Separacin Slido-Lquido

Separacin y Procesos
Biotecnolgicos

Cules son las etapas en las
cuales hay una Separacin
Slido-Lquido?
Rompimiento Clulas
Precipitacin cidos
Nucleicos, Proteasas
Concentracin
Purificacin Alta
Resolucin
Refinamiento
Separacin Material
Intracelular (Desechos)
Caldo de Fermentacin
Separacin de Clulas
Sin Clulas
Clulas inmovilizadas
Clulas retenidas
Con Clulas
Clulas
Sobrenadante
Tratamiento de cuerpos
incluidos
Permite
Altos niveles de pureza
Estabilidad del producto
Rompimiento Clulas
Precipitacin cidos
Nucleicos, Proteasas
Concentracin
Purificacin Alta
Resolucin
Refinamiento
Separacin Material
Intracelular (Desechos)
Caldo de Fermentacin
Separacin de Clulas
Sin Clulas
Clulas inmovilizadas
Clulas retenidas
Con Clulas
Clulas
Sobrenadante
Tratamiento de cuerpos
incluidos
Permite
Altos niveles de pureza
Estabilidad del producto
Procesos de Separaciones Slido-Lquido

Cundo se utiliza la separacin slido-lquido?

Procesos de Separaciones Slido-Lquido

Cundo se utiliza la separacin slido-lquido?

Separacin de clulas
Separacin de desechos celulares
Recuperacin de cuerpos incluidos Qu son?
Concentracin


Procesos de Separaciones Slido-Lquido

Cundo se utiliza la separacin slido-lquido?
Separacin de clulas
Separacin de desechos celulares
Recuperacin de cuerpos incluidos Qu son?
Concentracin


PProcesos de Separaciones Slido-Lquido
Cundo se utiliza la separacin slido-lquido?
Separacin de clulas
Separacin de desechos celulares
Recuperacin de cuerpos incluidos Qu son?
Concentracin
Qu contiene la suspensin proveniente del
fermentador?
m.o intactos
Fragmentos de m.o Por qu?
Fase slida Ingredientes insolubles del medio, i.e glucano.
Sustrato insoluble residual

Sustrato soluble residual
Fase lquida Metabolitos intermedios
Productos deseados
Otros productos solubles

Cules son las operaciones unitarias utilizadas para la
separacin slido-lquido? Cules conocen sus ecuaciones de
diseo?

Cules son las operaciones unitarias utilizadas para la
separacin slido-lquido?
Sedimentacin
Centrifugacin
Filtracin
Operaciones auxiliares
Coagulacin
Floculacin
Operaciones de membrana
Microfiltracin
Ultrafiltracin
Dilisis
Extraccin lquido-lquido
S
S
Centrifugacin



Operacin unitaria utilizada para la separacin:
slido-lquido
lquido-lquido

CENTRIFUGACIN

Centrifugacin utiliza la diferencia de densidad entre
los slidos y el fluido que lo rodea.

Es una de las principales operaciones utilizadas en la
separacin de clulas desde caldos biolgicos,
especialmente cuando los caldos no son fciles de
filtrar.
Tambin se emplea en la remocin de desechos
celulares, separacin de precipitados proteicos y
recuperacin de productos insolubles (cuerpos incluidos)


Escala Industrial Escala Laboratorio
Diferentes escalas
Centrifugacn v/s Sedimentacin

Cuando la suspensin se encuentra
detenida los slidos ms densos comienzan
a decantar bajo:

- La accin de la fuerza de gravedad,
proceso llamado sedimentacin.

- Un campo centrfugo el proceso
se llama centrifugacin.
Fuerza
Cuando se utiliza la centrifugacin la diferencia entre la densidad
los slidos (clulas o partculas) y el caldo, se incrementa por la
accin de la fuerza centrfugas que se generan por las altas
velocidades de rotacin de los equipos. El proceso de separacin
es ms rpido
Ejemplos de Centrifugas


