COMPETENCIA GENRICA: Resuelve problemas biolgicos a partir de los principios de la biologa celular vinculados con los avances cientficos

y tecnolgicos en un contexto personal y social.

COMPETENCIA PARTICULAR: Emplea mtodos

y tcnicas citolgicas para caracterizar las clulas de los seres vivos.

RAP 1: Maneja sistemticamente el microscopio compuesto para su uso en casos prcticos

LOS SERES VIVOS CONSTITUYEN UN SISTEMA ALTAMENTE COMPLEJO, CAPAZ DE METABOLIZAR MEDIANTE EL INTERCAMBIO DE MATERIA Y ENERGA CON EL MEDIO QUE LOS RODEA, DE AUTORREGULARSE, REPRODUCIRSE, ADAPTARSE, RESPONDER A LOS ESTMULOS DEL AMBIENTE, CRECER Y HASTA MOVERSE, CARACTERSTICAS QUE SOLO PUEDEN IDENTIFICARSE A PARTIR DEL NIVEL CELULAR, PUES STA ES LA UNIDAD DE INTEGRACIN MS PEQUEA QUE PUEDE VIVIR CON INDEPENDENCIA.

TEORA CELULAR ROBERTO HOOKE (1665) SE LE ATRIBUYE HABER UTILIZADO POR PRIMERA VEZ EL TRMINO CLULA.

ANTON VAN LEEUWENHOECK (1668) OBSERV CLULAS VIVAS, LO QUE REVEL UN MUNDO CULTO LLRNO DE ORGANISMOS MICROSCOPICOS MOVILES PERFECCION EL TALLADO DE LAS LENTES CON LAS CUALES OBSERV PEQUEOS ANIMALES.

BRISSEAU MIRBEL (1800) ESTABLECI DEFINITIVAMENTE EL TRMINO DE CLULA EN HONOR DE HOOKE.

ROBERT BROWN (1831) REPORT EL DESCUBRIMIENTO DE UNA ESTRUCTURA RODEADA EN LAS CLULAS DE LAS EPIDERMIS DE LAS ORQUDEAS: NUCLEO CELULAR.

PERO TUVIERON QUE PASAR DOS SIGLOS, HASTA 1938 SE ELABORARA LA TEORA CELULAR DE LA CONSTITUCIN DE LOS SERES VIVOS. EL BOTNICO MATTHIAS SHLEIDEN Y EL ZOOLOGO THEODOR SCHWANN.

POSTULADOS DE LA TEORA : 1.-TODOS LOS ORGANISMOS ESTN FORMADOS DE CLULAS. 2.- LA CLULA ESLA UNIDAD FUNCIONAL DE LOS SERES VIVOS. 3.-LA CLULA ES LA UNIDAD DE ORIGEN.

Hasta el siglo XIX el microscopio ptico comenz a ser ampliamente utilizado para la observacin de clulas. Y esto lleva a la aparicin de la Biologa Celular Y su nacimiento est marcado por dos publicaciones: la del btaninco Matthias Schleiden en 1938 y del zoologo Theodor Schwann en 1939

-Louis Pasteur - Gregorio Mendel -

El microscopio, su principal propsito es el aumento visual, mediante objetivos que facilitan al ojo humano la formacin de una imagen ntida en la retina cuando el ojo est pticamente cerca de un objeto para poder visualizarlo con claridad.

PRESERVACIN DE CULTIVOS CON UNA CAPA DE ACEITE MINERAL

Permite aumentar las imgenes de las clulas hasta 1.000 veces y resolver detalles de tan solo 0.2. Requiere de tres elementos para visualizar: 1.-Se debe enfocar una luz brillante sobre el espcimen, mediante las lentes del condensador. 2.-El espcimen debe estar cuidadosamente preparado, para permitir que lo atraviese. 3.-Se debe alinear un sistema apropiado de lentes.

Sistema ptico OCULAR: Lente situada cerca del ojo del observador. Ampla la imagen del objetivo. OBJETIVO: Lente situada cerca de la preparacin. Ampla la imagen de sta. CONDENSADOR: Lente que concentra los rayos luminosos sobre la preparacin. DIAFRAGMA: Regula la cantidad de luz que entra en el condensador. FOCO: Dirige los rayos luminosos hacia el condensador. Sistema mecnico SOPORTE: Mantiene la parte ptica. Tiene dos partes: el pie o base y el brazo. PLATINA: Lugar donde se deposita la preparacin. CABEZAL: Contiene los sistemas de lentes oculares. Puede ser monocular, binocular, .. REVLVER: Contiene los sistemas de lentes objetivos. Permite, al girar, cambiar los objetivos. TORNILLOS DE ENFOQUE: Macromtrico que aproxima el enfoque y micromtrico que consigue el enfoque correcto.

1.-Colocar el objetivo de menor aumento en posicin de empleo y bajar la platina completamente. Si el microscopio se recogi correctamente en el uso anterior, ya debera estar en esas condiciones. 2.-Colocar la preparacin sobre la platina sujetndola con las pinzas metlicas. 3.-Comenzar la observacin con el objetivo de 10x (ya est en posicin) o colocar el de 40 aumentos (40x) 3.-Para realizar el enfoque: Acercar al mximo la lente del objetivo a la preparacin, empleando el tornillo macromtrico. Esto debe hacerse mirando directamente y no a travs del ocular, ya que se corre el riesgo de incrustar el objetivo en la preparacin pudindose daar alguno de ellos o ambos. Mirando, ahora s, a travs de los oculares, ir separando lentamente el objetivo de la preparacin con el tornillo macromtrico y, cuando se observe algo ntida la muestra, girar el micromtrico hasta obtener un enfoque fino.

