UNIVERSIDAD NACIONAL FEDERICO VILLARREAL

FACULTAD DE MEDICINA HIPOLITO UNANUE

ESCUELA DE MEDICINA HUMANA

FARMACOLGIA Asesora : Dra. Maria Ines Huapaya Paricoto

Integrantes:
Orellana Arteaga, Luiggi Ronald. Padilla Gavino, Giovanna Melina. Sandoval Robles, Sharold Lizeth. Santana Rodriguez, Janice Lucy. Siegel Panta, Hanna Olga. Silvestre Bautista, Jhosep Jesus. Soplin Vargas, Emerson. Sosa Marquina, Ruben Romario. Soto Valverde, Jeffri Andrs. Timoteo Camargo, Miguel Angel. Toscano Rosales, Carlos Alejandro

ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA DEL ACEITE ESENCIAL DE LAS HOJAS Y TALLOS DEL Rosmarinus Officinalis (ROMERO) COMPARADO CON CIPROFLOXACINO, AMIKACINA, NITROFURANTOINA Y GENTAMICINA EN CULTIVO DE Escherichia Coli. LABORATORIO DE FARMACOLOGIA UNFV, LIMA NOVIEMBRE 2013.

PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA Tendr mayor poder bactericida el aceite esencial de las hojas y tallos del Rosmarinus Officinalis (romero) comparado con ciprofloxacino, amikacina, nitrofurantoina y gentamicina en cepas de Escherichia coli en el laboratorio de farmacolgia UNFV noviembre 2013?

Resumen

Escherichia coli
La E.coli es un bacilo gram negativo, anaerbica

facultativa, cilndrico que pertenece a la familia Enterobacteriaceae.

Usualmente encontrada en las materias fecales del

hombre y de muchas especies de animales

Las enfermedades que pueden causar son por ejm:

- la septicemia por E. Coli es de mal pronstico, enteritis, infecciones urinarias

Frmacos
Nitrofurantona
Es un nitrofurano antibacteriano que se utiliza especficamente para el

tratamiento de las infecciones urinarias producidas por grmenes gramnegativos y por algunos gram-positivos. Inhibe la acetil-coenzima A bacteriana, interfiriendo con el metabolismo de los carbohidratos e impidiendo la formacin de la pared celular. La actividad antibacteriana de la nitrofurantona depende de la acidez de la orina. En general, es bacteriosttica

Gentamicina
La gentamicina es un antibitico aminoglucsido de amplio espectro y accin

bactericida.
Los aminoglucsidos son transportados de forma activa a travs de la membrana

bacteriana, se unen irreversiblemente a una o ms protenas receptoras especficas, interfieren con el complejo de iniciacin entre el ARNm (ARN mensajero) y la subunidad 30S.
El ADN puede leerse de forma errnea, lo que da lugar a la produccin de

protenas no funcionales, esto aumenta la ruptura de las membranas citoplasmticas de las bacterias y la consiguiente muerte celular.

Amikacina
La amikacina es un antibitico semisinttico del grupo de los

aminoglucsidos, derivado de la Kanamicina, de accin bactericida.

Mecanismo de accin kanamicina se une a la subunidad S30 del ribosoma

bacteriano, impidiendo la transcripcin del DNA bacteriano y, por tanto, la sntesis de protenas en los microorganismos susceptibles.

Ciprofloxacino
La ciprofloxacina es un agente antimicrobiano de la clase de las

fluoroquinolonas. Es activo frente a un amplio espectro de grmenes gramnegativos aerobios, incluyendo patgenos entricos.
Los efectos antibacterianos de la ciprofloxacina se deben a la inhibicin de

la topoisomerasa IV y la DNA-girasa bacterianas., de esa manera se inhibe la divisin celular.

Rosmarinus officinalis romero

Perteneciente a la familia Lamiaceae, Es una especie originaria de la regin mediterrnea, rica fuente de metabolitos activos es muy usada en la medicina tradicional por sus efectos digestivos, antiespasmdicos y carminativos.

ACEITE ESENCIAL
Principio activo del romero compuesto por steres terpnicos como el 1,8 cineol, canfeno, borneol, alcanfor, pineno, pineno y otros; adems se le han identificado alcaloides, saponinas, taninos, flavonoides, cidos orgnicos. Dentro de estos compuestos, los principales responsables de la actividad antimicrobiana son -pineno, acetato de bornilo, alcanfor y 1,8-cineol

El aceite esencial obtenido de sus hojas es considerado como un antimicrobiano natural que puede ser utilizado en la produccin de nuevos agentes con actividad antimicrobiana para la industria farmacutica y alimentara

USOS MEDICINALES
Anemia y problemas menstruales Indigestion dolorosa e inflamacion del colon Reconfortante en los estados de agotamiento, obteniendo un efecto tonificante Alopecia, dermatitis seborreica ( va tpica) limpieza del cuero cabelludo Es un antiinflamatorio en caso de golpes y quemaduras su uso es idneo Las hojas tambin pueden emplearse con fines culinarios y para perfumar los armarios o aromatizar el aire, incorporndolas a los potpourris

JUSTIFICACION

Las infecciones del tracto urinario forman parte de las infecciones ms frecuentes en la atencin primaria de salud

La causa mas frecuente de las infecciones del tracto urinario es la Escherichia Coli.

