METODO DE CROMATOGRAFIA

EN CAPA FINA DE ALTO

RENDIMIENTO PARA LA
ESTIMACION DE
ANDROGRAFOLIDOS EN
EXTRACTO DE HIERBAS Y
FORMULACIONES
POLIHERBALES
OBJETIVOS
GENERAL

Identificar y cuantificar Andrograflidos
mediante el mtodo de HPTLC

ESPECIFICO
Destacar la importancia y logros obtenidos en los resultados de
la investigacin del andrographis paniculata a traves de la
cromatografa en hptlc.

Demostrar que la tcnica HPTLC puede ser utilizada con xito
para la estimacin de andrografolidos en extractos de plantas y
formulaciones poliherbales.
confirmar la validez del metodo







RESUMEN
Una capa fina de cromatografa de alto rendimiento
(HPTLC) fue desarrollada para la evaluacin de
Andrografolido en extractos de hierbas y formas de
dosificacin farmacuticas.
El anlisis de Andrographolide se realiz con el mtodo
de cromatografa de TLC.
Como fase estacionaria se utiliz placas de aluminio
pre recubiertas con gel de slice y como fase mvil:
Cloroformo, Tolueno, Metanol a una Temperatura
Ambiente de 25+_ 2C.
El resultado final se encontr manchas compactas de
Andrografolido.
El presente mtodo utilizado tuvo validez por la
Precisin, Recuperacin, etc.
El anlisis estadstico mostr que el mtodo utilizado es
el indicado para la evaluacin de Andrographis
paniculata.

MARCO TEORICO
HPTLC
(High Performance Thin Layer Chromatography )
Es un mtodo de separacin de mezclas
ampliamente til y eficaz para la determinacin de
una gran variedad de compuestos presentes en las
muestras; y que arroja resultados en poco tiempo y
son relativamente econmicos.

VENTAJAS SOBRE LAS OTRAS TECNICAS
CROMATOGRFICAS.
EL BAJO COSTO DE LA INSTRUMENTACIN
Evaluacin de la totalidad de la muestra
Capacidad de realizar separaciones simultaneas
El tiempo recorrido para el anlisis es acortado.

Andrographis
panniculata

ANDROGRAFOLIDOS
(DITERPENOLACTONA)
Reino:Plantae
Divisin:Magnoliophyt
a
Clase:
Magnoliopsida
Orden:Lamiales
Familia:Acanthaceae
Gnero:Andrographis
Especie:A. paniculata

Propiedades Medicinales
Partes usadas

Los componentes del Andrographis paniculata
son un grupo de diterpeno lactonas conocidas
como andrograflidos que es el componente
ms importante.
Sus principales principios activos son:
flavonoides, polifenoles, glucsidos y diterpenos
lactonas.

kalmegh
CLIMA
TAMAO
TEMPERATURA LLUVIA
TIPO DE
SUELO
FACTORES EDAFICOS Y
CLIMATICOS

AISLAMIENTO Y CARACTERIZACIN
MUESTRA
(HOJAS)
SECADO
EXTRACCION
SOXHLET
(METANOL)
EXTRACTO
PULVERIZADO
EXTRACTO
REDISUELTO
EN METANOL

HPTLC
HPTLC
INSTRUMENTACION Y CONDICIONES
CROMATOGRAFICAS
PLACAS DE ALUMINIO
RECUBIERTA CON
SILICA GEL
FASE
ESTACIONARIA
CLOROFORMO
TOLUENO
METANOL
66:26:8,v / v / v
FASE MOVIL Muestra
problem
a
CAMAG TLC
SCANNER III
LINOMAT V
PROCEDIMIENTO

Saturacin de la
cmara
Aplicacin de la
muestra
Elucin
Separacin Secado y anlisis
Resultados
Cromatograma
Estndar Extracto
Formulaciones
Farmacuticas
rea de
pico
Rf
CURVA DE CALIBRADO
50mg
Andrograflid
o ESTNDAR
2
u
L
4
u
L
6
u
L
8
u
L
10
uL
Se aplico sobre las placas de slica
gel y desarrollo en el sistema
solvente.
La placa revelada, se sec en aire
y escanea en 229 nm.
Rf= 0.49
1
mL
50mL
Metanol
10mL
MetOH
100
ng
ANALISIS DE ANDROGRAFOLIDOS
EXTRACTOS HERBALES
(MHK-1, UPK-2 y MPK-3 )
FORMULACIONES
FARMACEUTICAS
EXTRACTO REDISUELTO
EN METANOL

