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Diagnóstico Laboratorial das Viroses

Prof: Marcos L. Moreli

Diagnóstico Laboratorial das Viroses  Introdução   Isolamento e Identificação de Vírus Diagnóstico Sorológico das Infecções Virais  Diagnóstico Molecular de Infecções Virais .

antígenos e genomas virais. . • Detecção direta do vírus.Diagnóstico Laboratorial das Viroses   Introdução O diagnóstico de infecções virais é baseado em dois parâmetros:  Isolamento e Identificação do vírus: • Através de sistemas vivos( cultura de células) nos quais os vírus são propagados. produzidos pelo hospedeiro em resposta à infecção viral.  Sorologia: São utilizados métodos para detecção de anticorpos específicos.

. No entanto. mantido em temperatura baixa( gelo).  Quando o material for remetido para locais distantes.Diagnóstico Laboratorial das Viroses   Isolamento e Identificação de vírus: A colheita do material deve ser feita na fase aguda da doença. deve ser acondicionado em gelo seco.  O material deve ser transportado imediatamente para o laboratório. As partículas virais apresentam instabilidade a fatores ambientes. sem congelar.

Diagnóstico Laboratorial das Viroses Tipos de materiais indicados para exame virológico .

Diagnóstico Laboratorial das Viroses  Isolamento e Identificação de vírus:  Inoculação experimental de vírus em sistemas hospedeiros  Propagação de vírus em animais de laboratório   Propagação de vírus em ovos embrionados Propagação de vírus em culturas de células .

.Diagnóstico Laboratorial das Viroses  Reação de Hemaglutinação Os vírus se ligam diretamente às hemácias formando agrupamento s visíveis.

.Diagnóstico Laboratorial das Viroses  Reação de Hemadsorção Uma suspensão de hemácias é adicionada à cultura e estas irão se ligar às proteínas virais expressas na superfície das células infectadas.

Estudar epidemiologicamente o comportamento de uma virose numa dada comunidade.   Identificar novos tipos de vírus isolados. .Diagnóstico Laboratorial das Viroses  Diagnóstico sorológico das infecções virais   Finalidades Diagnosticar uma enfermidade causada por vírus.

Diagnóstico Laboratorial das Viroses  Teste de Neutralização Os vírus infecciosos quando interagem com o anticorpo específico são neutralizados e por conseguinte perdem a capacidade de infectar células permissivas .

Diagnóstico Laboratorial das Viroses  Teste de Inibição da Hemaglutinação A capacidade de hemaglutinação de um vírus é bloqueada quando esse vírus reage com o anticorpo específico .

1ª fase: o Ac.Diagnóstico Laboratorial das Viroses  Teste de Fixação do Complemento O complemento. 2ª fase: O complexo formado por hemáciaAc anti-hemácia é adicionado a mistura . Ag e o complemento são misturados e incubados. é fixado por um complexo AgAc. um agente lítico.

ocorrendo formação de complexo Ag-Ac que é visualizado pela imunofluorescência .Diagnóstico Laboratorial das Viroses  Teste de Imunofluorescência Direta Um conjugado de especificidade conhecida é adicinado as células infectadas por vírus que estão fixados numa lâmina de microscópio.

as lâminas são lavadas.Diagnóstico Laboratorial das Viroses  Teste de Imunofluorescência Indireta 1ª fase:Ac não marcados são adicionados a células infectadas fixadas a uma lâmina de microscópio. 2ª fase:Um Ac imunoglobulina + fluoresceína é conjugado e visto a microscopia de fluorescência . Após incubação.

Diagnóstico Laboratorial das Viroses  Teste de Aglutinação Passiva Ag livres são agrupados com partículas carreadoras com Ac específicos .

O resultado é dado pela mudança de cor da reação. .Diagnóstico Laboratorial das Viroses  Teste Imunoenzimático (ELISA) Ac conjugados com enzimas.

. Separação das proteínas virais usando o método de eletroforese em gel.Diagnóstico Laboratorial das Viroses  Immunoblotting .Western Blotting (WB) Blotting significa transferência de DNA.

Diagnóstico Laboratorial das Viroses     Diagnóstico Molecular de Infecções Virais Detecção Qualitativa do Ácido Nucléico Viral Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) Reação de Hibridização .