4.-Pasar al siguiente objetivo. La imagen debera estar ya casi enfocada y suele ser suficiente con mover un poco el micromtrico para lograr el enfoque fino. Si al cambiar de objetivo se perdi por completo la imagen, es preferible volver a enfocar con el objetivo anterior y repetir la operacin . El objetivo de 40x enfoca a muy poca distancia de la preparacin y por ello es fcil que ocurran percances: incrustarlo en la preparacin si se descuidan las precauciones anteriores. 5.-Empleo del objetivo de inmersin: -Bajar totalmente la platina. -Subir totalmente el condensador para ver claramente el crculo de luz que nos indica la zona que se va a visualizar y donde habr que colocar el aceite. -Girar el revlver hacia el objetivo de inmersin dejndolo a medio camino entre ste y el de. -Colocar una gota mnima de aceite de inmersin sobre el crculo de luz. -Terminar de girar suavemente el revlver hasta la posicin del objetivo de inmersin. -Mirando directamente al objetivo, subir la platina lentamente hasta que la lente toca la gota de aceite.

 -Enfocar cuidadosamente con el micromtrico. La distancia de trabajo entre el objetivo de inmersin y el riesgo de accidente es muy grande. -Una vez se haya puesto aceite de inmersin sobre la preparacin, ya no se puede volver a usar el objetivo 100x sobre esa zona, pues se manchara de aceite. Por tanto, si desea enfocar otro campo, hay que bajar la platina y repetir la operacin. -Una vez finalizada la observacin de la preparacin se baja la platina y se coloca el objetivo de menor aumento girando el revlver. En este momento ya se puede retirar la preparacin de la platina. Nunca se debe retirar con el objetivo de inmersin en posicin de observacin. -Limpiar el objetivo de inmersin con cuidado empleando un papel especial .

MANTENIMIENTO Y PRECAUCIONES Al finalizar el trabajo, hay que dejar puesto el objetivo de menor aumento en posicin de observacin, asegurarse de que la parte mecnica de la platina no sobresale del borde de la misma y dejarlo cubierto con su funda. Cuando no se est utilizando el microscopio, hay que mantenerlo cubierto con su funda para evitar que se ensucien y daen las lentes. Si no se va a usar de forma prolongada, se debe guardar en su caja dentro de un armario para protegerlo del polvo. Nunca hay que tocar las lentes con las manos. Si se ensucian, limpiarlas muy suavemente con un papel de filtro o, mejor, con un papel de ptica. No dejar el portaobjetos puesto sobre la platina si no se est utilizando el microscopio. Despus de utilizar el objetivo de inmersin, hay que limpiar el aceite que queda en el objetivo con pauelos especiales para ptica o con papel de filtro (menos recomendable). En cualquier caso se pasar el papel por la lente en un solo sentido y con suavidad. Si el aceite ha llegado a secarse y pegarse en el objetivo, hay que limpiarlo con una mezcla de alcohol-acetona o xilol. No hay que abusar de este tipo de limpieza, porque si se aplican estos disolventes en exceso se pueden daar las lentes y su sujecin. No forzar nunca los tornillos giratorios del microscopio (macromtrico, micromtrico, platina, revlver y condensador). El cambio de objetivo se hace girando el revlver y dirigiendo siempre la mirada a la preparacin para prevenir el roce de la lente con la muestra. No cambiar nunca de objetivo agarrndolo por el tubo del mismo ni hacerlo mientras se est observando a travs del ocular. Mantener seca y limpia la platina del microscopio. Si se derrama sobre ella algn lquido, secarlo. Es conveniente limpiar y revisar siempre los microscopios al finalizar la sesin prctica y, al acabar el curso, encargar a un tcnico un ajuste y revisin general de los mismos

Tabla 3.1. Aumento Total Len te obj etiv o

Microscopio

Lente ocular

Ampliaci n total

Microscopios pticos Debil seco Fuerte seco Aceite de inmersin 10x x 40x x 100 x x 10x 10x 10x = = = l00x 400x 1000x

El diseo de este instrumento, tambin llamado lupa binocular, pues se utiliza para ofrecer una imagen estereoscpica (3D) de la muestra. Para ello, y como ocurre en la visin binocular convencional, es necesario que los dos ojos observen la imagen con ngulos ligeramente distintos. Obviamente todos los microscopios estereoscpicos, por definicin, deben ser binoculares (con un ocular para cada ojo), por lo que a veces se confunden ambos trminos. Existen dos tipos de diseo, denominados respectivamente convergente (o Greenough) y de objetivo comn (o Galileo). Es utilizado en botnica, disecciones de animales, etc.

