Transcrio e Processamento de RNA

Agradecimentos: Profa. Dra. Aline Maria da Silva Instituto de Qumica- USP

Bibliografia:
Genes VII - Benjamin Lewin Biologia Molecular Bsica-Arnaldo Zaha Lenhinger Principles of Biochemistry (3a. Ed.)

Replicao Transcrio
Transcrio Reversa

- Processo para sntese de todos os RNAs da clula - Reflete o estado fisiolgico da clula - O conjunto de genes expressos em uma dada situao varivel - Processo catalisado pelas RNAs polimerases

Replicao de RNA

Traduo

Protena

Principais Tipos de RNA

RNA mensageiro (mRNA): contm a informao gentica para a sequncia de aminocidos das protenas RNA transportador (tRNA): identifica e transporta os aminocidos at o ribossomo RNA ribossmico (rRNA): constituinte dos ribossomos

tRNA
-Estrutura secundria com grampos e alas formando um trevo -Alto nmero de bases modificadas depois da sua transcrio

Bases modificadas nos tRNAs

Processamento do precursor do tRNA

Modificao das bases

Processamento

tRNA maduro

Ribossomo bacteriano 70S (2,7 x 106)

Ribossomo Eucaritico 80S (4,6 x 106)

rRNAs:

Processamento do precursor do rRNA

RNA precursor 30S Metilao das bases

Clivagem

RNAs maduros

Exemplos de rRNAs: - Estrutura secundria com grampos e alas - Bases metiladas

E.coli:

Transcrio

DNA fita codificadora

DNA fita molde

RNA transcrito

Sntese de RNA: formao da ligao fosfodiester envolve o ataque nucleoflico do 3 OH da cadeia crescente no fosfato do carbono 5do ribonucleosdeo trifosfatado que ser incorporado

A RNA polimerase no requer um iniciador (primer) para iniciar a sntese do RNA

Bolha de transcrio
RNA polimerase

Fita molde

Direo da transcrio

Direo da transcrio

RNA polimerase de E.coli

RNA polimerase de

E.coli

Ligao ao promotor

As RNA polimerases no tem mecanismo de correo de erro (taxa de erro 10-5)

Centro cataltico

Reconhecimento especfico do promotor

Promotores de genes bacterianos

Regio -35 Regio -10 Posio +1

Reconhecimento e Ligao ao promotor

Incio da Transcrio

Deslocamento da subunidade sigma

Marcao do DNA com 32P

Footprinting de DNA

Tratamento com DNAse

Regies ligadas a RNA polimerase

Separar os fragmentos em uma eletroforese em gel de poliacrilamida. Visualizar fragmentos aps exposio a filme de Raio-X

Substituio do fator sigma controla a iniciao: Os distintos fatores sigma reconhecem promotores diferentes

Bolha de transcrio
RNA polimerase

Fita molde

Direo da transcrio

Terminao da transcrio atravs da formao do grampo de terminao

Terminao da transcrio dependente da protena Rho

Rho (46kDa, ativa como hexmero) move-se ao longo do RNA acompanhando a RNA polimerase

Com a pausa da RNA polimerase na sequncia de terminao, Rho alcana a enzima Rho desenrola o hbrido RNA-DNA

Sequncia de Terminao dependente de Rho: rica em C

A RNA polimerase bacteriana inibida por rifamicina (liga a subunidade beta)

A subunidade beta da RNA pol contem 5 stios de ligao para rifamicina O antibitico previne o incio da sntese da cadeia de RNA, imediatamente aps a formao da primeira ligao fosfodiester

Actnomicina D

Agentes intercalantes inibem tanto a transcrio com a replicao, em procariotos e eucariotos

Acridina

0 gene geralmente maior do que a sequncia codificadora para a protena

5UTR

3UTR

Protena

UTR: Regio no traduzida (Untranslated region)

0 mRNA bacteriano pode ser policistrnico (polignico)

5UTR

Distncia intergnica (-1 a 40 bases)

3UTR

Gene A

Gene B

incio

fim

incio

fim

Ncleo

Transcrio

Etapas envolvidas na expresso de genes em eucariotos

Processamento

Transporte

Traduo Citoplasma

RNA polimerases de eucariotos

RNA pol I RNA pol II Nuclelo rRNA Vrias subunidades

Nucleoplasma hnRNA Vrias subunidades (transcrito primrio) snRNA Nucleoplasma rRNA 5S tRNAs Mitocondria Cloroplasto Vrias subunidades 01 subunidade Similar as bacterianas

RNA pol III RNA pol Mitocondrial RNA pol de Cloroplastos

Requerem protenas auxiliares: fatores de transcrio

A RNA polimerase II inibida especificamente por -amanitina

Isolado do cogumelo Amanita phalloides

Altamente txico
Bloqueia a etapa de elongao

Estrutura tpica de um gene transcrito pela RNApol II

Enhancer Promotor Gene

Estrutura de Promotores da RNA Pol II

Promotores de genes transcritos pela RNApol II

Tata Binding Protein

Complexo TFIID

Promotores de genes transcritos pela RNApol III e I: A TBP tambm componente dos complexos de iniciao de transcrio destes promotores

Domnios dos Fatores de Transcrio

Domnio de Ativao

Domnio conector

Domnio de ligao ao DNA

Protenas necessrias para transcrio a partir de promotores reconhecidos pela RNA Pol II

Procariotos

Eucariotos

Splicing

Adio do 5CAP (modificao da extremidade 5do hnRNA)

Transcrio e adio do 5cap

Etapas para gerao do transcrito maduro

(hnRNA)

Clivagem, poliadenilao e splicing

Poliadenilao: Adio da cauda poli (A) na extremidade 3do hnRNA (transcrito primrio): ~200 Adeninas

Sequencia sinal para poliadenilao

(hnRNA)

Genes eucariticos so em geral interrompidos por introns

Splicing: remoo dos introns

Mamferos tem maior nmero de exons/gene nmero de

Tamanho de introns em vertebrados variado

Exons que codificam para protenas so usualmente pequenos

AGGUAAGU-----Pyr---A--NCAGG

Remoo de introns pelo spliceossomo: associao de ribonucleoprotenas pequenas (snRNPs) formando um complexo de 3x103 kDa

Auto-splicing:introns do grupo I

Auto-splicing: introns do grupo I

Auto-splicing: introns do grupo II