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Diagnóstico Laboratorial das Viroses

Prof: Marcos L. Moreli

Diagnóstico Laboratorial das Viroses  Introdução   Isolamento e Identificação de Vírus Diagnóstico Sorológico das Infecções Virais  Diagnóstico Molecular de Infecções Virais .

.  Sorologia: São utilizados métodos para detecção de anticorpos específicos. antígenos e genomas virais. • Detecção direta do vírus. produzidos pelo hospedeiro em resposta à infecção viral.Diagnóstico Laboratorial das Viroses   Introdução O diagnóstico de infecções virais é baseado em dois parâmetros:  Isolamento e Identificação do vírus: • Através de sistemas vivos( cultura de células) nos quais os vírus são propagados.

deve ser acondicionado em gelo seco. . As partículas virais apresentam instabilidade a fatores ambientes.Diagnóstico Laboratorial das Viroses   Isolamento e Identificação de vírus: A colheita do material deve ser feita na fase aguda da doença.  Quando o material for remetido para locais distantes. sem congelar.  O material deve ser transportado imediatamente para o laboratório. mantido em temperatura baixa( gelo). No entanto.

Diagnóstico Laboratorial das Viroses Tipos de materiais indicados para exame virológico .

Diagnóstico Laboratorial das Viroses  Isolamento e Identificação de vírus:  Inoculação experimental de vírus em sistemas hospedeiros  Propagação de vírus em animais de laboratório   Propagação de vírus em ovos embrionados Propagação de vírus em culturas de células .

.Diagnóstico Laboratorial das Viroses  Reação de Hemaglutinação Os vírus se ligam diretamente às hemácias formando agrupamento s visíveis.

Diagnóstico Laboratorial das Viroses  Reação de Hemadsorção Uma suspensão de hemácias é adicionada à cultura e estas irão se ligar às proteínas virais expressas na superfície das células infectadas. .

Diagnóstico Laboratorial das Viroses  Diagnóstico sorológico das infecções virais   Finalidades Diagnosticar uma enfermidade causada por vírus. .   Identificar novos tipos de vírus isolados. Estudar epidemiologicamente o comportamento de uma virose numa dada comunidade.

Diagnóstico Laboratorial das Viroses  Teste de Neutralização Os vírus infecciosos quando interagem com o anticorpo específico são neutralizados e por conseguinte perdem a capacidade de infectar células permissivas .

Diagnóstico Laboratorial das Viroses  Teste de Inibição da Hemaglutinação A capacidade de hemaglutinação de um vírus é bloqueada quando esse vírus reage com o anticorpo específico .

Ag e o complemento são misturados e incubados. é fixado por um complexo AgAc. 1ª fase: o Ac. um agente lítico.Diagnóstico Laboratorial das Viroses  Teste de Fixação do Complemento O complemento. 2ª fase: O complexo formado por hemáciaAc anti-hemácia é adicionado a mistura .

Diagnóstico Laboratorial das Viroses  Teste de Imunofluorescência Direta Um conjugado de especificidade conhecida é adicinado as células infectadas por vírus que estão fixados numa lâmina de microscópio. ocorrendo formação de complexo Ag-Ac que é visualizado pela imunofluorescência .

as lâminas são lavadas. 2ª fase:Um Ac imunoglobulina + fluoresceína é conjugado e visto a microscopia de fluorescência .Diagnóstico Laboratorial das Viroses  Teste de Imunofluorescência Indireta 1ª fase:Ac não marcados são adicionados a células infectadas fixadas a uma lâmina de microscópio. Após incubação.

Diagnóstico Laboratorial das Viroses  Teste de Aglutinação Passiva Ag livres são agrupados com partículas carreadoras com Ac específicos .

O resultado é dado pela mudança de cor da reação. .Diagnóstico Laboratorial das Viroses  Teste Imunoenzimático (ELISA) Ac conjugados com enzimas.

Separação das proteínas virais usando o método de eletroforese em gel.Diagnóstico Laboratorial das Viroses  Immunoblotting .Western Blotting (WB) Blotting significa transferência de DNA. .

Diagnóstico Laboratorial das Viroses     Diagnóstico Molecular de Infecções Virais Detecção Qualitativa do Ácido Nucléico Viral Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) Reação de Hibridização .