Tipo Tubular
De Discos
Comparacin entre los diferentes tipos de
centrfuga
Tipo de Tamao de Contenido Prueba de Prueba de
Centrifuga Partcula Slidos Sedimentacin Consistencia
micras % a 1.000 G (min) de los Slidos
Tubular 01 - 200 < 0.5 2 - 20 torta firme
Cmara Mltiple 0.5 - 5.000 1 - 5 2 - 20 torta firme
Discos y boquillas 0.5 - 200 2 - 20 1 - 10 lodo
Discos Tazn abierto 0.5 - 200 < 10 1 - 10 lodo
Discos y boquillas 0.5 - 200 < 10 1 - 10 lodo
Discos Intermitentes 0.15 - 200 < 1 1 - 10 torta firme
Tazn Slido 2 - 5.000 1 - 5 torta firme
Comparacin entre los diferentes tipos de centrifuga
Caractersticas manejables de la Alimentacin
Comparacin entre los diferentes tipos de
centrfuga
Tipo de Mtodo de Capacidad Flujo de la Fuerza g
Centrifuga descarga de lavado de Alimentacin Mxima
slidos torta L/min
Tubular Intermitente Ninguna 8 - 100 12,000 - 16,000
Cmara Mltiple Intermitente Ninguna 1.5 - 335 5,000 - 9,000
Discos y boquillas Continuo Moderada 3,8 - 3,780 5,000 - 8,500
Discos Tazn abierto Intermitente Ninguna 3,8 - 1,500 5,000 - 7,000
Discos y boquillas Intermitente Ninguna 3,8 - 570 14,000 - 16,000
Discos Intermitentes Intermitente Ninguna 0,38 - 1,500 5,000 - 8,000
Tazn Slido Intermitente Ninguna 1,5 - 250 500 - 800
Decantadora Continuo Moderada 3, 8 - 1,800 2,000 - 3,200
Caractersticas de Procesamiento
Caractersticas de la materia celular
Tipo de Clulas Tamao Densidad Reistencia Proceso Tipico de
( m ) (g/ m3) al esfuerzo de Separacin
Corte
Bacteria 0.5 - 3 1050-1080 Alta Centrifugacion;
1050- 1090 Micro-filtracion
Levaduras 5 - 10 1050 - 1090 Filtracin
Centrifugacion
Hongos 1 x 100's 1050 - 1090 Media Filtracin al vaco
Filamentosos
Plantas 1 - 100 1050 - 1090 Baja Microfiltracion;
Clulas Animales 10 - 40 Muy Baja Centrifugacion a baja velocidad
Fotacin
Floculos de Clulas 10 - 100's 1010 - 1080 Variable Centrifugracion;
Sedimentacin
Desechos celulares 0.4 1010-1200 Baja Centrifugracion;
Microfiltracion;
Particin en dos fases
Protenas Precipitadas 0.1 - 100's 1010-1200 Media Centrifugacion;
Microfiltracion;
Ultrafiltracion
SEDIMENTACION DE SOLIDOS

Una partcula al moverse en un medio continuo e infinito
se ve afectada por 2 fuerzas.

Fuerza de Flotacin

La partcula es acelerada por la fuerza de flotacin, F
B
,
que es la resultante de la diferencia de densidades entre
la partcula y el fluido (F
B
). Segn Newton (suponiendo
partculas esfricas):


Empuje
G
Donde
d: dimetro de la partcula

s
,: densidad de la partcula y del fluido
a: aceleracin del campo al cual est sometido la partcula

a
d
F
s B

= ) (
6
3

t
(1)

Por otra parte, la partcula al moverse se ve retardada
por la fuerza de roce, F
D,
que se opone al movimiento.
Segn la Ley de Stoke


E
G
v d F
D
= t 3
(2)
Fuerza de Roce
Donde
= viscosidad del medio
v = velocidad de la partcula

Debido a estas 2 fuerzas, cuando el sistema alcance el equilibrio,
la partcula se mover a una velocidad constante, igual a la
velocidad terminal cuando:

F
B
= F
D
(3)

Estas condiciones se cumplen cuando:

Casi siempre se cumple en sistemas biolgicos
1 Re <

=

v d
=

= a
d
F
s B
) (
6
3

t
v d F
D
= t 3

A partir de (3) se puede determinar la velocidad
terminal.


depende del campo al cual se encuentre sometida

a
d
v
s
= ) (
18
2

(4)
Si es campo gravitacional
(sedimentacin)
g
d
vg
s
). (
18
2

=
(5)
sedimentar en demora que tiempo
recorrer debe que distancia
= =
ts
ds
v
g
(5a)
Ejemplo 1 Sedimentacin de clulas inmovilizadas

Muchas clulas animales son cultivadas en la superficie de micro-esferas
Esas esferas (microcarrier) tienen una densidad de 1.02 g/cm
3
y un
dimetro de 150 m. Un fermentador 50 litros es usado para el
crecimiento de estas clulas en los microcarrier para producir una
vacuna. Despus que las clulas han crecido, la agitacin es detenida y
los microcarrier comienzan a sedimentar. El estanque tiene una razn
entre altura y dimetro de 1,5.