Los colorantes fluorescentes utilizados para teir las clulas, se detectan con ayuda de un microscopio de fluorescencia. Este es similar al microscopio ptico, excepto que las luz atraviesa dos sistemas de filtro. 1.- Filtra la luz antes de que alcance el espcimen y solo deja pasar las longitudes de onda, que excitan al colorantes fluorescente usado. 2.-Bloquea esta luz y solo deja pasar las longitudes de onda emitidas por el colorante fluorescente. Los objetos teidos se ven de color brillante sobre un fondo oscuro. Fluorocromo: son aquellas que imparten la fluorescencia

Son numerosas las aplicaciones de la microscopa de fluorescencia, notablemente en biologa y medicina. Marcaje de molculas en clulas y tejidos para su caracterizacin e identificacin. Estudio de clulas normales y patolgicas. Estudios inmunolgicos. Mineraloga.

Es en un principio similar a un microscopio de ptico, pero emplea un haz de electrones en lugar de un haz de luz, y bobinas magnticas para enfocar el haz en lugar de lentes de cristal, el espcimen que se coloca en el vaco, debe ser muy delgado. Por lo general, el contraste se introduce tiendo el espcimen con metales pesados electrodensos que absorben o dispersan localmente electrones y se eliminan del haz cuando este atraviesa la muestra . Tiene un aumento til de hasta un milln de veces. Utilizado en muestras biolgicas . Ampliacin de 2 nm.

El campo claro es la forma ms simple de microscopa donde la luz pasa a travs de o reflejada del espcimen. La iluminacin no se altera por aditamentos que cambien las propiedades de la luz (como polarizadores o filtros). APLICACIONES: En aplicaciones biolgicas, las observaciones de campo claro son usadas ampliamente para tinciones o pigmentos naturales o especmenes altamente contrastados montados en un porta objetos. El espcimen es iluminado desde abajo y observado desde arriba. El espcimen aparece brillante, pero ms oscuro que el brillante fondo. Esta tcnica es ampliamente usada en patologa para ver secciones de tejidos fijos o pelculas celulares/frotis. El campo claro no es muy til para clulas vivas sin teir o secciones de tejido sin teir, como en la mayora de los casos, la luz pasa a travs de muestras transparentes o traslucida con poca o sin definicin de la estructura. La luz es reflejada desde muestras opacas y esto es explotado en los ambientes industriales donde las imgenes de campo claro son usadas para la inspeccin de obleas (WAFERS) y tarjetas de cristal lquido. Resolucin de 1000 a 3000

TIPOS DE MICROSCOPIA Campo claro

AMPLIACIN MXIMA TIL 1000-2000

ASPECTO DE LA MUESTRA Especmenes teidos o sin teir, las bacterias generalmente, aparecen al color del colorante Generalmente sin teir aparecen brillantes, iluminadas sobre un fondo oscuro

APLICACIONES TILES Para aspectos morfolgicos, gruesos de bacterias, levaduras, mohos, algas y protozoos Para microorganismos que exhiban algn aspecto morfolgico caracterstico en vivo y en suspensin en un liquido, por ejemplo espiroquetas Tcnicas de diagnostico en las que el colorante fluorescente revela su identidad Para examen de estructuras celulares en clulas vivas de organismos mas grandes: levaduras, algas, protozoos y algunas bacterias Examen de virus y de la estructura de las clulas microbianas

Campo oscuro

1000-2000

Fluorescente

1000-2000

Brillante y coloreado; color del colorante fluorescente

Fase de contraste

1000-2000

Grados variables de oscurecimiento

Electrnico

200,000-400,000

Se ven en pantalla fluorescente

Para proporcionar un material adecuado para el examen microscpico se siguen dos tcnicas generales. 1.- Suspensin de los organismos en un liquido

2.- Hace uso de pelculas o frotes desecados, fijos y teidos de la muestra.

- Preparacin hmeda. Se realiza colocando una gota de la suspensin de microorganismos entre un porta y un cubreobjetos.Se observa directamente.
- Preparacin fijada. Se coloca una suspensin homognea de microorganismos en una gota de agua sobre el portaobjetos y se fija (mediante calor o agentes qumicos) y despus se tien mediante diferentes tcnicas. Estas preparaciones se observan sin cubreobjetos y, habitualmente, con objetivos de inmersin.

Para observar las caractersticas morfolgicas de las bacterias , las preparaciones fijas y teidas son las que se usan con mayor frecuencia. Las ventajas de este procedimiento: A) Las clulas son visibles ms claramente. B) En las preparaciones teidas las diferencias entre clulas de especies diferentes y dentro de la misma especie se demuestran mediante soluciones colorantes apropiadas. Los pasos esenciales en la preparacin de un frote fijo y teido: A) Hacer el frotis B) La fijacin C) La aplicacin de una o ms colorantes. Coloraciones microbiolgicas Acido Neutro Bsico.