La resistencia de este microrganismo a los diferentes frmacos antimicrobianos

ANTECEDENTES
Abramovic H y co-autores (Croacia, 2012), confirm que el extracto etanlico de las hojas de romero tiene una mayor actividad antibacteriana en comparacin al extracto etanlico de las hojas de Vid, especialmente contra las bacterias gram-positivas y C. jejuni.
Silvia P. Estrada Orozco (2010) observaron que los extractos de Romero (Rosmarinus officinalis) y Tomillo (Thymus vulgaris) presentan actividad antibacteriana destacndose la mezcla de los extractos hexnicos a concentraciones de 1000 y 100 ug/mL frente a Staphylococcus aureus, Candida albicans, Pseudomonas aeruginosa.

METODOLOGA

Diseo de investigacin:
Segn el tiempo de ocurrencia de los hechos es un estudio de tipo: PROSPECTIVO.

Segn acopio de informacin del estudio realizado es de tipo: TRANSVERSAL.

Segn el anlisis de los resultados y es de tipo: EXPERIMENTAL.

VARIABLES
Aceite esencial de

Rosmarinus officinalis
(romero), Ciprofloxacino, Amikacina, Gentamicina y Nitrofurantoina.

Efecto antibacteriano en cultivos de Escherichia coli

VARIABLE INDEPENDIENTE

VARIABLE DEPENDIENTE

UNIDAD DE ANLISIS

Se utilizar el aceite esencial de Rosmarinus officinalis (romero) y se trabajar con la Escherichia coli, bacteria causante de infecciones del tracto urinario (cepa clnica de resistente baja y moderada), as como tambin cepas estndares de las mismas bacterias procedentes de la American Type Culture Collection (cepas ATCC), identificadas por gnero y especie, las cuales sern de la bacteria Escherichia coli.

UNIVERSO Y POBLACIN
Universo: Pacientes que presentan cuadro clnico caracterstico de
infeccin a vas urinarias.

Poblacin: 20 pacientes del Hospital Municipal de Los Olivos que

presentan los signos y sntomas caractersticos de infeccin a vas urinarias.

Muestra: Cepas de Escherichia Coli aisladas de pacientes del

Hospital Municipal de Los Olivos que presentan los signos y sntomas caractersticos de infeccin a vas urinarias.

CRITERIOS DE INCLUSIN Y EXCLUSIN

EXCLUSIN Pacientes que no presentaron el cuadro Pacientes

INCLUSIN con el cuadro clnico

clnico caracterstico de infecciones a las caracterstico de infecciones a las vas vas urinarias. Pacientes que presentaron los signos y sntomas de infecciones a las vas urinarias. Estudiantes de medicina mujeres que aceptaron voluntariamente que se le realice la toma de muestra.

urinarias pero que se encontraban con tratamiento. Estudiantes de medicina mujeres que no dieron su consentimiento para realizarse

la toma de muestra.

EXCLUSIN Placa sembrada con muestras de orina que nos e observo crecimiento bacteriano. Placas con halos de inhibicin adyacentes que no permitieron una medida adecuada.

INCLUSIN

Crecimiento de cepas que den positivo

para Escherichia Coli.

Placas que muestren contaminacin

por otros organismos.

PROCEDIMIENTO

TOMA DE MUESTRA
Se obtuvieron las muestras de urocultivo de pacientes (en frasco estril pre-higiene genital segundo chorro), que se acercaron al laboratorio del HMLO en el Hospital Municipal de los Olivos.

AISLAMIENTO DE LA ESCHERICHIA COLI

Se sembr en placas de Agar Sangre y Macconkey para reducir las posibilidades del crecimiento de otro tipo de microorganismos (gram +) Se incub horas a 37C. 24

Se procedi a aislar la cepa.

Para realizar las diluciones segn las escala de Mcfarland y llevarlas MICROSCAN para obtener la identificacin exacta y los resultados de sensibilidad.

PRUEBAS DE SENSIBILIDAD BACTERIANA

Se sigui el mtodo de suspensin directa de colonias en suero salino con el fin de obtener una densidad de 0,5 de la escala de McFarland que se corresponde aproximadamente, con 1-2 x108 UFC/mL de Escherichia coli.