El flujo libre de microcarrier tiene una densidad de 1.00 g/cm
3
y una
viscosidad de 1,1 cP. ( 0.011 [g/cm sec] )

a) Calcule el tiempo de sedimentacin de estos microcarrier suponiendo
que sedimentan a su velocidad terminal.


) (
60
2
s
rad n
= O
t
Donde
r : radio desde el centro de la centrfuga a la posicin donde se encuentra la
partcula
O: velocidad angular de rotacin
n: revoluciones por minuto


Si es un campo centrfugo
r
d
v
s g r
O = =
2
2
) (
18

e
(6)
recorrerla en demora que Tiempo
recorrer debe se que Distancia
= =
dt
dr
g
e
(6a)
Se pueden correlacionar las 2 velocidades

dt
dr
g
r
v
g g
=
O
=
.
.
2
e

Factor G

(Distinto a la eficiencia granulomtrica)

Se define el factor G para caracterizacin y escalamiento de
centrfugas es una medida relativa de la velocidad de sedimentacin de
una partcula en un campo centrfugo con respecto a su gravitacional.





Generalmente las condiciones de operacin de definen en funcin de los
G que se deben aplicar.
g
r
v
G
g
g
.
2
O
= =
e
ECUACION DE DISEO

Existe un movimiento en la direccin r

CENTRIFUGA DE BOTELLAS (laboratorio)
) ( ) (
18
2
2
2
g
r
v r
d
dt
dr
v
g s g r
O
= O

= = =

e
} }
O
=
t
o
g
R
R
dt
g
v
r
dr
) (
2 3
1
t
g
v
R
R
g

O
=
|
|
.
|

\
|
) ( ln
2
1
3
Integrando
(10)
(11)
(12)
Ejemplo 2 Centrifugacin discontinua de Clulas de levadura

Una centrfuga, que utiliza botellas, es usada para colectar las
clulas de levadura luego de una fermentacin. Durante la
centrifugacin la distancia entre la superficie del lquido y el eje de
rotacin (eje axial) es 3 cm y la distancia entre el fondo del cilindro
al eje axial es 10 cm.
Las clulas de levadura se pueden asumir como partculas
esfricas con un dimetro de 8.0 m y una densidad de 1.05
g/cm
3
. El fluido tiene propiedades similares al agua pura.
( Densidad 1.00 g/cm
3
y una viscosidad de 0.01 g/cm sec)
La centrifuga est operando a 500 rpm
1. Determine el tiempo que tomar una separacin completa de las
levaduras.
ECUACIONES DE DISEO

Existe un movimiento en la direccin z y r

Movimiento en Direccin z


(7)



Q: Flujo de alimentacin

R
1
,R
3
: Radio del nivel del lquido, Radio de
la centrfuga

CENTRIFUGA TUBULAR
) (
2
1
2
3
R R
Q
A
Q
dt
dz
v
z

= = =
t


Movimiento en Direccin radial r


(8)


Q: Flujo de alimentacin

R
1
,R
3
: Radio del nivel del lquido, Radio de la centrfuga


El movimiento combinado

) ( ) (
18
2
2
2
g
r
v r
d
dt
dr
v
g s g r
O
= O = = =

e
Q
R R
g
r
v
v
dt
dz
dt
dr
dz
dr
o
g
z
g
) (
) (
2
1
2 2

O
= = =
t
e
(9)


Dependiendo de los valores de v
g
y Q depender la posicin de la
partcula en la centrfuga.

Se puede calcular un flujo ptimo para que una partcula que ingresa
por el centro, slo se pegue a la pared al final. Tal que:

z = L
r = R
3





As se determina la ecuacin de diseo
de una centrfuga tubular:



(10)



1
3
2
1
2
3
2
ln
) (
R
R
R R L
g
v Q
g
O
=
t


Simplificando





As se determina la ecuacin de diseo de una centrfuga tubular.


(17)




2
R donde 2
ln
) (
1 3
1
3
2
1
2
3
R R
R
R
R
R R +
= =

TubuLar g g
v
g
R L
v Q E =
)
`

O
=
2 2
2 t
Caracterstica de la centrfuga y condiciones de operacin
Parmetro de diseo

Flujo Funcin de la partcula

ECUACION DE DISEO
En un anlisis anlogo para centrfugas
de disco se tiene como ecuacin de
diseo:






N
D
: Nmero de discos.

