Tema 3.

INTRODUCCIN A LAS TCNICAS INSTRUMENTALES DE ANLISIS

1. INTRODUCCIN

MUESTRA

PROCESO ANALTICO
OPERACIONES PREVIAS MEDIDA Y TRANSDUCCIN DE LA SEAL ANALTICA TOMA Y TRATAMIENTO DE DATOS

RESULTADOS

TCNICA

principio cientfico fundamental que proporciona informacin analtica sobre la composicin de la materia.

MTODO

aplicacin de una tcnica para la resolucin de un problema analtico

PROCEDIMIENTO

instrucciones para aplicar un mtodo

PROTOCOLO

descripcin especfica y detallada de la aplicacin de un mtodo

Espectroscopa de Absorcin UV-Visible Determinacin de fosfato en agua por Espectroscopia Absorcin UV-visble Procedimientos: ASTM AOAC Protocolo: tomar X ml de muestra y aadir Y ml de reactivo....

2. PRINCIPALES TIPOS DE TCNICAS ANALTICAS

Tcnicas espectroscpicas Espectrofotometra ultravioleta-visible Espectrofotometra de fluorescencia y fosforescencia Espectrometra atmica (emisin y absorcin) Espectrofotometra de infrarrojo Espectroscopa Raman Espectroscopa de rayos X Tcnicas radioqumicas Espectroscopa de resonancia magntica nuclear Espectroscopa de resonancia de spin electrnico Tcnicas electroqumicas Potenciometra Voltamperometra Tcnicas voltamperomtricas Tcnicas de redisolucin Tcnicas amperomtricas Culombimetra Electrogravimetra Conductimetra Tcnicas cromatogrficas Cromatografa de gases Cromatografa lquida de alta resolucin Tcnicas diversas Anlisis trmico Espectrometra de masas Tcnicas cinticas Tcnicas acopladas CG-MS ICP-MS CG-IR

3. COMPONENTES DE UN INSTRUMENTO

Funcin del instrumento

convierte una seal analtica que no puede es detectable ni comprensible por un ser humano en una forma que s lo es.

Generadores de Seales
Indica la presencia del analito

La aplicacin de una seal externa a la muestra, con modificacin subsecuente de la misma por el analito (espectroscopa de absorcin) la creacin de un ambiente sobre la muestra, que permite al analito producir una seal (las mediciones potenciomtricas)

Transductor de entrada (detector)

Convierte un tipo de seal en otro
Cantidad fsica medida Transductor de entrada Salida elctrica Corriente Voltaje Corriente Corriente Resistencia Voltaje

Concentracin de especies electroactivas Actividad inica en solucin Intensidad luminosa Temperatura

Celda polarogrfica Electrodo selectivo de iones Fototubo Fotodiodo Termistor Termopar

Procesador de seales modifica la seal transducida para que se adecue al dispositivo de lectura
Amplificacin Conversin analgico-digital Atenuacin Conteo Conversin corriente-voltaje Conversin digital-analgica Filtrado Integracin Rectificacin Conversin voltaje-corriente

Transductor de salida (lectura)

convierte la seal procesada en una seal entendible por el observador
Impresoras alfanumricas Medidores digitales Disco duro Disco flexible Registradores (y-t) osciloscopios Pantalla catdica, monitor de video Cassete de cinta

4. SELECCIN DE UN MTODO ANALTICO

SELECCIN DE UN MTODO ANLTICO

Qu exactitud y precisin se precisa?

De cunta muestra se dispone? Cul es el intervalo de concentracin del analito? Qu componentes de la muestra interferirn? Cules son las propiedades fsica y qumicas de la matriz de la muestra? Cuntas muestras deben analizarse?

CRITERIOS NUMRICOS PARA SELECCIONAR MTODOS ANALTICOS

Criterio 1. Precisin 2. 3. 4. 5.

