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Universidade Federal dos Vales do Jequitinhonha e Mucur Departamento de Farmcia Imunologia Clnica

Diagnstico laboratorial da Sfilis


Testes no treponmicos

Sfilis
Doena sistmica, exclusiva do ser humano, causada pelo Treponema pallidum (no cultivvel em meios artificiais). Principal via de transmisso o contato sexual (Doena sexualmente transmissvel - DST), seguido pela transmisso vertical e por transfuses sanguneas. Doena de evoluo lenta. Quando no tratada alterna perodos sintomticos e assintomticos.

Sintomas variados e complexos e quando no tratada pode comprometer o sistema nervoso e os aparelhos cardiovascular, respiratrio e gastrointestinal.

Sfilis
Adquirida: pode ser dividida em trs fases, com caractersticas clnicas, imunolgicas e histopatolgicas distintas:
Sfilis primria;

Sfilis secundria;
Sfilis terciria;

Congnita.

Sfilis Primria
Cancro aparece 10 a 90 dias aps a infeco
Ulcerao indolor com bordas endurecidas que surgem no local da entrada do T. pallidum. Apresenta resoluo espontnea em 2 a 6 semanas;

As leses facilitam a entrada do HIV;


Os anticorpos comeam a surgir na corrente sangunea em torno de 10 dias aps a infeco; Quando no tratada evolui para Sfilis secundria.

Sfilis Secundria
Disseminao do T. pallidum (rgos e fluidos). Sintomas inespecficos; Exantema (erupo) cutnea Resoluo espontnea em 2 a 6 semanas; linfadenopatia; leses nas mucosas. Se no tratada, entra em um perdo de latencia recente (primeiro ano) e tardio (aps o primeiro ano), sem qualquer manifestao clnica;

Sfilis Terciria
Sfilis terciria:
Pode levar de 3 a 12 anos para se manifestar;
Inflamao e destruio dos tecidos e ossos;

Gomas siflicas tumoraes amolecidas na pele, mucosas e ossos;


Sfilis cardiovascular; Neurossfilis.

Sfilis congnita
Transmisso do T. pallidum da me para o feto via placenta. Mais grave quando mais recente for a infeco materna. Na gestao pode ocasionar aborto, nascimentos prematuros ou nascimento seguido de morte. O recm nascido com sfilis congnita pode apresentar leses bolhosas, ricas em T. pallidum na palma das mos, planta dos ps, ao redor da boca e do nus. A infeco congnita pode permanecer assintomtica at a infncia ou a fase adulta.

Desenvolvimento dos testes laboratoriais

Exames laboratoriais para o diagnstico da Sfilis


Exame direto: identificao de T. pallidum por microscopia em amostras coletadas diretamente na leso.
Exames sorolgicos: pesquisa de anticorpos produzidos durante a infeco.

Exames sorolgicos
Testes treponmicos
Utilizam o antgeno T. pallidum e detectam anticorpos anti-treponmicos Indicam que em algum momento da vida o paciente teve contato com o T. pallidum. So indicados para confirmao do diagnstico quando triagem feita por um teste no-treponmico. Desvantagem: no podem ser utilizados no monitoramento do tratamento.

Exames sorolgicos
Testes no treponmicos
Detectam anticorpos no treponmicos, ou seja, anticorpos que no so especficos para o T. pallidum mas que esto presentes na Sfilis. Qualitativos testes de triagem Quantitativos determinao do ttulo do anticorpo na amostra e monitoramento do tratamento.

Floculao
Ocorre quando a interao direta de anticorpos especficos com o antgeno leva formao de grumos em meio fluido, detectveis microscopia ptica. VDRL (Venereal Disease Laboratory)

RPR (Rapid Test Reagin)


USR (Unheated Serum Reagin)

TRUST (Toluidine Red Unheated Serum Test)

VDRL Venereal Disease Research Laboratory


Antgeno VDRL
O antgeno do VDRL uma soluo alcolica contendo 0,03% de cardiolipina, 0,9% de colesterol e lecitina purificada para produzir reatividade padronizada. Ligao ao acaso entre os componentes resultando na formao de estruturas arredondandas denominadas micelas. A soluo de uso uma suspenso do antgeno preparada em salina tamponada.

VDRL Venereal Disease Research Laboratory


Os anticorpos no treponmicos presentes em amostras biolgicas (soro ou lquor) se ligam as cardiolipinas das micelas. A ligao dos anticorpos entre vrias micelas leva a uma reao de floculao, visvel ao microscpio ptico.

VDRL - Tcnica
Tcnica Qualitativa
Preparao da suspeno antignica Amostra soro inativado ou lquor Placa de Kline
50L amostra + 50L da suspeno antignica Agitao por 4 minutos Anlise microscpica ( aumento de 100x)

VDRL - Tcnica
Tcnica semi-quantitativa
Realizar a dilio seriada da amostra em soluo salina. Proceder cada diluio do mesmo modo como no teste qualitativo. O ttulo da amostra ser o da ltima diluio onde ainda se visualiza a presena de agregados.

VDRL
Alta sensibilidade Torna-se positivo duas semanas aps o cancro. Falsos negativos podem ocorrer na sfilis tardia. Baixa especificiadade 1-40% dos resultados positivos so falsos-positivos: idosos, brucelose, lepra, malria, hepatite, asma, gripe, tuberculose, mononucleose, hansenase, portadores de HIV, leptospirose, cncer, diabetes, outras doenas bacterianas e doenas autoimunes que tambm liberam antgenos que levam a produo das reaginas.

RPR

Controle da qualidade para os testes de floculao


Controle da qualidade interno
Utilizao de soros controles positivo e negativo. Diluio das amostras negativas para evitar o efeito-prozona.

Controle da qualidade externo

Diagnstico laboratorial da Sifilis


Sfilis primria
Pesquisa direta do T. pallidum em amostras das leses. Pesquisa de anticorpos treponmicos e no treponmicos ( que elevam-se 10 dias aps a infeco); Quando mais cedo o tratamento, maiores as chances de se obter testes sorolgicos no reagentes.

Sfilis secundria
Todos os testes sorolgicos so reagentes, com ttulos altos. Aps o tratamento nessa fase, os testes treponmicos podem permanecer reativos por toda a vida, enquando os notreponmicos podem continuar reagentes em ttulos baixos ou tornarem-se no reagentes.

Diagnstico laboratorial da Sifilis


Sfilis latente:
Todos os testes sorolgicos so reagentes, com diminuio dos ttulos. Para diferenciar esta fase da infeco primria deve-se pesquisar no lquor a presena de anticorpos, utilizando-se o VDRL. Evidencia-se sfilis latente quando o VDRL reagente no lquor, acompanhado de baixos ttulos no soro.

Sfilis terciria:
Testes sorolgicos treponmicos reagentes. Testes no-treponmicos reagentes com ttulos baixos ou no reagentes.
A infeco pelo T. pallidum no confere imunidade permanente, sendo necessrio diferenciar entre a persistncia de exames reagentes (cicatriz sorolgica) e a reinfeco pelo T. pallidum.