Cromossomos Sexuais - X e Y Determinao e Diferenciao Sexual

Gentica II Profa. Dra. Ana Elizabete Silva

Cromossomo X
Ross et al. (Nature, 2005) Estrutura funcional:
5% genoma nuclear (160 Mb),

SUBMETACNTRICO
99,3% da sequncia eucromtica do X 1098 genes codificantes 699 genes conhecidos baixa densidade gnica: 7,1genes/Mb genes funcionais em ambos os sexos.

ESTRUTURA FUNCIONAL DO CROMOSSOMO X

CROMOSSOMO X: dividido em regies funcionais refletindo fenmenos de inativao-ativao. a-SEGMENTO TERMINAL Xp: regio pseudoautossmica (PAR) -permanece sempre ativa -duplica-se sincronicamente nos crs. X e Y

b-REGIO Xcen-p11: -permanece sempre ativa -duplicao precoce

c-REGIO Xcen-q13: -presente sempre no X normal (XIC) -localizao do gene XIST sempre ativo apenas no X inativo

Evoluo dos cromossomos sexuais Ohno (1967): cromossomos sexuais de mamferos evoluiram de um par de autossomos (300 milhes anos)

Isolamento da regio determinante do sexo no Y

barreira para recombinao entre X e Y: divergncia acmulo de mutaes no Y e degenerao delees

XCR: regio conservada do X (descendente do autossomo) XAR: regio adicional do X (adio de outro autossomo)

Consequncia da Falta de Recombinao X-Y

Aquisio de genes especficos a masculinidade envolvidos apenas na espermatognese Perda gradual de genes homlogos ligados ao X Reduo do Y remoo de sequncias redundantes Mecanismo de converso gnica compensar a falta de recombinao X-Y Infertilidade masculina deleo espordica ocasional de genes essnciais envolvidos na espermatognese

Anomalias estruturais do cromossomo X Delees Regio Xcen-q13

Isocromossomos
Isodicntricos

Isocromossomos Xp Telocntricos Xp

Regio Crtica ausente.

Centro de Inativao do X (Xic), sem a

Regio Crtica qual o cromossomo no pode formar o corpsculo de Barr e permanece ativo.

Inativao do X
Fmeas (46,XX) 2 cpias de cada gene ligado ao X Machos (46,XY) apenas 1 cpia desvantagem?

Hiptese Lyon (1960)

1 cromossomo X em cada clula somtica da mulher inativado

Compensao de Dose

- estgio de blastocisto
- contagem dos cromossomos X clulas 46,XY e 45,X nenhum X inativado.

- clulas 46,XX e 47,XXY 1 X inativado.

Corpsculo de Barr ou Cromatina Sexual Cromossomo X

inativo no ncleo interfsico.

Cromatina Sexual - corpsculo de Barr

- machos hemizigotos e fmeas funcional/e hemizigotas. - escolha ALEATRIA (exceto clulas das membranas extraembrionrias) FIXADA.

Desvio da Inativao:
Manifestao clnica varivel em mulheres heterozigotas para doenas ligadas ao X desde absolutamente normal at totalmente afetada

 Fmea adulta: mosaico de clones derivados de diferentes

clulas embrionrias.

Machos e fmeas homozigotas pelagem preta ou laranja Fmeas heterozigotas pelagem malhada

Mecanismos de inativao do X - XIC (centro de inativao do X) em Xq13 locus controla a iniciao e a propagao (contagem e escolha) evento epigentico silenciamento transcricional de um dos cromossomos

X em clulas somticas

- X sem o XIC no so inativados - XIST (Xist) X-Inactivation-Specific Transcript RNA de 17 kb codificado pelo X inativo atua sobre o cromossomo X inativado. - X anormal com dois XIC corpsculo de Barr bipartido.
- t(X;aut) contendo XIC espalhamento parcial da inativao do X.

t(X,aut) contendo XIC: mostra espalhamento parcial de inativao do X no segmento autossmico

STRACHAM, 2002

A INATIVAO DO X REQUER ALGUMAS ETAPAS: 1. Iniciao: locus XIST sobre cada cromossomo X expressado, de modo que a transcrio interrompida em um dos crs. X,

mas mantida no outro X inativado (cromatina sexual).