6. TABLA 6 OTRAS CARACTERSTICAS A TENER EN CUENTA EN LA ELECCIN DEL MTODO 1. 2. 3. 4. 5. Velocidad Facilidad y comodidad Habilidad del operador Coste y disponibilidad del equipo Coste por muestra

Parmetro de calidad Desviacin estndar absoluta, coeficiente de variacin, varianza Exactitud Error absoluto sistemtico, error relativo sistemtico Sensibilidad Sensibilidad de calibracin, sensibilidad analtica Lmite de deteccin Blanco ms tres veces la desviacin estndar del blanco Intervalo Concentracin de entrConcentracin entre lmite de concentracin cuantificacin (LOQ) y Lmite de linealidad (LOL) Selectividad Coeficiente de selectividad

PRECISIN

Se define como el grado de concordancia mutua entre los datos que se han obtenido de una misma forma La precisin mide el error aleatorio, o indeterminado, de un anlisis Los parmetros de calidad de la precisin son la desviacin estndar absoluta, la desviacin estndar relativa, la desviacin estndar relativa de la media, el coeficiente de variacin y la varianza

EXACTITUD

La exactitud mide el error sistemtico, o determinado, de un mtodo analtico La exactitud mide se define por la ecuacin exactitud = - xt

SENSIBILIDAD

La sensibilidad de un instrumento o de un mtodo mide su capacidad de discriminar entre pequeas diferencias en la concentracin del analito sensibilidad de calibracin: pendiente (m) de la curva de calibracin a la concentracin de inters. S = mc + Sbl sensibilidad analtica : = m / ss ss desviacin estndar de las seales

LMITE DE DETECCIN (LD)

Concentracin

o el peso mnimo de analito que pueden detectarse para un nivel de confianza dado

Seal correspondiente al LD

Sm = Sbl + 3 sbl
Concentracin correspondiente al LD

S = mc + Sbl

Sm = mcm + Sbl

Sbl seal media del blanco,

cuando n = 20 - 30

Sm - Sbl Cm = m

3 sbl Cm = m

sbl desviacin estndar

del blanco

LMITE DE CUANTIFICACIN

Concentracin

o el peso mnimo de analito que se utiliza en la prctica que se emplea para cuantificar

Seal correspondiente al LOQ

Sm = Sbl + 10 sbl
Concentracin correspondiente al LOQ

S = mc + Sbl

Sm = mcm + Sbl

Sbl seal media del blanco,

cuando n = 20 - 30

Sm - Sbl Cm = m

10s bl Cm = m

sbl desviacin estndar

del blanco

LMITE DE RESPUESTA LINEAL

Concentracin

o el peso mnimo de analito a partir de la cual deja de existir una relacin lineal entre seal y concentracin

INTERVALO TIL

Intervalo de calibracin que se

emplea en la prcica, comprendido entre LOQ y LOL

SELECTIVIDAD (K) La selectividad de un mtodo analtico denota el grado de ausencia de interferencias debidas a otras especies contenidas en la matriz de la muestra KB,A = mB/mA; KC,A = mC/mA K =0 no hay interferencia

K <0 el interferente causa una reduccin de la seal del analito

K >0 el interferente causa un aumento de la seal del analito

S = mA cA + mB cB + mC cC + Sbl
S = mA(cA + KB,A cB + KC,A cC) +Sbl

4. SEALES Y RUIDO

MEDIDAD ANALTICA

SEAL RUIDO

Informacin acerca del analito

Informacin indeseable

El valor promedio de la seal de ruido N es constante e

independiente de la magnitud de la seal total S.

La relacin seal-ruido (S/N) es un parmetro de calidad mucho

mejor que el ruido solo.

x S/ N = s

RUIDO QUMICO

Variaciones no controladas del equilibrio qumico: cambios de

temperatura, presin, intensidad luminosa

RUIDO INSTRUMENTAL

Ruido trmico (Johnson)

Agitacin o movimiento de partculas cargadas Ruido de disparo Movimientos de partculas cargadas a travs de una unin Ruido de parpadeo Depende de la frecuencia (1/f) Ruido ambiental Depende del entorno

5. MTODOS DE CALIBRADO
En muchos tipos de anlisis qumico se mide la respuesta del procedimiento analtico a cantidades conocidas de analito, y basndose en ellas se puede interpretar la respuesta de una muestra de contenido desconocido
5.1 MTODO PATRN EXTERNO Comparacin de las seales de la muestra con un conjunto de seales que ofrecen individualmente "muestras de calibracin", (disoluciones patrn)
Estndares de diferente concentracin del analito que han sido preparados artificialmente para que su matriz sea semejante a la de la muestra real.

No deben usarse estndares puros, puede conducir a errores sistemticos importantes. Se someten al proceso analtico las muestras de calibracin y la muestra problema de forma independiente.