Esta tcnica diferencial es una de las uso ms comn en microbiologa. Este procedimiento , el frote bacteriano teido se somete a las soluciones siguientes en el orden que se indica: cristal violeta, solucin de yodo, alcohol (decolorante) y safranina . Pertenecen a dos grupos: bacterias gram- positivas, que retienen el cristal violeta y aparece color violeta profundo; las bacterias gram-negativas que pierden el cristal violeta y por el contraste de la safranina aparecen rojas.
Soluciones aplicadas por su orden
1.-Cristal violeta 2.-Solucin yodo

Gram-positivas
Las bacterias se tien en violeta Complejo CV-I se forma dentro de las bacterias; las bacterias permanecen violeta Las paredes celulares se deshidratan, hay retraccin de los poros , la permeabilidad disminuye, el complejo CV-I no puede salir de la bacteria , permanecen violeta Las bacterias no afectadas permanecen violeta

Gram-negativas
Las bacterias se tien en violeta Complejo CV-I se forma dentro de las bacterias, las bacterias permanecen violeta Extraccin de lpidos de las paredes celulares, aumento de porosidad, CV-I sale de la bacteria

3.- Alcohol

4.- Safranina

Las bacterias toman este colorante y se tien de rojo

CARACTERISTICAS
Composicin de la pared celular

GRAMPOSITIVAS
Baja en lpidos(1-4%)

GRAMNEGATIVAS
Alta en lpidos(1122%)

Susceptible a la penicilina
Inhibicin por colorantes bsicos; ej: azul violeta Necesidades nutritivas Resistencia a la desintegracin por medios fijos

Mas susceptible
Inhibicin notable

Menos susceptible
Menor inhibicin

Muchas especies realmente complejas Mas resistentes

Realmente simples Menos resistentes

Otro mtodo de coloracin diferencial de amplio uso, sobre todo para el gnero Mycobacterium, en la tincin para cidorresistencia. La preparacin bacteriana fijada se somete a las soluciones siguientes en el orden que se seala: fucsina fenicada(calentada),cido alcohol y azul de metileno. Las bacterias teidas por este mtodo se clasifican como cidorresistentes si retienen la fucsina fenicada y aparecen rojas. No cidorresistentes si el cido alcohol las decolora y se tien de azul de metileno

Es un mtodo habitual para el examen de frotis sanguneos, cortes histolgicos y otro tipo de muestras biolgicas. Este mtodo tiene utilidad sobre todo para poner de manifiesto las rickettsias localizadas dentro de las clulas huspedes Hidratar. Aplicar solucin de trabajo de Giemsa Deshidratar con alcohol absoluto Aclarar con xilol Estos poliorganismos adquieren una coloracin diferencial y se ven dentro del citoplasma de la clula husped. La tcnica de Giemsa est formada por varios colorantes: los tintes neutros utilizados combinan el azul de metileno como tinte bsico y la eosina como tinte cido, lo que da una amplia gama de colores azul II-eosina, 3 g; azul II, 0.8 g; glicerina, 250 ml; alcohol metlico. La preparacin se seca al aire y se fija con alcohol absoluto. Se aade una gota del colorante a 1 ml de agua y se cubre la preparacin durante 10 minutos. Se lava, se seca al aire

-Gota de maneval A (rojo congo) -Con un asa microbiologica tomar una pequea muestra, colocarla sobre la gota y mezclarla, con esta hacer movimientos giratorios. -Expander la solucin de manera que quede una pelcula delgada. -Dejar secar a temperatura ambiente. -Cubrir la preparacin con maneval B (fucsina) -Lavar suavemente con agua. -Observar al microscopio, las cpsulas se observan incoloros, el espacio intercelular de color oscuro y las clulas bacterianas de color rojo. Bacterias con capsula: Pasteurella, klipsiella, Bacillus, Escherischia.

Es una tcnica de tincin diferencial rpida y econmica, usada para la identificacin de microorganismos patgenos, como M. tuberculosis o el gnero Apicomplexa (coccidios intestinales) entre otros.

-Microorganismos ac. alcohol resistentes -La coloracin de fucsina fenicada (1 colorante) -Se aplica en presencia de calor(se combina con los componentes de la pared celular). -Se aplica alcohol cido(decolorante) Bacterias no ac. alcohol resistentes son decoloradas fcilmente, por lo que se vuelven a teir con azul de metileno. Bacterias ac. Alcohol resistentes, color rojo. Bacterias no ac. Alcohol resistentes, color azul

sta y la siguiente variantes son para preparaciones citolgicas.

Hacer un frotis de la muestra. La fijacin al calor asegurar de que el frotis quede adherido al portaobjetos. Un frotis muy delgado puede darle resultados falsamente negativos y un frotis muy grueso puede desprenderse del portaobjetos durante la tincin. Utilizando pinzas, coloque los portaobjetos en una gradilla de tincin con los extendidos hacia arriba. Nunca tia ms de 12 portaobjetos a la vez.

Dejar el frotis sobre el puente de tincin. Aplicar fucsina-fenicada.

Deje que el colorante permanezca sobre los portaobjetos durante 5 minutos. Mantenga el calor durante este perodo.
Se requiere el tiempo adecuado para que la fucsina fenicada penetre y tia la pared celular de la bacteria. No deje que hierva o se seque el colorante. Lave suavemente el colorante de cada portaobjetos con agua corriente fra hasta que toda la tincin libre quede lavada. Lave suavemente de manera que el extendido no se barra del portaobjetos. Retire el exceso de agua. Cubra cada portaobjetos con la solucin decolorante, tal como alcohol cido y mantngalo sobre el portaobjetos durante 7 minutos. Si no se decolora suficientemente, el contenido del esputo que no son bacilos TBC puede permanecer teido. Enjuague con agua una vez ms los portaobjetos y quite el exceso de agua. Si los portaobjetos an estn rosa, aplique una cantidad adicional de la solucin decolorante de 1 a 3 minutos. Aplique la solucin de contraste, azul de metileno, durante 1 minuto. Vuelva a enjuagar con un leve chorro de agua e incline cada portaobjetos hasta drenar el exceso de agua. Finalmente, coloque cada portaobjetos en una gradilla a que sequen al aire.

