rico em ac hidrofbicos. Peptidase sinal: protease que desliga o peptdeo sinal. No lmen do RE a protena modificada pela adio de grupamentos carboidratos, que facilitam o seu transporte ao destino final. SRP tem esse nome porque ela interage especificamente com a seqncia sinal de protenas secretrias nascentes. Ela feita de RNA 7SL e 6 diferentes compostos proticos altamente ligados que variam de 9 a 72 kDa.

Processamento posterior traduo

- Modificao do produto protico final, atravs de uma nova etapa de processamento - Remoo da metionina inicial por exopeptidase especial; - Seqncia sinal N-terminal retirada com a translocao atravs da membrana; - Adio de grupamentos carbohidratos durante a sua passagem pelo RE; -Corte de seqncias internas por endopeptidases para gerar protenas ativas, a partir de precursores grandes e inativos Exemplo: - Sntese de hormnios insulina: (figura) Pr-pr-insulina: 110 ac; Pr-insulina: 86 ac. (sem a seqncia. sinal) Insulina ativa: 51 ac. (sem os 35 ac. internos da cadeia C)

Proteolytic processing of proalbumin and proinsulin, typical of processing in the continuous and regulated secretion pathways, respectively. The endoproteases that function in such processing cleave Cterminal to sequences of two consecutive basic amino acids. (a) The endoprotease furin acts on the precursors of constitutive secretory proteins. (b) Two endoproteases, PC2 and PC3, act on the precursors of regulated secretory proteins. The final processing of many such proteins is catalyzed by a carboxypeptidase that sequentially removes two basic amino acid residues at the C-terminus of a polypeptide.

Proteolytic processing of insulin The mature insulin molecule consists of two polypeptide chains (A and B) joined by disulfide bonds. It is synthesized as a precursor polypeptide (preproinsulin) containing an aminoterminal signal sequence that is cleaved during transfer of the growing polypeptide chain to the endoplasmic reticulum. This cleavage yields a second precursor (proinsulin), which is converted to insulin by further proteolysis, removing the internal connecting polypeptide.

Degradao seletiva de protenas

- Sob severa falta de nutrientes a protelise celular ocorre nos lisossomas - Sistema proteoltico, no lisossomal que requer ATP utiliza UBIQUITINA para sinalizar as protenas que sero alvo para degradao - A ubiquitina uma molcula de 76 ac., seqncia conservada desde leveduras at o homem, ativada por reaes ~ s das aminoacil-tRNA-sintetases - As ubiquitinas ativadas so transferidas para o substrato protico, formando ligaes isopeptdicas entre o grupamento -amino da lisina e o terminal carboxlico da glicina da ubiquitina

- A protena ubiquitinada degradada, liberando a ubiquitina intacta para ser utilizada novamente. A ligao da ubiquitina e os passos de degradao necessitam de ATP - 10 a 20% das histonas H2A so ubiquitinadas. A degradao seletiva de histonas pode contribuir para a transio da cromatina inativa para ativa

Degradao seletiva de protenas

-Protenas destinadas degradao so sinalizadas atravs de sua ubiquitinao, sendo, ento, reconhecidas por proteossomos que as degradam

- Durante a ubiquitinao, as ubiquitinas ativadas so transferidas para o substrato protico, formando ligaes isopeptdicas entre o grupamento -amino da lisina e o terminal carboxlico da glicina da ubiquitina.