DIPLOMADO EN INMUNOHEMATOLOGA BSICA

Bases Tericas de la Inmunohematologa

QFI. Jos Antonio Arroyo Prez

Objetivos de aprendizaje
Al final del Mdulo, el alumno ser capaz de describir los siguientes conceptos:
1. 2. 3. 4. 5. 6. La reaccin antgeno-anticuerpo Mono y policlonalidad El sistema de complemento Factores que afectan la aglutinacin eritrocitaria Reacciones in-vitro y reacciones in-vivo El potencial Z

El sistema inmunolgico

Mecanismos
Celulares Moleculares

Proteccin
Virus Bacterias, Parsitos, etc.

El sistema inmunolgico
Respuesta inmune innata Existe desde el nacimiento
Se dirige globalmente contra las sustancias extraas No requiere un reconocimiento previo del agente patgeno

No se modifica tras la exposicin repetida

Barreras

Fsicas

Humorales

El sistema inmunolgico
Respuesta inmune innata
Barreras fsicas:
El epitelio de la piel. Los pulmones, la tos y los estornudos Las lgrimas y la orina Las mucosidades Pptidos antimicrobianos El cido gstrico y las peptidasas La microbiota comensal Proceso de expulsin por la tos Estructura de la piel

El sistema inmunolgico
Respuesta inmune innata

Barreras humorales Fiebre

Inflamacin

Inflamacin

Sistema del complemento

Coagulacin
Coagulacin

El sistema inmunolgico
Clulas del sistema inmune innato
Macrfagos, neutrfilos y clulas dendrticas (fagocitosis)

Fagocitosis

Las clulas asesinas naturales (Natural killers)

Mastocitos

Los basfilos y los eosinfilos

Destruccin de un helminto

El sistema inmunolgico
Respuesta inmune adaptativa o adquirida

Permite una respuesta mayor y dirigida casi exclusivamente al patgeno que la activ

Humoral: mediada por Linfocitos B, para la produccin de anticuerpos y la eliminacin de microorganismos extracelulares Celular: mediada por linfocitos T para la destruccin de clulas infectadas por microorganismos intracelulares donde los anticuerpos no tienen acceso

Permite el establecimiento de la memoria inmunolgica

El sistema inmunolgico
Respuesta inmune adaptativa o adquirida

El sistema inmunolgico
Clulas inmunidad adquirida
Macrfagos, neutrfilos y clulas dendrticas (fagocitosis)

Fagocitosis

Las clulas asesinas naturales (Natural killers)

Mastocitos

Los basfilos y los eosinfilos

Destruccin de un helminto

El sistema inmunolgico
Clulas inmunidad adquirida

Los Linfocitos T citotxicos (CD8+) destruyen clulas infectadas con microorganismos intracelulares (virus y algunas bacterias).

Los Linfocitos T colaboradores (CD4+) no eliminan clulas infectadas ni eliminan patgenos directamente. Su actividad modula la respuesta de otras clulas para que lleven a cabo estas tareas.

Linfocitos T Citotxicos

Linfocitos T Cooperadores

El sistema inmunolgico
Clulas inmunidad adquirida

Prolifera, se diferencia a clula plasmtica y produce anticuerpos Este complejo antgenoanticuerpo es fagocitado y procesado en pptidos

Los anticuerpos se unen a los patgenos que portan esos antgenos, dejndolos marcados para su destruccin

Identifican a los patgenos sin procesar cuando los anticuerpos de su membrana reconocen a su antgeno especfico

Linfocitos B

Los anticuerpos tambin pueden neutralizar toxinas bacterianas o evitar que los virus infecten nuevas clulas

El sistema inmunolgico
Memoria inmunolgica

Cuando los linfocitos B y T se activan y proliferan, algunas de las clulas no realizan funciones efectoras Si el patgeno vuelve a infectar al individuo, las clulas de memoria desencadenan una respuesta inmune mucho ms rpida e intensa

Se convierten en clulas de memoria con un largo periodo de vida

Estas clulas estarn presentes autorenovndose a y recordarn al patgeno que estimul su activacin

Reaccin antgeno-anticuerpo
Definiciones

Es toda sustancia que es reconocida por el sistema inmune y si adems desencadena una respuesta inmune, se define inmungeno

Incluyen estructuras de microorganismos (bacterias, virus, hongos y parsitos)

Eptopos o determinantes antignicos:

Los antgenos son:

anti = opuesto y "geno = generar o producir (que genera o crea oposicin)

Antgeno:

Protenas o polisacridos

Dentro de toda la estructura del antgeno, se denominan as las partes que son reconocidas de forma especfica