Regulao de XIST no X ativo regulado em cis por um gene antisense Tsix bloqueia o acmulo e espalhamento de XIST no Xa

Hipermetilao do DNA do Xi nas ilhas CpG (silenciamento)

Metilao Genes housekeeping (constitutivos): regies 5 promotoras dinucleotdeos C-G Ilhas CpG. Metilao extensa (enzima: DNA-metiltransferase)

inativa a transcrio.

2. Espalhamento bidirecional passagem de alguns sinais a longa

distncia de uma maneira cis, sem afetar o outro cromossomo.

3. Manuteno da inativao
-modificaes na conformao da cromatina. -hipoacetilao e metilao de histonas do nucleossomo do Xi: heterocromatina (cromatina compactada transcricionalmente inativa) replicao tardia

a) antes da inativao: XIST expresso em uma forma instvel, fatores bloqueadores impedem

sua regulao (gene antisense Tsix) b) RNA XIST se estabiliza, h regulao transcricional ou ocorre liberao dos fatores

bloqueadores.
c) espalhamento RNA XIST sobre o X antes da sua inativao.

d) modificaes da cromatina: hipoacetilao e metilao das histonas, metilao dos promotores dos genes ligados ao X X inativo.

e) silenciamento transcricional dos genes devido

ao espalhamento do RNA XIST

Obs.: no futuro Xa persistncia de Tsix prevenindo a formao da cobertura de XIST sobre o Xa

MECANISMOS DE ESTABELECIMENTO E MANUTENO DO ESTADO INATIVO A- Xist associa-se c/ X em cis recruta complexos protenas para silenciamento inicial (hipoacetilao de histonas) reversvel

B- Xist recruta outros complexos de protenas (metilao de histonas) manuteno do estado inativo reversvel

C- Recrutamento de fatores p/ manuteno das modificaes das histonas e induzir outras mudanas epigenticas (metilao regio promotora do DNA) ESTADO INATIVO IRREVERSVEL

REATIVAO DO CROMOSSOMO X - Cromossomo X inativo reativado nos ovcitos pouco antes da

meiose.
Genes que escapam da inativao: principalmente em Xp (PAR) STS - enzima esteride sulfatase (ictiose). MIC 2 ZFX A1S9T RPS4X
Primeiro foram submetidos ao processo de inativao e posteriormente sofreram reativao
A1S9T
MIC2 STS ZFX

RPS4X

VARIABILIDADE NA EXPRESSO DE GENES DO CROMOSSOMO X

Mulheres expressam diferentes genes do Xi: heterogeneidade do nvel de expresso entre as mulheres Explicao para algumas diferenas comportamental e biolgica entre mulheres e entre homens e mulheres Carrel & Willard (2005): estudo de 95% de genes do X em fibroblastos de 40 mulheres:

75% genes: submetidos a inativao

15% genes (94) do Xi escapam da inativao (todas mulheres): diferindo nas regies do X

10% genes: padro varivel de inativao entre as mulheres e expressados diferentemente em alguns Xi

Distribuio no casual de genes que escapam da inativao ao longo do cromossomo X: principalmente Xp distal aneuploidias de Xp mais severa que Xq

Doenas ligadas ao X: reconhecidas pelo padro de herana Associado com grande nmero de doenas: 10% das doenas mendelianas

www.nature.com/news/2005

Cromossomo Y
acrocntrico (70 Mb) Gene ancestral Sox3 heterocromatina constitutiva (maior parte) DNA no codificador, alta e moderada/e repetitivo converso gnica recombinao com o prprio Y pobre em genes (~251 genes) maioria dos genes controlam a funo sexual. desaparecimento em 5-10 milhes de anos???

ESTRUTURA DO CROMOSSOMO Y

1- Regio pseudo-autossmica maior (PAR1) mantm-se

ativa no X inativo.
- extremidade dos braos curtos do X e do Y - homologia de 2,7 Mb; - contm cerca de 12 genes no submetidos a inativao -frequncia alta de recombinao

na meiose masculina
-stio de crossing-over obrigatrio
Delees dos fatores de azoospermia(Yq11): AZFa, AZFb e AZFc: infertilidade

2- Regio pseudo-autossmica menor (PAR2):

- 330 kb na extremidade dos braos longos do X e do Y (recombinao no obrigatria)

- Alguns genes submetidos a inativao

Regio eucromtica do X: 6 x maior que do Y Outras regies de homologia

Xp21.3 e Yq proximal

regio Yp-Xq

regio Yq-Xq

Regies homlogas de X e Y.

