Antibiograma

Antibiograma: son mtodos in Vitro que determinan la susceptibilidad de los microorganismos a una variedad de agentes antimicrobianos, bajo condiciones de laboratorio especfica y estandarizada.

SENSIBLE

RESISTENTE

OBJETIVOS

MTODOS - ANTIBIOGRAMA

Interpretacin del Antibiograma

La interpretacin de los resultados obtenidos permite clasificar a los microorganismos en categoras clnicas: sensibles, intermedios o resistentes.
C.I.M: concentracin mnima inhibitoria representa la mnima cantidad de antimicrobiano capaz de inhibir el crecimiento de un microorganismo.
C.M.B: concentracin mnima bactericida concentracin mnima que mata el microorganismo.

Utilidad de Antibiograma
Terapia Antimicrobiana dirigida Conocer el fenotipo de sensibilidad de un microorganismo. Perfil epidemiolgico institucional Seguimiento y anlisis de brotes

Interpretacin
1. 2. Identificacin del microorganismo (a nivel de especie) Anlisis de fenotipo: susceptibilidad / Resistencia 1. Grupos (familias) de agentes antimicrobianos 2. Indicadores de resistencia a los antimicrobianos Definir Fenotipo 1. Fenotipos comunes 2. Fenotipos inusuales 3. Fenotipos "Imposibles Deducir mecanismos bioqumicos de resistencia Importancia clnica de la resistencia inferirse Redefinir Categoras de identificacin clnica

3.

4. 5. 6.

MTODO DE DILUCION
Consiste en determinar el crecimiento de una bacteria en presencia de concentraciones decrecientes de un mismo antibitico. Se observa el crecimiento de los microorganismos mediante la aparicin de turbidez

Antibiograma por dilucin

Tcnica de referencia en la mayora de los estudios clnicos de susceptibilidad a antimicrobianos. Entrega un resultado cuantitativo, ya que permite determinar la concentracin inhibitoria mnima (CIM). Se puede realizar en medio lquido (dilucin en caldo) o en medio slido (dilucin en agar). Mtodo complejo y de alto costo.

Lectura del CIM

Dilucin seriada en caldo

CIM

Mtodo de Difusin en Disco (Baeur-Kirby)

Es el mas difundido. Prueba la inhibicin o resistencia de los microorganismos, enfrentndolos con los medicamentos que se encuentran impregnados en pequeos discos.

Antibiograma por difusin (Tcnica de Kirby-Bauer)

Es el mtodo ms usado Es prctico y sencillo de realizar e implementar Permite analizar un gran nmero de antibiticos al mismo tiempo y bajo las mismas condiciones

Entrega un resultado cualitativo (bacteria sensible o resistente)

Antibiograma por difusin (Tcnica de Kirby-Bauer)

Anlisis de varios antibiticos en un mismo ensayo

Resistente (No hay halo de inhibicin)

Sensible (Presencia de halos de inhibicin)

Medio de cultivo utilizado

Mueller Hinton Su reproducibilidad aceptable. Baja concentracin de inhibidores, condicin crtica para evaluar sulfonamidas, trimetoprim y tetraciclina. El crecimiento satisfactorio de patgenos no exigentes. Existir ya gran experiencia en estudios de susceptibilidad.

Factores que influyen en el Agar

pH: El rango de pH va de 7,2 a 7,4. variacin de cationes divalentes:
Ca y Mg: Afectan los halos de inhibicin para aminoglucsidos y tetraciclinas en Pseudomonas aeruginosa.

Profundidad del Agar: La profundidad recomendada de la capa de agar es de 3 a 5 mm.

Factores que afectan la actividad antibacteriana in vitro

pH del medio de cultivo: algunos antibiticos son activos a pH cido (nitrofurantona) y otros lo son a pH alcalino (aminoglucsidos). Componentes del medio de cultivo: pueden antagonizar al antibitico (extracto de levadura antagoniza a sulfonamidas). Estabilidad del medicamento: algunos antibiticos se inactivan a la temperatura de cultivo (clortetraciclina, en menor grado penicilina) Tamao del inculo: si hay muchas bacterias, la susceptibilidad es menor y pueden aparecer mutantes resistentes.

Tiempo de incubacin: si es muy breve los m.o. no mueren; si es muy largo, pueden aparecer mutantes resistentes o inactivarse el medicamento.

PREPARACIN DEL INCULO Y ESTANDARIZACIN DE LA SUSPENSIN

En ambos mtodos, la turbidez de la suspensin debe ser estandarizada al estndar 0,5 de McFarland (que corresponde a aproximadamente 1,5 X 10 -8 CFU/ml).

Preparacin del Inculo

Se prepara el inculo con ajuste a la turbidez McFarland 0,5 que corresponde aun dimetro de1.5 x10 UFC/ML, directo en caldo de colonias frescas en agar no selectivo.

SUSPENSIN DIRECTA DE LAS COLONIAS

Se trabaja con cultivos jvenes.

En esta tcnica se estandariza el inculo al mismo tiempo que se

prepara la suspensin.
3 A 5 COLONIAS SS CALDO COMN

AJUSTAR TURBIDEZ 0,5 ESCALA DE McFARLAND

ESTABILIZAR 15 MIN.

FASE LOGARTMICA DE CRECIMIENTO

Se usa para la mayora de microorganismos de rpido crecimiento.

3 A 5 COLONIAS

SS CALDO COMN

INCUBACIN A 35 0 C 2-6 HORAS

AJUSTAR TURBIDEZ 0,5 ESCALA DE McFARLAND

Inoculacin de la placa
Con un hisopo estril en tres direcciones inocule toda la placa (giros de 60).

Aplicacin de sensidiscos
separacin: los discos deben de estar separados24 mm (del centro de un sensidisco al otro ms cercano). Cantidad: 12 unidades en placas de 150mm y 5 unidades en placas se 100mm.

MTODO AUTOMTICO

Medicin de los halos

Se usa una regla y se mide el dimetro del halo de inhibicin partiendo de desde donde est el disco de antibitico hasta donde se inhibi el crecimiento. La longitud obtenida despus se compararn con estndares que nos dirn si el

Lectura e interpretacin de los resultados

Categoras de interpretaron: Sensible: El
microorganismo presenta un gran rea de inhibicin causada por el frmaco. 95% xito

Intermedio: Se presenta
un halo de inhibicin mas reducido.

Antibitico Ampicilina Amikacina Sulfisoxasol Gentamicina Cloranfenicol Ceftriaxona Ciprofloxacin a Tetraciclina Acido Nalidixico Estrptomicina anamicina Trimetroprim/ Sulfametoxas ol

Resistente 13 14 12 12 12 12 15 14 13 11 13

Intermedia 14 - 16 15 16 13 - 16 13 14 13 - 17 14 20 16 - 20 15 - 18 14 18 12 14 14 - 17

Susceptible 17 17 17 15 18 21 21 19 19 15 18

10

11 15

16

 Mtodo de E-test:
Consiste en aplicar sobre un medio de cultivo, donde se encuentra el microorganismo a ensayar, tiras plsticas que llevan incluidas un gradiente de concentracin de un determinado ATB. Luego se incuba adecuadamente y se observa la formacin de una elipse de inhibicin de crecimiento.

Mtodo Automatizado:

Este mtodo se basa en micro diluciones sobre micro tubos. El crecimiento bacteriano se va a observar por la turbidez o fluorescencia de los micro tubos.
Es til para examinar una gran cantidad de muestras

bibliografia
Guia de suceptibilidad antimicrobiana de laboratorio de microbiologia-HNCH.