CROMATOGRAFIA
20 COMPRIMIDOS = 100
mg DE AP
EXTRACCION CON
METANOL
EXTRACTO METANOLICO
PULVERIZADO
100 mg


CROMATOGRAFIA
RESULTADOS DEL ANALISIS HPTLC
EXTRACTOS HERBALES
Se observo una sola mancha de
Rf = 0,49 en el cromatograma del
andrograflido aislado a partir de
extracto junto con otra
componentes.
No hubo interferencia
Estos componentes aparecieron
en el cromatograma de modo
significativo con diferentes valores
de Rf .
El contenido total de
andrografolidos en extractos de
hierbas MHK-1, UPK-2 y MPK-3
fueron 2,32%, 2,37% y 2,46% w /
w, respectivamente.
Se observ una sola mancha de
Rf = 0,49 en el cromatograma de
andrografolidos extrados a partir
de formulaciones.
No hubo interferencia
El andrograflido total contenido
en la formulacin farmacutica-1,
formulacin- 2, formulacin-3 y la
formulacin-4 fueron 1.28%,
1.68%, 1,41% y 1,05% w / w,
respectivamente.

La curva de calibracin para el marcador fue lineal en el rango de 200-1000 ng
ml-1.
Los Andrografolidos fueron bien separados en los extractos por el mtodo
HPTLC y detectado en todas las muestras a un valor de Rf de 0,49.
El espectro de absorcin UV-Vis se registr en el escner CAMAG TLC al
principio, en la posicin media y final de las bandas de AP fueron
superponibles demostrando la pureza del Andrograflido.


RESULTADOS
ANALISIS ESPECTRAL
El compuesto mostr una
fuerte absorcin UV a 229 nm.
Bandas de infrarrojos (IR) a
3423 cm-1 (Grupo hidroxilo),
1725 y 1676 cm-1 (A, b-
galactona insaturada), y 905
cm-1 (Exo-metileno).
[M +1] pico a 351 en el EIMS
es correspondiente con la
frmula molecular C20H31O5,
de AP.
VALIDACION DEL METODO

Sensibilidad, Limite de deteccin
y Limite de cuantificacin
Exactitud
Precisin
Reproducibilidad
Estabilidad
S.=
L.D. =
L.C.=

Tcnica de Adicin
Estndar
DS y % RDS

Repeticin del proceso por
3 das
Las soluciones de muestra de los extractos
se prepararon y se almacenaron a
temperatura ambiente durante 10, 30, 60,
120 y 240 min.
RESULTADOS
HPTLC
Recuperaciones medias para AP a partir del extracto mediante
ensayo HPTLC se encontraron de 97,8-99,7% y de las
formulaciones 96,8-98,5% (Tabla 1), lo que indica la exactitud del
mtodo.
La precisin de la instrumentacin de HPTLC se comprob
mediante el barrido repetido de las mismas manchas de los
marcadores, tres veces en un mismo da por en tres das
consecutivos y se calcularon los valores de la desviacin estndar .
Los resultados mostraron precisin aceptable con el mtodo como
se revela mediante la desviacin estndar relativa de los datos que
se muestran en Tabla 1.
El procedimiento de HPTLC se utiliz como mtodo de rpido
deteccin de las muestras recogidas en diferentes lugares.
Cualitativamente, similar HPTLC fingerprints se obtuvieron para
todos los extractos de diferentes lugares que dan indicacin fiable
de la misma identidad. Los Andrografolidos fueron bien separados
en los extractos por el mtodo HPTLC y detectado en todas las
muestras a un valor de Rf de 0,49. Utilizando las tcnicas de
HPTLC y espectro UV-Vis, la cantidad de AP en los extractos de
metanol se encontraron variando de 2,32 hasta 2,46% en peso de
polvo seco.

CONCLUSIONES
La tcnica HPTLC puede ser utilizada
con xito para la estimacin de
andrografolidos en extractos de
plantas y formulaciones poliherbales.
El anlisis Estadstico demuestra que
el mtodo es reproducible y selectivo
para el anlisis de andrografolidos.
Referencias Bibliogrficas
http://www.lenchrom.spb.ru/ENG/inf_3.shtml
http://farmacia.ugr.es/ars/pdf/351.pdf
http://www.ciens.ucv.ve:8080/generador/sites/
LIApregrado/archivos/Guia%20para%20crom
atografia.pdf
http://depa.fquim.unam.mx/amyd/archivero/M
.Cromatogrficos_6700.pdf
http://www.uam.es/personal_pdi/ciencias/lhh3
45a/InstrumentalLecc1.pdf
http://www.secretosparatusalud.com/product/
206750/andrographis-full-spectrum