Ms detalles ver desarrollo:
CENTRIFUGA DE DISCOS
Discos
3
1
3
3
2
* 3
cot ) ( 2
E =
)
`

O
=
g
D
g
v
g
R R N
v Q
u t
(18)
Belter P., Cussler E.L. and Hu Wei Shou "Bioseparations : Dowstream Processing for
Biotechnology":, John Wiley and Sons , 1988.
Ejemplo 3 Centrifuga continua de Disco para Chlorella
Clulas de Chlorella han sido cultivadas en un estanque abierto, las
clulas sern cosechadas hacindolas pasar a travs de una
centrfuga de discos.
La velocidad de sedimentacin de estas clulas ha sido medida y es
de 1.07 x 10
-4
cm/seg.
La centrfuga tiene 80 discos con un ngulo de 40, el radio externo es
15,7 cm y el dimetro interno de 6 cm.

Se planea operar la centrfuga a 6000 r/min.
1. Estime la cantidad de flujo que puede ser procesado en esta
centrfuga.
Escalamiento de Centrifugacin


El diseo de centrfugas a gran escala involucra el uso de informacin
de laboratorio para predecir el comportamiento de las centrfugas
comerciales.


Mtodos que se pueden utilizar para tratar de adaptar los procesos de
laboratorio a gran escala.

a) Mtodos Cualitativos
b) Mtodos Cuantitativos

a) Mtodos cualitativo (Estimacin Gruesa)

Se establece un coeficiente de dificultad que tiene una separacin
dada para lo cual se calcula un coeficiente entre G y el tiempo
aplicado, ie, G t
t
g
R
t G
o

)
`

O
=
2
Ro: radio caracterstico o mximo de la centrfuga.
(19)
Existen valores caracterstico para cada variedad de biomasa

Slido G t
[sec]
Clulas eucariontes 0.3 10
-6

Cloroplastos 0.3 10
-6

Desechos clulas eucariotes 2.0 10
-6

Ncleo de clula 2.0 10
-6

Protenas precipitadas 9.0 10
-6

Bacterias 18 10
-6

Mitocondrias 18 10
-6

Desechos bacterias 54 10
-6

Lisosomas 1100 10
-6

Ribosomas 1100 10
-6

Polisomas 1100 10
-6


A gran escala se debe mantener el mismo valor de G t, para ello se
determina G o t y se selecciona que equipo puede ser til

b) Mtodo Cuantitativo

Para cada tipo de centrfuga se define segn una ecuacin del tipo:




Para comparar 2 centrfugas de diferente tipo se deben considerar
factores de eficiencia y se debe cumplir:




Eficiencia, q, para cada tipo de centrfuga, es:

Tipo Eficiencia [%]
Botellas (lab) 100
Tubular 80
Discos 55




1 Tipo
1 Tipo E =
g
v Q
2 1 Tipo Tipo
Q Q
|
|
.
|

\
|
E
=
|
|
.
|

\
|
E q q
(20)
(21)
Ejemplo 4 Escalamiento
Se han realizado pruebas de laboratorio para definir el parmetro
de escalamiento para el procesamiento de una suspensin con material
celular. En el experimento se procesaron 3.3 [lt/min] de una suspensin de
clulas de E.coli , en una centrifuga tubular de 12.7 [cm] de radio interno y
73 [cm] de largo. Se utiliz una velocidad de rotacin de 16000 r.p.m.
Se requiere seleccionar una centrfuga para procesar 800 [lt/hr] de
la misma suspensin antes mencionada. Para ello se cuenta con las
siguientes alternativas de centrfugas de discos.
N de discos

33

50

66

Radio externo [cm]

35

35

35

Radio interno [cm]

15

15

15

ngulo []

51

51

51

Velocidad mxima
Rotacin [r.p.m.]

5000

6500

5000

Propiedad

Opcin 1

Opcin 2

Opcin 3









Potencia

La potencia consumida por una centrifuga depender del caudal al tratar
Q, de la velocidad angular O y del radio R.
As su consumo energtico est dado por:

Potencia =o *Q* (O- R)
2

Donde o es una constante que depende del tipo de centrifuga.
Costo de Centrifugas
El valor depende generalmente del E de la centrifuga, as

Variaciones en el tiempo de compra

C
t2
= C
t1
I
t2
/I
t1

C: precio compra
I: indice de costos
t1: base de costeo a tiempo t1
t2: tiempo

INDICES Chemical Eng Plant Cost Index
Marshall & Swift Equipment
Cost Index

Actualizacin de los costos con el tiempo
Referencias:
1. Belter P., Cussler E.L. and Hu Wei Shou "Bioseparations : Dowstream
Processing for Biotechnology":, John Wiley and Sons , 1988.
2. Doran M." Bioprocess Engineering Principles", Academic Press, 1995.
3. Tejeda, R.M.Montesinos, R.Guzmn "Bioseparaciones", Editorial
Unison, 1995.