El antibiograma se realiz segn el mtodo de Kirby Bauer que el National Committee for Clinical Laboratory Standards (NCCLS) recomendada para la determinacin de la sensibilidad bacteriana.

MTODO DE DISCO DE DIFUSIN

Aplicacin de los discos de antimicrobianos.

Para lo cual se utilizaron pinzas estriles para colocar en la placa: - 1 disco de sensibilidad para Ciprofloxacina. - 1 disco de sensibilidad para Amikacina. - 1 disco de sensibilidad paraNitrofurantoina. - 1 disco de sensibilidad para Gentamicina - 1 discos de papel filtro embebido con 30 ul de aceite esencial de romero a un 60% de concentracin.

Incubacin de las placas a 37C por 24 horas.

Observacin de las placas tras la incubacin

MEDIDA DE LOS HALOS E INTERPRETACIN DE LA SENSIBILIDAD

Luego se procedi a la lectura de las medidas de los halos de inhibicin en milmetros, con la ayuda del pie de rey o calibrador.

RESULTADOS

Halos de inhibicin por el romero. Abscisas: Plata Petri con cada cepa E.coli
romero
30 25 20

15
10 5 0

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20
romero

Halos de inhibicin por los diferentes frmacos antimicrobianos comparados con el romero. En este caso el ciprofloxacino muestra un mayor halo de inhibicin en todas las placas Petri con diferentes cepas bacterianas de E. coli
Halos de inhibicin
45 40 35 30 25 20 15 10 5 0 1 2 3 romero 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 CIPROFLOXACINO NITROFURANTOINA AMIKACINA GENTAMICINA

Halos de inhibicin
45 40

35
30 25 20 15 10 5 0 romero CIPROFLOXACINO 1 2 3 4 5 6 7 8 9 NITROFURANTOINA 10 11 12 13 14 AMIKACINA 15 16 17 18 GENTAMICINA 19 20

CONCLUSIONES
El aceite esencial del Rosmarinus officinalis Romero presento un halo de inhibicin menor que los frmacos Ciprofloxacino, Amikacina, Nitrofurantoina y Gentamicina en cepa de Escherichia coli

El aceite esencial del Rosmarinus officinalis Romero presento un halo de inhibicin menor que los frmacos Ciprofloxacino, Amikacina, Nitrofurantoina y Gentamicina en cepa de Escherichia coli.

El CIPROFLOXACINO, mostro un halo de inhibicin media de 29.25, siendo el ms potente de los dems frmacos incluyendo el del aceite esencial del Rosmarinus officinalis Romero. Debido a que pertenece a la clase de las fluoroquinolonas, es activo frente a grmenes tanto a gramnegativos como a gram-positivos. los efectos de la ciprofloxacina se deben a la inhibicin de la topoisomerasa IV y la DNA-girasa bacterianas. De esa forma provocando la muerte de la bacteria, Escherichia Coli.

 La NITROFURANTOINA, mostro un halo de inhibicin media de 20.00, ms que el aceite esencial del Rosmarinus officinalis Romero. Esto es debido a que la nitrofurantona inhibe la acetil-coenzima A bacteriana, interfiriendo con el metabolismo de los carbohidratos e impidiendo la formacin de la pared celular.

La AMIKASINA, mostro un halo de inhibicin media de 18.70, ms que el aceite esencial del Rosmarinus officinalis Romero. Aunque su halo inhibicin fue menor que de los dems frmaco, sigue siendo uno de los mejores antibiticos, perteneciente a los semisinteticos del grupo de los aminoglucosidos, derivado de la kanamisina, cuya accin es de actuar en la subunidad de 30S del ribosoma bacteriano impidiendo la transcripcin del DNA de la Escherichia Coli.

La GENTAMISINA, mostro un halo de inhibicin media de 20.00, ms que el aceite esencial del Rosmarinus officinalis Romero. Esto es debido a que la gentamisina es un aminoglucosido de amplio espectro y de accin bactericida, ya que se transporta de forma activa a travs de la membrana bacteriana y se une de forma irreversible a los receptores especficos de la subunidad de 30S del ribosoma bacteriano en este caso al Escherichia Coli.

RECOMENDACIONES
Se recomienda realizar el trabajo con diferentes concentraciones del aceite esencial del Romero y determinar si presentar diferencias en su poder inhibitorio. Se sugiere realizar un experimento con el poder sinrgico del aceite esencial del romero y los medicamentos con el fin de poder comparar los resultados . Se recomiendo hacer una comparacin entre el uso del aceite esencial contra los extractos metanolicos y etanolicos del mismo, con el fin de encontrar cual presentar mayor eficacia frente a la cepa. .