ENZIMAS

2
ENZIMAS - HISTRICO
Catlise biolgica incio sc. XIX
digesto da carne: estmago;
digesto do amido: saliva.
Dcada de 50
Louis Pasteur - concluiu que a fermentao do
acar em lcool pela levedura era catalisada por
fermentos = enzimas.
Eduard Buchner (1897)
extratos de levedo podiam fermentar o acar
at lcool;
enzimas funcionavam mesmo quando removidas
da clula viva.



3
ENZIMAS - HISTRICO
James Sumner (1926)
Isolou e cristalizou a urease;
Cristais eram de protenas;
Postulou que todas as enzimas so protenas.

John Northrop
Cristalizou a pepsina e a tripsina bovinas;


75 enzimas isoladas e cristalizadas;
Ficou evidenciado carter protico.

Atualmente + 2000 enzimas so conhecidas.
4
ENZIMAS
Definio:
Catalisadores biolgicos;
Longas cadeias de pequenas molculas
chamadas aminocidos.
Funo:
Viabilizar a atividade das clulas, quebrando
molculas ou juntando-as para formar novos
compostos.
Com exceo de um pequeno grupo de molculas
de RNA com propriedades catalticas, chamadas de
RIBOZIMAS, todas as enzimas so PROTENAS.


Aminocidos:
H

R C* COOH

NH2
5
ENZIMAS CARACTERSTICAS GERAIS
Apresentam alto grau de especificidade;
So produtos naturais biolgicos;
So altamente eficientes, acelerando a
velocidade das reaes (10
8
a 10
11
+ rpida);
So econmicas, reduzindo a energia de
ativao;



6
ENZIMAS
Comparao das enzimas com catalisadores qumicos.


Caracterstica Enzimas Catalisadores Qumicos
Especificidade ao substrato alta baixa
Natureza da estrutura complexa simples
Sensibilidade T e pH alta baixa
Condies de reao (T, P e pH) suaves drstica (geralmente)
Custo de obteno (isolamento e purificao) alto moderado
Consumo de energia baixo alto
Formao de subprodutos baixa alta
Atividade Cataltica (temperatura ambiente) alta baixa
Presena de cofatores sim no
Energia de Ativao baixa alta
7
ENZIMAS NOMENCLATURA
Sculo XIX - poucas enzimas identificadas

- Adio do sufixo ASE ao nome do substrato:

* gorduras (lipo - grego) LIPASE
* amido (amylon - grego) AMILASE




8
ENZIMAS NOMENCLATURA

1955 - Comisso de Enzimas (EC) da Unio
Internacional de Bioqumica (IUB) nomear e
classificar.

Cada enzima cdigo com 4 dgitos que
caracteriza o tipo de reao catalisada:
1 dgito - classe
2 dgito - subclasse
3 dgito - sub-subclasse
4 dgito - indica o substrato


9
ENZIMAS CLASSIFICAO
1. Oxido-redutases (reaes de oxidao-reduo ou transferncia de eltrons)
1.1.atuando em CH-OH
1.2.atuando em C=O
1.3.atuando em C=O-
1.4.atuando em CH-NH
2
1.5.atuando em CH-NH-
1.6.atuando em NADH, NADPH
2.Transferases (transferem grupos funcionais entre molculas)
2.1.grupos com um carbono
2.2.grupos aldedo ou cetona
2.3.grupos acil
2.4.grupos glicosil
2.7.grupos fosfatos
2.8.grupos contendo enxofre
3.Hidrolases (reaes de hidrlise)
3.1.steres
3.2.ligaes glicosdicas
3.4.ligaes peptdicas
3.5.outras ligaes C-N
3.6.anidridos cidos
Classificao das enzimas segundo a Comisso de
Enzimas.
10
ENZIMAS CLASSIFICAO
4.Liases (catalisam a quebra de ligaes covalentes e a remoo de molculas de gua,
amnia e gs carbnico)
4.1. =C=C=
4.2. =C=O
4.3. =C=N-
5.Isomerases (transferncia de grupos dentro da mesma molcula para formar ismeros)

5.1.racemases
6.Ligases (catalisam reaes de formao de novas molculas a partir da ligao entre
duas pr-existentes, sempre s custas de energia)
6.1. C-O
6.2. C-S
6.3. C-N
6.4. C-C
Classificao das enzimas segundo a Comisso de
Enzimas.
11
ENZIMAS CLASSIFICAO
Subclasses
Exemplos de
Subclasses
Tipo de reao catalisada Classe
Hidratases Adicionam H
2
O ligas duplas Liases
Quinases Transferem fosforilas do ATP Transferase
Mutases Movem fosforilas dentro da
mesma molcula
Isomerase
Sintases Sntese independente de ATP Transferases
Sintetases Sntese dependente de ATP Ligases
12
ENZIMAS NOMENCLATURA



