Flipping lipids

FLIPASAS

Los lpidos pueden ser llevados de un lado a otro otrade las monocapas que forman labicapa lipdica membranal por enzimas llamadas flipasas. Algunas flipasas operan pasivamente y no requieren ningn gastode energa Otras flipasas actande manera activa y requieren la participacindel ATP como generadorde energa Las flipasas activas pueden generar profundas asimetras membranales.

Se postula que antes del ensamblaje de los peptidoglicanos en bacterias el precursor de el Lipido II el cual es sintetizado en el citoplasma cruza la membrana citoplasmtica y es digerida en esta capa Mohammadi y colaboradores muestran que estara involucrada la protena integral de membrana FtsW

FTSW
Protena esencial que se localiza en el sitio de divisin celular . Miembro de protenas SEDs Tiene diez segmentos transmembranales. El gen que la codifica est prximo al gen que codifica para MurG enzima responsable de producir Lpido II. Otras Proteinas que pueden ser flipasas son RodA and SpoVE. Organismo estudiado E. coli

ENSAYO ANTECEDENTE
Para comprobar su hiptesis usaron FRET(microscopa de fluorescencia dependiente de transferencia de energa)en este caso de la energa entre fluorforos entre biomolculas marcadas donadoras- aceptoras El ensayo consista en vesculas derivadas de clulas bacterianas conteniendo un donador un lpido II marcado con NBD(7-nitro-2,1,3benzoxadiazol-4-yl)

ENSAYO ANTECEDENTE
Como aceptor de la fluorescencia la vancomicina marcada con tetramethylrhodamine cadaverine (TMR) Un fuerte seal producida por la fluorescencia entre la energa transferida entre los mencionados fluorroforos cercanos y slo cuando el lpido II est presente . Se basa en la inhabilidad de la vancomicina para cruzar la membrana.

RESULTADOS DEL ARTCULO

En vesculas de Escherichia coli que sobrexpresaron FtsW,los autores observaron ms translocacin de Lpido II que en vesculas de celulas salvajes.
En vesculas de este mismo m.o en las cuales el FtsW haba sido deletado, observaron un decremento de la translocacin de Lpido II.

Para probar la implicancia de FtsW directamente , los autores trabajaron con vesculas unilamelares largas (LUVs) conteniendo NBDlipid II con o sin FtsW En las LUVs sin FtsW la adicin de ditionato para reducir el NBD label result en decremento del 50% de la seal fluorescente la cual corresponde al lpido II presente en la hoja exterior de la membrana.

En LUVs conteniendo FtsW,este quenching se increment a 70% indicando que FtsW acta directamente y es suficiente para mediar la translocacin de Lpido II.

Gracias