Reaccin antgeno-anticuerpo
Definiciones

Sustancias que por si solas no son capaces de provocar una respuesta inmune, si se combinan con una protena transportadora o adquieren capacidad inmungena (lpidos, cidos nucleicos, algunos frmacos)

Antgeno que a pesar de ser externo, no provoca una respuesta inmune debido a su estructura molecular. Si su estructura molecular cambia podra convertirse en inmungeno

Sustancia que en la mayora de los individuos es reconocida como Tolergeno por su sistema inmune, pero que en ciertos individuos induce una hipersensibilidad en el sistema inmune conocida como alergia

Hapteno:

Tolergeno:

Alrgeno:

Reaccin antgeno-anticuerpo
Anticuerpos
Los anticuerpos o inmunoglobulinas son protenas producidas por los linfocitos B en respuesta al reconocimiento de un antgeno Su funcin es la de neutralizar la accin daina del antgeno al unirse de forma especfica a los determinantes antignicos Estn formadas por cuatro cadenas de aminocidos, dos cadenas pesadas o cadenas H (heavy) y dos cadenas ligeras (light), que se unen entre s por puentes disulfuro, resultando una disposicin en forma de Y

Reaccin antgeno-anticuerpo
Anticuerpos
A la secuencia de aminocidos de los dominios amino terminales se les llama regiones variables (V), para distinguirlas de las regiones constantes (C) Los tramos dentro de las regiones V que muestran una extraordinaria diversidad se llaman regiones hipervariables Las tres regiones hipervariables de una cadena ligera, y las tres regiones hipervariables de la cadena pesada, pueden mantenerse juntas en el espacio tridimensional para formar la superficie de unin al antgeno

Reaccin antgeno-anticuerpo
Anticuerpos
Segn el isotipo de cadena H que posean las inmunoglobulinas se dividen en 5 clases, cada una con propiedades distintas (IgG, IgM, IgA, IgD, IgE)

Reaccin antgeno-anticuerpo
Naturaleza de la reaccin antgeno-anticuerpo: El concepto de la llave y la cerradura
El estudio de las interacciones entre antgeno-anticuerpo por medio de cristalografa de rayos X, muestran que el determinante antignico embona especficamente con la hendidura formada por el sitio de unin del anticuerpo
Las uniones que mantienen al antgeno en el sitio de unin con el anticuerpo son todas de naturaleza no-covalentes. Enlaces de hidrgeno, Enlaces electrostticos, Fuerzas de Van der Waals y Enlaces hidrofbicos

Todas estas uniones entre el antgeno y el anticuerpo aseguran que el antgeno se ajuste firmemente al anticuerpo

Reaccin antgeno-anticuerpo
Propiedades de la unin antgeno-anticuerpo
Reversibilidad: Debido a que las reacciones antgeno-anticuerpo se producen a travs de enlaces no covalentes, no son permanentes y por lo tanto pueden ser reversibles dependiendo de las condiciones fisicoqumicas en las que se produce Afinidad: Es la suma de las fuerzas de atraccin y repulsin que operan entre el determinante antignico y el sitio de unin del anticuerpo. La mayora de los anticuerpos tienen una gran afinidad por sus antgenos Avidez: Es la medida de la fuerza general de la unin de un solo antgeno que posee muchos determinantes antignicos con un anticuerpo multivalente. La avidez est influenciada por la valencia de los anticuerpos y la valencia del antgeno Un antgeno tiene mayor valencia cuando tenga mayor nmero de determinantes antignicos Un anticuerpo tiene mayor valencia cuando tenga mayor nmero de sitios de unin al antgeno

Reaccin antgeno-anticuerpo
Propiedades de la unin antgeno-anticuerpo
Especificidad Se refiere a la capacidad de un sitio de unin del anticuerpo para reaccionar con un nico determinante antignico Los anticuerpos pueden distinguir las diferencias en:
La estructura primaria de un antgeno Isoformas de un antgeno La estructura secundaria y terciaria de un antgeno

Reactividad cruzada Se refiere a la capacidad de un sitio de unin de un anticuerpo para reaccionar con ms de un determinante antignico pero con diferentes afinidades

Reaccin antgeno-anticuerpo
Factores que pueden afectar la medicin de las reacciones antgeno-anticuerpo

La nica manera de conocer que una reaccin antgeno-anticuerpo ha ocurrido es mediante algn medio de deteccin directa o indirecta de los complejos formados entre el antgeno y el anticuerpo

Reaccin antgeno-anticuerpo
Factores que pueden afectar la medicin de las reacciones antgeno-anticuerpo

La facilidad con que se pueden detectar reacciones antgeno-anticuerpo depender de una serie de factores

Afinidad Cuanto mayor es la afinidad de los anticuerpos para el antgeno, ms estable ser la interaccin