ADP + D-Glicose-6-fosfato ATP + D-Glicose
IUB - ATP:glicose fosfotransferase
E.C. 2.7.1.1
2 - classe - Transferase
7 - subclasse - Fosfotransferases
1 - sub-subclasse - Fosfotransferase que utiliza grupo
hidroxila como receptor
1 - indica ser a D-glicose o receptor do grupo fosfato
Nome trivial: Hexoquinase
13
ENZIMAS CATALISADORES
Aceleram reaes qumicas


Ex: Decomposio do H
2
O
2

Condies da Reao Energia livre de Ativao
KJ/mol Kcal/mol
Velocidade
Relativa
Sem catalisador

Platina

Enzima Catalase
75,2 18,0

48,9 11,7

23,0 5,5
1

2,77 x 10
4


6,51 x 10
8

H
2
O
2
H
2
O

O
2
+
Catalase
14
ENZIMAS CATALISADORES




No so consumidos na reao
H
2
O
2
H
2
O

O
2
+
Catalase
E + S E + P
15
ENZIMAS CATALISADORES



Diferena entre
a energia livre
de S e P
Caminho da Reao
Energia de ativao com
enzima
Energia de ativao sem enzima
S
P
16
ENZIMAS
COMPONENTES DA REAO



E + S E S P + E
Substrato se liga ao
STIO ATIVO
da enzima
17
ENZIMAS COFATOR



Algumas enzimas que contm ou necessitam
de elementos inorgnicos como cofatores
ENZIMA COFATOR
PEROXIDASE Fe
+2
ou Fe
+3


CITOCROMO OXIDASE Cu
+2

LCOOL DESIDROGENASE Zn
+2

HEXOQUINASE Mg
+2

UREASE Ni
+2
18
ENZIMAS COENZIMAS



Coenzima Abreviatura Reao
catalisada
Origem
Nicotinamida adenina
dinucleotdio
NAD
+
Oxi-reduo
Niacina ou
Vitamina B
3
Nicotinamida adenina
dinucleotdio fosfato
NADP
+
Oxi-reduo
Niacina ou
Vitamina B
3
Flavina adenina
dinucleotdio
FAD Oxi-reduo
Riboflavina ou
Vitamina B
2
Maioria deriva de vitaminas hidrossolveis
Classificam-se em:
- transportadoras de hidrognio
- transportadoras de grupos qumicos
Transportadoras de hidrognio
19
ENZIMAS
LIGAO ENZIMA - SUBSTRATO



Emil Fischer (1894): alto grau de especificidade das
enzimas originou Chave-Fechadura

20
ENZIMAS
LIGAO ENZIMA - SUBSTRATO



Koshland (1958): Encaixe Induzido

21
ENZIMAS
ATIVIDADE ENZIMTICA



Fatores que alteram a velocidade de reaes
enzimticas:
- pH;
- temperatura;
- concentrao das enzimas;
- concentrao dos substratos;
- presena de inibidores.
22
ENZIMAS
INFLUNCIA DO PH



O efeito do pH sobre a enzima deve-se s variaes
no estado de ionizao dos componentes do sistema
medida que o pH varia.
23
ENZIMAS
INFLUNCIA DA TEMPERATURA



| temperatura dois efeitos ocorrem:
(a) a taxa de reao aumenta, como se observa na
maioria das reaes qumicas;
(b) a estabilidade da protena decresce devido a
desativao trmica.
Enzima temperatura
tima para que atinja sua
atividade mxima, a
temperatura mxima na
qual a enzima possui uma
atividade constante por
um perodo de tempo.
24
ENZIMAS
INFLUNCIA DA [E]



Velocidade de transformao do S em P ~ qtidade
de E.
Desvios da linearidade ocorrem:
- Presena de inibidores na soluo de enzima;
- Presena de substncias txicas.
Recomenda-se:
- Enzimas com alto grau de pureza;
- Substratos puros.

25
ENZIMAS
INFLUNCIA DA [S]
[S] varia durante o curso da reao medida que S
convertido em P.




vo

[S]
Vmax
Vmax atingida E estiverem na
forma ES e a [E] livre insignificante,
ento, E saturada com o S.
26
ENZIMAS
CINTICA ENZIMTICA



Victor Henri (1903): E + S ES


1913
Leonor Michaelis -Enzimologista
Maud Menten - Pediatra
E + S
K1
K-1
ES
Kp
E + P
Etapa rpida Etapa lenta
27
ENZIMAS
CINTICA ENZIMTICA



Cintica Enzimtica
A velocidade mxima da reao (Vmx) ser
atingida quando praticamente todas as
molculas estiverem na forma do complexo
ES
Enzima saturada com o substrato
v =
Vmax [S]
Km + [S]
28
ENZIMAS
CINTICA ENZIMTICA
Afinidade da enzima ao substrato.
Km depende:
aspectos especficos do mecanismo de reao;
n de passos da reao;
velocidades relativas dos passos individuais.
ENZIMA SUBSTRATO Km (mM)
Catalase H2O2 25
Hexoquinase ATP 0,4
D-Glicose 0,05
D-Frutose 1,5
Quimotripsina Gliciltirosinilglicina 108
N-benzoiltirosinamida 2,5
29
ENZIMAS
CINTICA ENZIMTICA
Vmax:
E + S
K
1
K
-1
ES
K
p
E + P
Vmax = K
p
[E
t
]
E + P
E + S
K
1
K
-1
ES
K
2
EP
K
3
K
-2
Vmax = K
3
[E
t
]
Vmax [E]
Vmax [2E]
V
[S]
30
Enzimas
ordem da reao



