Micro_?
Microscope optique
Microscope lectronique
0.1nm 1 nm 10 nm 100 nm 1 m
Fourmis Atome Acide Protine Virus Bactrie Cellule de plante et animale Rotifre
amin
Chloroplaste
_Organisme?
Qui est vivant
Possde un mtabolisme
Eubactries
Pathognes qui peuvent causer une maladie Bactries du sol, eau, air, tube digestif, etc. Peuvent utiliser loxygne ou pas Composs organiques et inorganiques utiliss comme source de carbone Composs organiques ou inorganiques utiliss comme source dnergie Certaines peuvent se diffrentier
ex. Bacillus et Clostridium - Sporognse
5
Travailler en Microbiologie
La Technique Strile
1re tape
Se laver les mains aussitt que vous entrez dans le laboratoire
Aide prvenir la contamination des cultures avec des microorganismes de votre flore naturelle
2e tape
Faire la dsinfection de votre espace de travail
Aide prvenir la contamination des cultures avec des microorganismes de votre environnement
Le Matriel
Le matriel utilis pour la culture et la manipulation de microorganismes doit tre strile et maintenu strile
Milieu de culture prouvettes Assiettes de Ptris Boucle densemencement Etc.
3e tape
Utiliser la technique strile pour tous les transferts de microorganismes
Prviens la contamination de vos cultures Prviens la contamination de votre environnement Prviens la contamination de soi
Toutes les bactries sont des opportunistes
Retirer linoculum
Rchauffement de louverture
Inoculation
Garder la boucle lextrmit du fil densemencement parallle avec la surface de la glose Faire des stries de gauche droite 12:00
Microorganismes en Laboratoire
Les Milieux de Croissance
Buts
Croissance sous des conditions contrles Maintien Isolation de cultures pures Tests mtaboliques
Types
Liquides (bouillons)
Permets la culture en suspension Distribution uniforme des lments nutritifs, environnementaux et autres Permets la croissance de grands volumes
La Croissance en Bouillon
Non-inocul Limpide
Turbide + sdiment
Turbide
Limpide + sdiment
Milieux Solides
Agents de solidifications
La glatine
Protine Source animale Solide des tempratures < 28oC
Lagar
Polysaccharide driv dune algue Demeure solide >37oC Fond 100oC
Les colonies sont originaires de cellules uniques de diffrentes bactries puisquune colonie tale de faon rpte gnre des colonies identiques
La Microscopie
Les Colorations
Les Colorants
Cationique : Chargs positivement
Interagissent avec les groupements ngatifs des membranes plasmiques
Ex. Bleu de mthylne, cristal violet, safranine, vert de malachite
Coloration Positives
Coloration Ngatives
Colorations Positives
A B
Coloration du spcimen
Coloration indpendante de lespce
Colorations Ngatives
Coloration de lenvironnement de fond
Coloration indpendante de lespce
Mthodes
Coloration simple:
Un seul agent de coloration Colorant cationique ou anionique Permet de dterminer la taille, la forme, et larrangement des cellules
Les Bacilles
Plans de division Arrangements Diplobacille Streptobacille
Mthodes
Comptes viables Nombre le plus probable Comptes directs
Comptes Viables
Dilutions en sries de lchantillon talement des dilutions sur milieu appropri Chaque colonie simple est originaire dune unit formatrice de colonie (UFC) Le nombre de colonies quivaut une approximation du nombre de bactries vivantes dans lchantillon
63 UFC/0.1mL de 10-5 630UFC/1.0mL de 10-5 630UFC/ml X 105 = 6.3 x 107/ml dans lchantillon original
Avantages:
Dnombre les microorganismes viables Peu distinguer diffrents microorganismes
Limites:
Pas de milieu universel Ncessite la croissance du microorganisme UFC une bactrie = Ex. Un UFC de Streptococcus un de E.coli ?