Cromossomo Y

determinao sexual em humanos

- Eventos que evidenciam que o Y responsvel pela determinao do sexo masculino: a- indivduos 45,X mulheres

b- indivduos 47,XXY homens

garante o fentipo masculino, independente/e do nmero de crs. X.

c- indivduos 46,X,iso(Yq) ou del(Yp) mulheres com fentipo de S. Turner.

Yp fatores determinantes do sexo masculino

3- Regio Yp

- TDF (prximo PAR1)

- ZFY protena zinc-finger

- SRY regio do Y determinante do sexo outros genes do Y - Yp - fator STS (esteride sulfatase) - fator Xg

-Yq

- gene para o tamanho da coroa dentria, gene da estatura - AZF previne a azoospermia

ANTIGOS CANDIDATOS A TDF - FATOR DETERMINANTE DO TESTCULO

Pesquisa sobre TDF no Y humano

a- gene ZFY protena zinc-fingers atua como fator de transcrio (TF).
homens XX, porm negativos para ZFY excluiu-o como

candidato. ZFY: homologia em Xp com ZFX escapa da inativao nas fmeas.

b- gene SRY novo candidato a TDF diferentes anlises genticas: - gene determinante do sexo

- presente e conservado em diferentes organismos

SRY - protena sry: apenas em testculos fator de transcrio regula

expresso de outros genes

SRY

Mapa do cromossomo Y

Factor Determining Testis - TDF

Estudos em camundongos transgnicos transferncia do SRY clonado para um ocito fertilizado XX

macho XX
33.17 33.13 33.17 XY-m 33.09 XX-F 33.13 XX- m

SRY controle ZFY

Animais transgnicos para o gene SRY: 33.17 macho XY e 33.13 macho XX

Estudos em Homens 46,XX Sexo Reverso

mutaes em SRY

- caritipo 46,XY - fentipo feminino

avaliao cromossmica em homens 46,XX

cromossomo

X com o gene SRY

crossing defeituoso.

Crossing durante a meiose

Regio pseudoautossmica Regio crossing raro

Avaliao cromossmica em
homens 46,XX

SRY: DETERMINAO DO SEXO MASCULINO SEXO REVERSO

HOMENS XX: possuem antgeno H-Y positivo; Fenotipicamente homens; apresentam o gene SRY; so estreis; aspecto fenotpico da S. Klinefelter, mas com estatura mais baixa; maioria dos casos parte de Yp foi permutado em Xp MULHERES XY: ausncia de SRY no cromossomo Y; mecanismo gentico: recombinao desigual durante a espermatognese, entre os cromossomos X e Y;. FREQUNCIA= 1:20.000

DETERMINAO E DIFERENCIAO SEXUAL

Determinao Sexual: relacionada com o desenvolvimento das gnadas (testculo ou ovrio) processo que inicia-se com a gametognese dos progenitores at a diferenciao gonadal especfica de cada sexo Diferenciao Sexual: Resulta no desenvolvimento das genitlias at o desenvolvimento das caractersticas sexuais secundrias

 MENINO OU MENINA?

1 em 3000 crianas nasce com intersexo

CLASSIFICAO DOS NVEIS SEXUAIS

Sexo gentico: 46,XX ou 46,XY Sexo gonadal: testculos e ovrios Sexo genital interno: -ovrio: trompas de Falpio, tero e metade ou 2/3 superiores da vagina -testculos: epiddimo, vasos deferentes, vesculas seminais e ducto ejaculatrio Sexo genital externo: -ovrio: permanecem sem induo (fmeas) -testculos: prstata, pnis e uretra peniana, escroto e testculos Sexo psicolgico e social: identidade e desempenho pessoal Caracteres sexuais secundrios e alteraes pubertrias: -mulheres: plos axilares e pbicos, seios, menstruao, etc -homens: plos axilares e pbicos, barba, alterao da voz, etc