Calentar con un mechero hasta la emisin de vapores (3-5 minutos).

Decolorar con alcohol-cido.

Aplicar azul de metileno (1 minuto). Enjuagar con agua

Ahora coloquele una pequeita gota de aceite de inmersin y haga la observacin al microscopio con 100 x 100

La pared celular de las bacterias tiene una ligera carga negativa, por eso utilizamos colorantes bsicos que se adhieran a su pared y as poder observarlos, pero en el caso de la tincin negativa, utilizamos un colorante cido (Tinta china o Nigrosina), de forma que las bacterias repelen el colorante en vez de absorberlo, y por tanto veremos todo el campo teido y veremos las bacterias como zonas brillantes en las cuales no penetr el colorante.

Colocar en un portaobjetos una pequea cantidad de hongos. Colocar colorante azul-lactofenol Colocar el cubreobjetos Llevar al microscopio

Las bacterias u otros organismos que se desarrollan en medios de laboratorio, se llaman cultivos. Las diferentes especies de bacterias que se desarrollan en la misma clase de medios de cultivo pueden tener aspectos muy diferentes, y por tanto el conocimiento de la apariencia, o de las caractersticas del cultivo de las sp. es til para reconocer a ciertos tipos de bacterias.

La poblacin microbiana de nuestro ambiente es grande y compleja. -Partes de nuestro cuerpo: cavidad bucal, conducto intestinal y la piel, en donde se encuentran en cantidades extraordinarias. Ej: -Un simple estornudo puede dispersar de 10 000 a 100 000 bacterias. -Un gramo de bacterias fecales contiene millones de bacterias. Al igual que nuestro ambiente, aire, agua, suelo.

El cultivo puro representa las condiciones artificiales para el desarrollo de las bacterias y otros microorganismos y las condiciones impuestas, mediante el manejo de laboratorio.

Tcnica de siembra por estras en placa y Tcnica de siembra por difusin en placa. Con un asa bacteriolgica, se pasa una porcin de la muestra a la superficie de un medio de cultivo hecha a base de agar y se siembra en el medio ya sea por estras o por difusin

El principio de la tcnica de la placa vertida es la dilucin(adelgazamento) de la muestra en tubos con agar fundido y enfriado.
1.- Se hacen diluciones en ms de un tubo, para obtener colonias bien aisladas. 2.- El medio se mantiene al estado lquido a una temperatura de 450C para permitir que el inculo se distribuya adecuadamente en el medio. 3.- Una vez sembrado el medio se pone en cajas, de cajas de Petri, se deja solidificar y se incuba. Como algunos organismos quedan atrapados entre el agar, se observarn colonias tanto en la superficie como entre el medio cuando este solidifique.

Se usan generalmente cuando el tipo de bacteria que queremos aislar se encuentra en muy pequeas cantidades y se desarrolla con mayor lentitud que muchas de las otras especies.

Si el microorganismo que se busca en un cultivo mixto se encuentra en mayor cantidad que cualquiera que los otros microorganismo, es posible obtenerlo en cultivo puro mediante una serie de diluciones en tubo. Cuando la muestra este muy diluida contendr solamente la bacteria que buscamos.

Para poder obtener un solo microorganismo de una preparacin en gota suspendida, se necesita equipo especial, como el micromanipulador, adaptado a un microscopio. Este aparato permite al operador controlar los movimientos de una micropipeta dentro de una gota pendiente de tal manera que se pueda tomar una sola clula dentro del tubo y pasarla a un medio de cultivo.

RESIEMBRA PERIDICA A MEDIOS FRESCOS. Los cultivos de bacterias se pueden mantener en tubos de medio en los que han sido cultivados mediante pasos peridicos a medios frescos. Cuando se va a emplear este procedimiento para mantener una coleccin de cultivos, se deben determinar tres cosas. 1.- El medio de cultivo apropiado para usarlo con cada cultivo. 2.- La temperatura apropiada para mantener los cultivos. 3.- El tiempo que se necesita para hacer las resiembras.

BACTERIA
Neisseria sp. Bacillus sp. Pseudomona s sp. Clostridium sp. Mycobacteri um sp.

MEDIO

TIEMPO DE RESIEMBRA

INCUBACIN TEM 0C
35 28 28 28 30

ALMACENAM IENTO 0C
35 10 10 Del cuarto 10

Agar Cristina 1 mes tripticasa Agar nutroitivo Agar nutritivo Medio de carne cocida Agar glicerol 12 meses o mas 3 meses 6 meses o ms 4 meses

Muchas bacterias se preservan bien cubriendo el agar en que estn creciendo con aceite mineral estril.