Avidez Las reacciones entre antgenos y anticuerpos multivalentes son ms estables y por lo tanto ms fciles de detectar

Proporcin entre antgenos y anticuerpos La proporcin entre la cantidad presente de antgenos y anticuerpos durante la reaccin influye en la deteccin de complejos

La forma fsica del antgeno Si el antgeno es particulado, se genera aglutinacin, pero si el antgeno es un soluble se produce precipitacin

Mono y policlonalidad
Cada determinante antignico, de cada uno de los antgenos del patgeno, induce un anticuerpo diferente

Cuando un agente extrao entra al organismo, el sistema inmunolgico desencadena una respuesta que incluye factores celulares y moleculares entre los que incluye la formacin de anticuerpos contra los determinantes antignicos del agente extrao

En este proceso, se producen simultneamente una gran variedad de anticuerpos, todos reaccionando contra el mismo agente extrao, pero cada uno de ellos contra un determinante antignico determinado

Mono y policlonalidad
Sistema clonal
Cada determinante antignico en la estructura del antgeno es reconocido solo por aquel linfocito B (clona) o grupo de linfocitos B (clonas) que posean en su membrana receptores capaces de reconocer y unirse especficamente a ese antgeno

Ms linfocitos que expresan receptores con la misma especificidad

Durante del proceso de proliferacin, algunos de los linfocitos se diferencian a linfocitos de memoria

Debido a que diferentes determinantes antignicos son reconocidos por diferentes clonas de Linfocitos B, en una respuesta inmune normal se producen una mezcla de anticuerpos contra el mismo antgeno: SUERO POLICLONAL

Mono y policlonalidad
Suero monoclonal
Si la inmunizacin se realizara con un antgeno que contuviera un solo determinante antignico se activara una sola clona de Linfocito B y se producira un nico anticuerpo

Esta situacin, no se produce en condiciones normales, pero en determinadas condiciones patolgicas aparecen neoplasias de clulas B y de los plasmocitos derivados de ellas (Mieloma mltiple)

Como todas las clulas del mieloma proceden de una misma clula, todas producen el mismo anticuerpo

Mono y policlonalidad
Obtencin de anticuerpos policlonales
A partir de un suero policlonal se pueden purificar los anticuerpos especficos para un antgeno determinado

Una vez obtenido el suero del animal inmunizado, se realiza una cromatografa de afinidad en columna. En esta tcnica, se recubren perlas de sefarosa con el mismo antgeno que se utiliz para la inmunizacin y se empaquetan en una columna

Posteriormente se hace pasar el suero a travs de la columna. Los anticuerpos especficos para el antgeno son retenidos sobre las perlas y el resto de los anticuerpos no especficos y protenas del suero sale por la parte inferior

El paso final es la ruptura de las uniones entre antgeno y anticuerpos, se realiza aadiendo a la columna una solucin hipertnica o con pH cido, con lo que los anticuerpos especficos se eluyen por la parte inferior

Mono y policlonalidad
Obtencin de anticuerpos monoclonales

1975 Kohler y Milstein

Obtencin de anticuerpos monoclonales mediante el uso de hibridomas

Mono y policlonalidad
Aplicacin de los anticuerpos monoclonales
Investigacin biomdica Diagnstico Catlisis Biosensores Vehculos Terapia

Mono y policlonalidad
Tipos de anticuerpos monoclonales
Debido a que los primeros mAb eran producidos en animales, cuando se aplicaban en humanos eran reconocidos como extraos por el sistema inmunitario humano y se produca una respuesta contra a ellos, bloqueando su efecto. Para corregir las deficiencias de los mAb surgieron los anticuerpos quimricos y humanizados
Anticuerpos quimricos (QAb)

Anticuerpos humanizados (HAb)

Anticuerpos bifuncionales (BAb)

Intervalo

El sistema del complemento

Introduccin

Componente del sistema inmune innato que se activa ante la presencia de agente externos

Constituido por un conjunto de molculas cuyas funciones son el incrementar la respuesta inflamatoria, facilitar la fagocitosis y dirigir la lisis celular

Los componentes se nombran con la letra C y un nmero: C1, C2, C3, C4, C5, C6, C7, C8, y C9. Esta nomenclatura se estableci en el orden cronolgico de su descubrimiento y no es necesariamente el orden de su participacin

Serie de reacciones consecutivas en cascada, de tal forma que a partir de cada uno de sus componentes se genera un producto activo que adems de continuar con la reaccin, puede tener otras acciones biolgicas

El sistema del complemento

Vas de activacin del complemento

Va clsica

Va alternativa
Va de las lectinas

El sistema del complemento

Va clsica