El conjunto de las seales de calibrado permite establecer una relacin inequvoca entre la seal y la concentracin de analito, que comnmente se denomina "recta de calibrado" y que idealmente es una relacin lineal sealconcentracin en el intervalo dado de concentraciones. La concentracin de analito en la muestra se consigue por interpolacin
REGRESIN LINEAL SENCILLA O DE REGRESIN POR MNIMOS CUADRADOS

Proporciona una relacin lineal entre la cantidad de analito (x) y la magnitud de la variable medida (y) que incluye a la mayora de los puntos Los errores en los valores de y son mayores que los errores en los valores de x

Las desviaciones estndar en los valores de y son similares

La mejor lnea recta ser la que se obtiene por minimizacin de las desviaciones verticales entre los puntos y la lnea (la distancia entre los puntos
experimentales y la recta sean mnimas para todos y cada uno de los puntos)
Desviacin vertical (residual) = di
di = yi y = yi (m xi + b) Pueden ser + o -, por ello usamos di2 di2 = (yi y)2 = (yi m xi - b)2

xiyi

C
Ecuacin de la recta: y = m x + b
m = pendiente = y

m=

xy (x y)/N
x2 (x)2 /N

x b = ordenada en el origen cuando x = 0

b=ymx
Si la relacin entre seal y concentracin no es lineal, puede resultar complejo encontrar la funcin de calibracin correspondiente. Es ms practico reducir el margen de aplicacin del procedimiento analtico al rango de concentraciones en el que existe linealidad.

Coeficiente de correlacin
Se emplea como una medida de la correlacin entre dos variables Indica si la minimizacin que se ha llevado a cabo es correcta. Ello indicar que existe el mismo n de puntos por arriba y por debajo de la recta y r = 1,000 o muy prximo a dicho valor

Curva de calibracin Siempre debe graficarse

5.2 ADICIONES PATRN (ADICIN ESTNDAR) El mtodo de la adicin estndar es aconsejable cuando se quiere asegurar la correcta similitud entre el comportamiento de patrones y el problemas. En las muestras complejas o con matrices difcilmente reproducibles en los patrones (alimentos, muestras biolgicas o medio ambientales) es aconsejable el uso de la adicin estndar. Son mtodos para estandarizar y analizar dentro de la propia matriz de la muestra (calibracin metodolgica "in situ"). PROCEDIMIENTO -Consiste en preparar los patrones con la misma muestra a analizar y aadir una cantidad conocida de la especie qumica a determinar. -A n alcuotas de disoluciones de calibracin con concentraciones crecientes se la aaden la misma cantidad de muestra.

Todas las disoluciones contienen una concentracin de analito que es la suma de la original de la muestra (se busca) y la aadida

-Se someten las n alcuotas de muestras reales enriquecidas al proceso analtico, obtenindose una seal para cada alcuota.

-Se representan las seales en funcin de la concentracin del estndar aadido. Se obtendr una recta de calibrado paralela a la que se obtendra con los estndares sin adicin de muestra -La seal sobre el eje de ordenadas enriquecida. es la que origina la muestra no

-La concentracin de analito en al muestra se obtiene por extrapolacin de la recta de calibrado, su cruce con la prolongacin del eje de abscisas proporciona el dato buscado.

Siendo C= Cx + Cs
Concentracin del patrn adicionado Concentracin del problema

Cx

Cs

Yx = Seal debida al problema Ys = Seal debida al patrn

5.3 MTODO DEL ESTNDAR INTERNO OBJETIVO: -minimizar fluctuaciones instrumentales -establecer referencias con fines cualitativos y cuantitativos.

Se utiliza un estndar o patrn interno (I) diferente al empleado en la calibracin convencional. El patrn interno es una cantidad conocida de un

compuesto o elemento, no presente en la matriz de la muestra, que se adiciona tanto a los estndares como a la muestra problema
PROCEDIMIENTO

Supongamos una muestra que contiene el analito X que queremos determinar, el procedimiento consiste en preparar: 1.- Mezclas conocidas del patrn interno (I) y de los patrones del analito/os a determinar (X) para construir una curva patrn. 2.- Cuando una cantidad conocida de patrn se agrega a una muestra problema, la curva de calibrado puede utilizarse para hallar la concentracin del problema.

3.-Las fluctuaciones en la seal afectan por igual al analito y al patrn pero no a la relacin.
Seal debida X Seal debida I

Y X

Concentracin X Concentracin I

Caractersticas del patrn interno -compatibilidad (p.e. solubilidad) con la muestra y el patrn -caractersticas qumicas y fisico-qumicas similares al analito -respuesta discriminada respecto del analito