PRESERVACIN DE CULTIVOS POR SECADO RPIDO EN CONGELACIN

Es el procedimiento ms eficaz para la preservacin de cultivos. Las clulas se secan rpidamente, mientras son congeladas, mediante las siguientes etapas. 1.- La suspensin de clulas se pone en pequeos frascos que se sumergen en una mezcla de hielo seco y alcohol(-78 0C). 2.- Los frascos se conectan inmediatamente a una lnea de alta vaco , y una vez que se termin el secado cada frasco se sella bajo condiciones de vaco.

Nitrgeno lquido(temperatura a -1980C). Este procedimiento las clulas se congelan con un agente protector (glicerol o dimetil sulfxidico). Los especmenes congelados se guardan en refrigeradores con nitrgeno lquido.

1.- Su apariencia (caractersticas de desarrollo) 2.- Crecimiento en diferentes medios de cultivo 3.-Color y olor 1.2.3.4.Tipo de colonias en agar (cultivo en placa) Desarrollo en agar inclinado Desarrollo en caldo Desarrollo en gelatina por picadura

Los medios de cultivo pueden clasificarse segn diferentes criterios, pero los ms importantes son aquellos que se basan en: a) Su consistencia b) Su utilizacin c) Su composicin d) Su origen

1) Medios lquidos: Son los que se presentan en este estado, denominndose por esta razn caldos. El medio lquido ms utilizado es el llamado caldo nutritivo, compuesto principalmente de extracto de carne, peptona y agua. Se utiliza fundamentalmente cuando se pretende la obtencin de una suspensin bacteriana de una determinada concentracin. 2) Medios slidos: Se preparan a partir de los medios lquidos, agregndoles un agente gelificante. Los ms utilizados son la gelatina y el agar. Gelatina: Es una protena animal obtenida de los huesos. Agar-agar:Es un polmero de azcares obtenido de algas marinas. La proporcin de agarosa a agaropectina en el agar vara segn el alga de origen. 3) Medios semislidos: Se preparan a partir de los medios lquidos, agregando a stos un agente solidificante en una proporcin menor que para preparar medios slidos. Uno de sus usos es la investigacin de la movilidad de las bacterias

1) Medios comunes: Son aquellos que poseen los componentes mnimos para que pueda producirse el crecimiento de bacterias que no necesiten requerimientos especiales. El medio ms conocido de este grupo es el agar nutritivo o agar comn, que resulta de la adicin de agar al caldo nutritivo. Otros representantes de este grupo son el agar tripticase de soja, etc. 2) Medios de enriquecimiento: Son aquellos que, adems de las sustancias nutritivas normales, incorporan una serie de factores indispensables para el crecimiento de microorganismos exigentes. Este enriquecimiento se hace por adicin de sangre u otros productos biolgicos (sangre, suero, leche, huevo, bilis, etc.) que aportan dichos factores. En ocasiones es posible aadir suplementos artificiales a los medios para producir un enriquecimiento del mismo (p. ej. Polivitex, Isovitalex, etc)El gonococo, por ejemplo, necesita cistina y cistena para su crecimiento. Estas sustancias son aportadas por la sangre calentada adicionada al medio de cultivo (agar chocolate). 3) Medios selectivos: Son medios utilizados para favorecer el crecimiento de ciertas bacterias contenidas en una poblacin polimicrobiana. El fundamento de estos medios consiste en facilitar nutricionalmente el crecimiento de una poblacin microbiana especfica. Un ejemplo de medio selectivo es el caldo selenito, que se utiliza para favorecer el crecimiento de salmonellas y frenar el del resto de enterobacterias.

4) Medios inhibidores: Cuando las sustancias aadidas a un medio selectivo impiden totalmente el crecimiento de una poblacin microbiana, se denomina inhibidor. Los medios inhibidores podran considerarse como una variante ms restrictiva de los medios selectivos. Los medios inhibidores se consiguen habitualmente por adicin de sustancias antimicrobianas o de cualquier otra que inhiba completamente el desarrollo de una poblacin determinada. Un medio inhibidor es el MacConkey que permite el crecimiento de los grmenes Gram negativos e impide el crecimiento de los Gram positivos. 5) Medios diferenciales: Se utilizan para poner en evidencia caractersticas bioqumicas que ayuden a diferenciar gneros o especies. La adicin de un azcar fermentable o un sustrato metabolizable se utilizan para este fin 6) Medios de identificacin: Son los destinados a comprobar alguna cualidad especfica que puede servirnos para reconocer la identidad de un microorganismo. Estos medios han de poseer los elementos necesarios para asegurar el crecimiento de los microorganismos, el sustrato especfico que vaya a ser metabolizado y el indicador que nos muestre el resultado. El agar Kligler, el medio de Simmons y en general, cualquier medio al que se le haya aadido un elemento diferencial de un microorganismo.

1) Medios complejos: Fueron los primeros utilizados, y los ms empleados se preparan a partir de tejidos animales, y ms raramente de vegetales. Su composicin no es exactamente definida, y por consiguiente no es rigurosamente constante. Esto puede tener ciertos inconvenientes en condiciones experimentales, donde la reproductibilidad no podr ser exacta. En la prctica corriente estos medios dan excelentes resultados y son los ms empleados. 2) Medios sintticos: Son aquellos que contienen en su composicin exclusivamente sustancias qumicas conocidas y disueltas en agua destilada en proporciones determinadas, resultando un medio de composicin perfectamente definida. 3) Medios semisintticos: El gran nmero de factores de crecimiento exigidos para ciertos grmenes hace que la fabricacin de un medio sinttico para estos grmenes sea imposible o demasiado cara. En este caso se aportan los factores de crecimiento bajo la forma de un extracto orgnico complejo (extracto de levadura, extracto de tejidos, etc.).Ciertos grmenes no crecen en ningn medio por muy enriquecido que est ste, hacindolo exclusivamente en clulas vivas con unas caractersticas determinadas. Ejemplos de este tipo son, aparte de los virus, las Chlamydias, Rickettsias, etc.