DETERMINAO E DIFERENCIAO SEXUAL

Embrio (6a. - 7a. Semana):
gnadas bissexuais Genes reguladores:a partir da 7a. s

-SRY (Yp)
-WT1 (11p13) Tumor de Wilms -SOX9 (17q) -DSS (Xp21) diferenciao ovariana -DAX-1 (X) hipoplasia adrenal

congnita

Diferenciao sexual: completa ~1214 semanas

GENES ENVOLVIDOS NA DETERMINAO SEXUAL SRY: no o nico responsvel pela determinao sexual Fetos XY SRY+ desenvolvido como fmea -SOX9 (17q24): expressado cedo no desenvolvimento fetal (duas cpias) essencial p/ desenvolvimento dos testculos e outros rgos reprodutores masculinos. Fmeas camundongos transgnicas (cpia adicional Sox9 sexo reverso fmea macho)

-SOX3 (Xq26-q27): pode reprimir ou interferir com o promotor de testculo SOX9

-DMRT1 (9p24.3): duas cpias desenvolvimento dos testculos deleo leva sexo reverso (homem fmea XY)
-DAX1 (Xp21.3): gene anti-testculo (efeito feminilizante) cpia adicional (duplicao Xp) sexo reverso (homem fmea XY)

-WT1 (11p13) e SF1 (9q34): diferenciao da crista urogenital

Clulas de Leydig(8a. s.: testosterona)

Ductos de Wolff (condutos deferentes, epiddimo, vescula seminal e prstata) Clulas de Sertoli (7-9a.sem:HAM)

regresso dos Ductos de Muller

trompas, tero, poro superior da vagina

CLASSIFICAO DAS ANORMALIDADES DA DIFERENCIAO SEXUAL

1-Disgenesia gonadal (erros no sexo gonadal) S. Turner e S. Klinefelter Disgenesia gonadal pura (S. Swyer) Disgenesia gonadal mista Hermafroditismo verdadeiro Sexo reverso ou homem XX

HERMAFRODITISMO
Presena de tecido ovariano e testicular,

genitlia ambgua
maioria dos casos: ovotestis (uni ou bilateral)

caritipo tpico: 46,XX (SRY-)

pequena porcentagem: quimeras (clulas XX e XY de diferentes zigotos)

2/3 casos: genitlia externa masculina

rara presena de espermatozides Presena de tero e menstruao

HERMAFRODITISMO
Caractersticas:
frequentemente presena de tero condutos genitais conforme gnadas presentes genitlia externa ambgua ou masculinizada, hipospadia, criptorquidia hrnia inguinal (ovotestis ou testculo) ginecomastia na puberdade menstruao em alguns casos caracteres sexuais secundrios femininos incompletos

CLASSIFICAO DAS ANORMALIDADES DA DIFERENCIAO SEXUAL

2- Pseudo-hermafroditismo feminino Hiperplasia congnita da adrenal (AR) -deficincia da 21-hidroxilase -deficincia da 21-hidroxilase com perda de sal
3- Pseudo-hermafroditismo masculino Deficincia de produo de testosterona Defeito do metabolismo dos andrgenos Ex. S. de insensibilidade completa aos andrgenos (S. feminizao testicular)

PSEUDO-HERMAFRODITISMO FEMININO
Incidncia: 1:5000 nascimentos Gnadas: ovrios caritipo feminino: 46,XX genitlia interna feminina: ovrios, tero e trompas de Falpio genitlia externa masculinizada em grau varivel (ou ambgua) virilizao da genitlia na vida fetal Ex. Hiperplasia congnita da adrenal (AR) -biossntese do cortisol: superproduo de esterides com atividade andrognica (deficincia da 21--hidroxilase)

PSEUDO-HERMAFRODITISMO MASCULINO

Incidncia: 1:65.000 sexo masculino Gnadas: testculos (testosterona normal) caritipo masculino: 46,XY fenotipicamente mulheres (mamas, amenorria primria, ausncia dos derivados de Mller) anomalias das gnadas e condutos genitais genitlia externa alterada: feminilizada ou ambgua (vagina em fundo cego) Ex. S. da insensibilidade andrognica completa (S. de feminizao testicular) herana recessiva ligada ao X: ausncia ou defeito da funo de receptores andrgenicos nos rgos alvo