Interaes Antgeno-Anticorpo

Ana Cludia Carvalho Gouveia

Interaes Ag - Ac
Ligaes no covalentes
Reversveis

Caractersticas das interaes Ag-Ac
Afinidade

Fora de interao entre um nico stio de ligao Ag-Ac
(em um nico eptopo).

Caractersticas das interaes Ag-Ac

Avidez

- Fora de interaes total entre Ac e Ag.
- Soma das afinidades de todos eptopos envolvidos

Especificidade

- Capacidade do Ac distinguir seu imungeno de outros Ags.

Caractersticas das interaes Ag-Ac
Reao cruzada

- Dois Ag diferentes apresentam eptopos estruturalmente
semelhantes

- Ac especficos para um eptopo se ligam a um eptopo no
relacionado, mas com propriedades qumicas similares.

Mtodos
Reagentes no marcados
(A ligao do Ac altera o estado fsico do Ag)
Reao de aglutinao
Reao de precipitao


Reagentes marcados
RIA
ELISA
IF, citometria de fluxo
Western Blotting

Reao de aglutinao
Direta eritrcitos (hemaglutinao), bactrias, fungos
Passiva ltex
(Ag insolvel)
Qualitativos Semi-quantitativos
Ex.: classificao sanguinea Ex.: detectar infeces
Inibio da Aglutinao

- Quantidades de Ag solvel so adicionadas a uma
quantidade fixa de soro contendo o Ac.

Precipitado visvel
Reao de precipitao
- A medida que a quantidade de Ag aumenta, a quantidade
de precipitado tambm aumenta at um mximo, para
depois diminuir.

Precipitao em soluo
Precipitao em gel
Imunodifuso Radial
Precipitao em gel
Imunodifuso Dupla
Reagentes marcados
- Enzimas, fluorocromos, istopos
- Tipos:
RIA
ELISA
IF, citometria de fluxo
Western Blotting

Radioimunoensaios
Utilizam Ac conjugados com radioistopos para
quantificar os ensaios.
Vantagens:
Alta sensibilidade
Permite medidas rpidas e precisas
Desvantagens:
Custo
Vida mdia dos reagentes
Risco operacional (radiao)
ELISA (Enzyme Linked Immunosorbent Assay)
- Baseia-se na quantificao de uma reao enzimtica
associada com complexos imunes.

Imunofluorescncia
- Utilizam-se Ac ou Ag conjugados a molculas reveladoras
chamadas fluorocromos.

- Visualizao em microscpio de fluorescncia
Isotiocianato de fluorescena (FITC) VERDE
Ficoeritrina (FE) VERMELHA
Imunofluorescncia Direta
Aplicaes:
- Deteco direta de microrganismos
(secrees, urina, cortes de tecidos);
- Identificao de subpopulaes de
linfcitos;
- Fenotipagem de clulas tumorais
Ex.: Deteco de Chlamydia trachomatis
em secreo uretral
Ex.: Deteco de Ac anti- T. cruzi
Aplicaes:
- Deteco de anticorpos especficos contra
diversos microrganismos;
- Diagnstico de doenas auto-imunes;
Deteco de Ac anti-nuclear
Imunofluorescncia Indireta
Citometria de fluxo
- Detecta, separa e quantifica clulas contendo um antgeno
particular, marcadas com um fluorocromo;
- Cada anticorpo marcado com um fluorocromo diferente;
- As clulas so ento analizadas no citmetro de fluxo.
- As clulas saem de uma
clula de fluxo e so
iluminadas por um raio laser;
Citometria de fluxo
- A quantidade de raios laser
que dispersa para fora das
clulas durante a passagem
das mesmas pelo laser pode
ser medida, o que
proporciona informao a
respeito do tamanho das
clulas.
- O laser pode tambm excitar o fluorocromo nas clulas e a
luz fluorescente emitida pode ser medida por um ou mais
detectores.
Aplicaes:

-Caracterizao de populaes celulares;

- Contagem de microrganismos;

- Separao de populaes celulares de
acordo com a densidade dos antgenos,
tamanho e granulosidade das clulas;

- Anlise de proliferao celular.
CD4
CD8
CD19
Western Blot
Ensaios imunocromatogrficos
Teste rpido de HIV
(Ac anti-HIV)
Diagnstico de gravidez
( deteco de beta HCG)
Tcnicas de Biologia Molecular
Reao da Polimerase em Cadeia
Amostra +
Reagentes
RT-PCR
(Reverse Transcriptase Polymerase Chain Reaction)
Termociclador
Deteco da Amplificao
Produto
(PCR ou RT-PCR)
Eletroforese em
gel de
poliacrilamida
1. Qual a principal diferena entre os mtodos de ELISA e
imunofluorescncia?

2. Em uma tipagem sangunea houve aglutinao ao se misturar o
sangue pesquisado e os soros anti-AB e anti-Rh. Determine o tipo
sanguneo e faa um esquema explicando a reao ocorrida.

3. Quais as caractersticas do anticorpo que podem influenciar a sua
ligao ao antgeno?

4. Ao realizar os exames pr-natais, a gestante J.A.C, 26 anos, apresentou
teste ELISA positivo para HIV. Como voc interpreta este resultado?
Descreva suscintamente a reao ocorrida.

5. Qual imunoensaio voc escolheria para o acompanhar o prognstico
de um paciente com linfoma? Justifique sua resposta.
Relatrio