MATERIAL CRUDO
EXTRACTO DE CARNE

CARACTERSTICAS
EXTRACTO ACUOSO DE CARNE DE RES CONCENTRADO EN PASTA

VALOR NUTRITIVO
CARBOHIDRATOS, COMPUESTOS ORGNICOS NITROGENADOS, VITAMINAS SOLUBLES EN AGUA Y SALES FUENTE PRINCIPAL DE NITRGENO; PUEDE CONTENER TAMBIN ALGUNAS VITAMINAS Y ALGUNOS CARBOHIDRATOS SE USA COMO AGENTE SOLIDIFICANTE DE LOS MEDIOS DE CULTIVO RICA EN VITAMINA B, NITROGENO ORGNICO.

PEPTONA

ES EL PTODUCTO QUE RESULTA DE LA DIGESTIN DE MATERAILES PROTEINICOS: CARNE, CASENA Y GELATINA ALGAS MARINAS

AGAR

EXTRACTO DE LEVADURA

SOLUCIN ACUOSA DE LEVADURA

FORMADA POR UNA DOBLE CAPA DE MOLCULAS DE LPIDOS. ALGUNAS PROTENAS SE PUEDEN LOCALIZAR TOTALMENTE DENTRO DE LA CAPA DE LPIDOS. LOS CARBOHIDRATOS SE ENCUENTRAN ASOCIADOS A LAS PROTENAS Y TAMBIEN A LOS FOSFOLPIDOS EN LA PARTE EXTERIOR DE LA CLULA. FUNCIN: AISLA A LA CLULA DEL EXTERIOR. SELECCIONA EL PASO DE SUSTANCIAS. ALGUNAS PROTENAS ACTUAN COMO BOMBAS Y CANALES EN EL PASO DE SUSTANCIAS.

ES LA PARTE GELATINOSA DEL CITOPLASMA. CONSTITUIDA FUNDAMENTALMENTE POR AGUA, PROTENAS, CARBOHIDRATOS ,LPIDOS, MINERALES Y RICA EN ENZIMAS. CONTIENE DISTINTOS ORGNULOS CELULARES Y EL CITOESQUELETO (MICROTUBULOS Y MICROFILAMENTOS.
FUNCIN: FACILITA EL TRANSPORTE DE DIVERSAS SUSTANCIAS.

ESTRUCTURA PEQUEA Y ESFERICA SITUADA EN EL INTERIOR DEL NCLEO. CONSTITUIDO POR CIERTAS REGIONES DE DETERMINADOS CROMOSOMAS Y TIENE COMO FUNCIN LA REPLICACIN DE CIDO RIBONUCLEICO.
FUNCIN: LA PRODUCCIN Y ENSAMBLAJE DE RIBOSOMAS, PARTICIPA DE MANERA INDIRECTA EN LA SISTESIS DE PROTEINAS.

SU FORMA PUEDE SER ESFERICA U OVOIDE. POSEE UNA DOBLE MEMBRANA CELULAR QUE SEPARA AL CITOPLASMA DEL LLAMADO NUCLEOPLASMA. PRESENTA UNOS POROS POR LOS CUALES PASAN LAS SUSTANCIAS DEL CITOPLASMA AL NCLEO Y VICEVERSA.
FUNCIN: ES EL CENTRO DE INFORMACION DE LA CLULA Y CONTIENE EL DNA.

FORMADO POR VESICULAS O CISTERNAS, RODEADAS POR MEMBRANAS Y COMUNICADAS ENTRE SI Y CON LA MEMBRANA NUCLEAR Y PLASMTICA. RER: SOBRE SU MEMBRANA EXTERNA SE UNEN LOS RIBOSOMAS. REL: NO POSEE RIBOSOMAS. FUNCIN: RER: SNTESIS, ALMACENAMIENTO Y GLUCOSILACIN DE PROTENAS. REL: SSTESIS DE LPIDOS Y ALMACENAMIENTO DE CALCIO E INTERVIENE EN EL METABOLISMO. FUNCIONES MUY RELACIONADAS CON EL APARATO DE GOLGI.

FORMADO POR UNA SERIE DE SACOS APLANADOS LLAMADOS CISTERNAS, REGULARMENTE DE CUATRO A SIETE EN CADA UNO. LAS CISTERNAS RELACIONADAS CON EL NCLEO RECIBEN EL NOMBRE DE CARA CIS Y LAS LOCALIZADAS MAS CERCA DEL EXTERIOR SE DENOMINAN CISTERNAS DE CARA TRANS. FUNCIN: AGREGAR MOLECULAS DE AZUCAR A LAS PROTENAS SISTETIZADAS Y SU EMPAQUETAMIENTO Y PARA FORMAR GRANULOS DE SECRESIN Y LISOSOMAS.