Quando a formao de
P for proporcional [S]
a velocidade da reao
de 1
a
ORDEM
Quando a velocidade
da reao independe
da [S] a reao de
ORDEM ZERO
V
[S]
[S]+ [S] <<Km
v = Vmax
v = Vmax [S]
Km
v = K[S]
[S]| [S]>>Km
31
ENZIMAS
MTODOS GRFICOS
max
V
1
[S]
max
V
m
K
v
1
+ =
Grfico dos Recprocos de Lineweaver-Burk
1
[S]
1
v
-1
Km
1
Vmax
Km
Vmax
Inclinao =
32
ENZIMAS
MTODOS GRFICOS
Grfico de Eadie-Hofstee (Rearranjo e x 1/[S])

[S]
v
m
K
max
V v =
Vmax
Km
v
-Km
Inclinao =
v
[S]
Vmax
33
ENZIMAS
MTODOS GRFICOS
Grfico de Hanes-Woolf (x [S])

[S]
[S]
v
-Km
Km
Vmax
1
Vmax
Inclinao =
[S]
max
V
1
max
V
m
K
v
[S]
+ =
34
ENZIMAS
MTODOS GRFICOS
Grfico da equao integrada de Michaelis-Menten
Vmax
Km
-1/Km Inclinao =
([S]o-[S])
t
Vmax
2,3log[S]o
t [S]
t
[S]) ([S]
K
1
K
V
[S]
[S]
log
t
2,3
o
m m
max o

=
35
ENZIMAS
INIBIO ENZIMTICA
Qualquer substncia que reduz a velocidade de uma
reao enzimtica.
INIBIDORES


REVERSVEIS IRREVERSVEIS


COMPETITIVOS NO COMPETITIVOS INCOMPETITIVOS
36
ENZIMAS
INIBIO COMPETITIVA
Inibidor competitivo concorre com o S pelo sitio ativo da E
livre.

[substrato] necessria para
obter a mesma [ES]
afinidade da enzima pelo
substrato
I compostos com estrutura
molecular lembra S
37
ENZIMAS
INIBIO COMPETITIVA
E + S
ES E + P
EI
I

+


K
1
K
I
K
2
] [
1
)
] [
1 (
1 1
] [ )
] [
1 (
] [
] [
] ][ [
max max
max
S K
I
V
K
V v
S
K
I
K
S V
v
EI
I E
K
I
m
I
m
I
+ + =
+ +
=
=
Michaelis-Menten
Lineweaver-Burk
38
ENZIMAS
INIBIO NO-COMPETITIVA
Inibidor no-competitivo se liga reversivelmente,
aleatria e independentemente em um stio que lhe
prprio.
I no tem semelhana
estrutural com o S

[substrato] no diminui a
inibio


Vmax na presena do
inibidor
39
ENZIMAS
INIBIO NO-COMPETITIVA
E + S
ES E + P
EI + S
EIS
+
I
+
I
K
S
K
I
K
2
K
I
K
S
(
)
] [
1 (
1
] [
1
)
] [
1 (
1
)
] [
1 ]( [ )
] [
1
] [
] [
] ][ [
] [
] ][ [
max max
max
I I
m
I I
m
I
K
I
V S K
I
V
K
v
K
I
S
K
I
K
S V
v
EIS
I ES
EI
I E
K
+ + + =
+ + +
=
= =
Lineweaver-Burk
Michaelis-Menten
40
ENZIMAS
INIBIO INCOMPETITIVA
Inibidor incompetitivo se liga reversivelmente, em
um stio prprio, ao complexo ES.

I no tem semelhana
estrutural com o S

I favorece a formao do ES

Vmax da enzima

41
ENZIMAS
INIBIO INCOMPETITIVA
E + S
ES E + P
EIS
+
I
K
S
K
2
K
I
)
] [
1 (
1
] [
1 1
] [
] [
1
] [
] [
1
] [
] ][ [
max max
max
I
m
I
m
i
I
K
I
V S V
K
v
S
K
I
K
S
K
I
V
v
EIS
I ES
K
+ + =
+
+
+
=
=
Lineweaver-Burk
Michaelis-Menten
42
ENZIMAS
INIBIO IRREVERSVEL
I se combina com um grupo funcional, na molcula
da E, que essencial para sua atividade.
Podem promover a destruio do grupo funcional
Forma-se uma ligao COVALENTE entre o I e a E.
Vmax + parte da E completamente removida do
sistema.
K
2
E + P
E + S
ES
K
1
EI
+
I