Cromatografia Liquida e Gasosa

Andrei Kaiser

O que Cromatografia ?
Definio : A cromatografia uma tcnica de separao na qual os componentes a serem separados de uma mistura migram entre duas fases sendo uma fase mvel e a outra estacionria. A natureza qumica e fsica dos componentes da mistura definem o grau de afinidade entre as duas fases, acontecendo o fenmeno de migrao diferencial .

CLAE -HPLC
Fase mvel Fase estacionria (Componentes retidos)

(amostra)

Migraes diferenciais
Analitomov

Analitoest

K = Analitoest / Analitomov= coeficiente de partio

O que Cromatografia a Lquido HPLC?

Definio : Na tcnica de cromatografia a lquido a fase mvel um lquido e a fase estacionria um slido .

O processo cromatogrfico acontece na fase lquida , sendo que os componentes da amostras devem estar dissolvidos.

Instrumentao para HPLC

Componentes de um Cromatgrafo a Lquido HPLC

Um cromatgrafo a lquido composto de 3 partes principais : Injetor : o dispositivo que tem a funo de introduzir a amostra na fase mvel ; Coluna cromatografia : o dispositivo que tem a funo de separar os componentes da amostra ; Detector : o dispositivo que tem a funo de detectar os componentes eludos da coluna cromatogrficas

Componentes auxiliares de um HPLC

Bomba :
o dispositivo que bombeia e controla o fluxo e a presso da fase mvel ( solvente ); composta de um ou mais pisto acoplados a um sistema de vlvulas. Fornece uma alta presso.

Componentes auxiliares de um HPLC

Vlvula de purga : o dispositivo que permite a troca rpida de solvente desviando o fluxo de solvente para o dreno.
Misturador : o dispositivo que homogeneza a mistura de solventes quando operando com gradiente de eluio .

Reservatrio para Fase Mvel

Fase estacionria

Fase Estacionria
Pr-Coluna : o uma pequena coluna instalada a montante da coluna analtica . Tem como objetivo reter slidos e em muitos casos reter materiais que por reaes qumicas podem precipitar sobre a fase estacionria. Coluna: Dimetro; Comprimento;

Fase Estacionria
A fase estacionria mais utilizada composta de partculas microporosas de slica. So permeveis ao solvente e possuem uma rea superficial de varias centenas de metros por gramas. No deve ser utilizada em sistemas com pH acima de 8,0.

Colunas Cromatogrficas
Fases estacionrias :
Slica- C8 Slica- C18 Slica- C18 ( ODS) Slica- NH2 Slica- Diol Slica Troca Inica Resinas DVB-ST Sulfonadas Ca Resinas DVB-ST porosas

Coluna e pr-coluna HPLC

Fase Estacionria
Pr-Coluna : o uma pequena coluna instalada a montante da coluna analtica . Tem como objetivo reter slidos e em muitos casos reter materiais que por reaes qumicas podem precipitar sobre a fase estacionria. Coluna: Dimetro; Comprimento;

Processo de Eluio
Definio:
Pode ser descrita como deslocamento do soluto na fase estacionria.

Srie eluotrpica
Ordena os solventes de acordo com suas habilidades relativas de deslocar soluto de um dado adsorvente.

Fora eluente:
uma medida da energia de adsoro do solvente

Cromatografia com fase normal:

Utiliza uma fase estacionria polar e um solvente menos polar.

Cromatografia com fase reversa:

Utiliza uma fase estacionria apolar ou fracamente polar e um solvente polar.

Detectores Ultravioleta:
Usando uma clula de vasos. mais comum, usado na CLAE. Porque muitos solutos absorvem a luz ultravioleta. So bons para a eluio por gradiente com solventes no-absorventes.

Detectores por ndice de Refrao:

Seqncia
Lavagem da coluna -MeOH por 30 minutos Condicionamento da coluna com fase mvel Monitoramento da linha de base Injeo das amostras

Eriocromo 10-5

Cromatografia gasosa
A amostra transportada por uma corrente de gs atravs de uma coluna empacotada com um slido recoberta com uma pelcula de um lquido.

Mtodo
introduo da mistura de prova ou amostra em uma corrente de gs inerte; normalmente hidrognio, hlio, nitrognio ou argnio, que atuaro como gs de arraste; As amostras lquidas vaporizam-se antes da injeo no gs de arraste; O fluxo de gs passa pela coluna empacotada atravs da qual os componentes da amostra se deslocam a velocidades influenciadas pelo grau de interao de cada componente com a fase estacionria no voltil.

Mtodo
As substncias que tm a maior interao com a fase estacionria so retidas por mais tempo e, portanto, separadas daquelas de menor interao; medida que as substncias eluem da coluna, podem ser quantificadas por um detector e/ou tomadas para outra anlise.

Sistema de injeo de amostra

Os sistemas de injeo mais comuns para a introduo de amostras de gs so vlvula amostradora e seringa.

Detector por ionizao de chama (FID)

Consiste em uma chama de hidrognio (H2)/ ar e um prato coletor; O efluente passa da coluna do CG atravs da chama, a qual divide em molculas orgnicas e produz ons; Os ons so recolhidos em um eletrodo negativo e produzem um sinal eltrico.

Detector por ionizao de chama (FID)

O FID extremamente sensvel com uma faixa dinmica grande. Sua nica desvantagem que destri a amostra. Os detectores por ionizao de chama so usados para detectar hidrocarbonetos (HC) como o metano (CH4), etano (C2H6), acetileno (C2H2), etc.

Detector por ionizao de chama (FID)

A amostra a ser analisada mistura-se aos gases Os ons e eltrons que se formaram na chama ficam presos em um eletrodo coletor permitem que uma corrente flua no circuito externo. A corrente proporcional aos ons formados, o que depende da concentrao de hidrocarbonetos nos gases e detectada por um eletrmetro e mostrado na sada anloga.

Detector fotomtrico de chama

Permite medies sensveis e seletivas de enxofre voltil e compostos de fsforo. O princpio de deteco a formao de espcies de enxofre excitado (S2*) e HOP* em uma chama.

Detector fotomtrico de chama

Um tubo fotomultiplicador mede a emisso de quimiluminescncia caracterstica dessas espcies. O filtro ptico pode ser trocado para permitir ao fotomultiplicador visualizar luz de 394 nm para a medio de enxofre ou 526 nm para fsforo. O princpio de deteco a formao de espcies de enxofre excitado (S2*) e HOP* em uma chama.

Detector fotomtrico de chama

A resposta do detector ao fsforo linear, ao passo que a resposta ao enxofre depende da concentrao. Normalmente utiliza-se (N2) como gs de arraste.