SON MACROMOLCULAS COMPACTAS CON MEMBRANA. SE PUEDEN ENCONTRAR PEGADOS AL RETICULO ENDOPLASMTICO, LIBRES O AGRUPADOS FORMANDO POLIRRIBOSOMAS. QUIMICAMENTE FORMADOS POR PROTENAS. FUNCIN: INTERVIENEN EN LA SSTESIS PROTEICA. SU ARN SE ORIGINA A PARTIR DEL NUCLEOLO.

ESTRUCTURAS OVALADAS O ESFERICAS RODEADAS DE MEMBRANA. FUNCIN: SIRVEN PARA ALMACENAR ENZIMAS DIGESTIVAS HIDROLTICAS, CAPACES DE DESTRUIR UNA GRAN VARIEDAD DE SUSTANCIAS, COMO GRASAS, PROTENAS Y CIDOS NUCLEICOS, Y CONVERTIRLOS EN MOLECULAS MAS PEQUEAS QUE PUEDEN SER ASIMILADAS. SU FUNCION ES LA DIGESTIN DEL MATERIAL ALIMETICIO QUE SE ALMACENA EN LAS CLULAS.

ORGNULOS RODEADOS DE DOBLE MEMBRANA. LA MEMBRANA INTERNA PRESENTA UNAS FORMACIONES DENOMINADAS CRESTAS, HACIA EL INTERIOR DE LA MATRIZ MITOCONDRIAL.
FUNCIN: LLEVA A CABO LA RESPIRACIN CELULAR, POR MEDIO DE REACCIONES DE OXIDACIN Y PRODUCCION DE ATP.

SE ENCUENTRAN ESTRUCTURAS EN FORMA DE PELOS LLAMADOS CILIOS. OTRAS PRESENTAN UNA O DOS ESTRUCTURAS MAS LARGAS LLAMADAS FLAGELOS. SE ENCUENTRAN EN LA SUPERFICIE DE LA MEMBRANA CELULAR. FUNCIN: DAN MOVILIDAD A LA CLULA O A SUSTANCIAS QUE ESTN EN CONTACTO CON AQUELLA.

SON ESTRUCTURAS DE FORMA REDONDA, LIMITADOS POR UNA MEMBRANA SENCILLA.

FUNCIN: PARTICIPAN EN LA OXIDACIN DE ALGUNOS COMPUESTOS.

ESTRUCTURAS LOCALIZADAS CERCA DEL NCLEO. TIENEN ESTRUCTURAS CILNDRICAS, HUECAS Y CORTAS. LA PARED DE LOS CENTRIOLOS ESTA FORMADA POR NUEVE TRIPLETES DE MICROTBULOS. FUNCIN: GENERAN LOS MICROTBULOS Y EL HUSO MITTICO EN LA DIVISIN CELULAR.

SE ENCUENTRAN EN DIFERENTES TIPOS DE CELULAS, ESPECIALMENTE EN LAS PLANTAS. SON VESICULAS ALARGADAS RODEADAS DE MEMBRANA Y TIENEN FORMA DE SACO.
FUNCION: EN LAS CLULAS ANIMALES CONSTITUYEN EL REA DE DIGESTIN DE PARTCULAS Y LQUIDOS. EN LAS CLULAS VEGETALES SON REA DE ALMACENAMIENTO.

RODEADO A LA MEMBRANA CELULAR, EN CLULAS VEGETALES. ES UNA ESTRUCTURA RGIDA, GRUESA, RESISTENTE, INCOLORA, PERMEABLE A LOS GASES Y EL AGUA. COMPUESTA PRINCIPALMENTE POR CELULOSA. FUNCIN:
PROTEGE A LA CLULA VEGETAL Y ES PERMEABLE A LA MAYORA DE LAS MOLCULAS. DA FORMA A LA CLULA VEGETAL Y CONSTITUYE EL ESQUELETO DE LA PLANTA.

SON ORGANELOS NICOS EN LAS PLANTAS. SEGN LA COLORACIN QUE ADOPTAN RECIBEN LOS NOMBRES DE: CLOROPASTOS, LEUCOPLASTOS Y CROMOPLASTOS. CLOROPLASTO TIENE TRES ESTRUCTURAS INTERNAS FORMADAS POR PLEGAMIENTOS DE LA MEMBRANA: LA GRANA, LAS LAMELAS Y EL ESTROMA. FUNCIN: LA FOTOSNTESIS

ES IMPORTANTE QUE EL ALUMNO CONOZCA A LA CLULA Y TIPOS DE CLULAS, POR EL CUAL ESTAMOS CONSTITUIDOS TODOS LOS SERES VIVOS (UNICELULARES Y PLURICELULARES) Y DONDE SE LLEVAN A CABO TODOS LOS MECANISMOS DE AUTOPERPETUACIN: COMO NUTRICIN, RESPIRACIN, REPRODUCCIN, EXCRESIN, SECRESIN, ADAPTABILIDAD, HOMEOSTASIS, ETC., DENTRO DE UN ORGANISMO. YA QUE ES UNA ESCUELA CON PERFL FSICO-MATEMTICO, ES IMPORTANTE TENER UN CONOCIMIENTO GENERAL DE BIOLOGA BSICA.