ESPECTROMETRA DE

FLUORESCENCIA
MOLECULAR

El fenmeno de
fotoluminiscencia ocurre cuando
una especie qumica es excitada
medio de radiacin
electromagntica

Energa adquirida reemitiendo
esta en forma parcial o total.


La fluorescencia y la
fosforescencia son dos
manifestaciones diferentes del
fenmeno Fotoluminiscente

La fluorescencia cesa casi
inmediatamente (<10-6 seg.)
fosforescencia puede durar
varios segundos o minutos

La fluorescencia no est
restringida a un estado fsico
determinado de la materia, esta
puede existir en:

gases,
slidos
lquidos.

los orbitales atmicos de cada uno
de los tomos que forman el enlace
generan dos bitales:
enlazante
antienlazante
cada nivel electrnico se
encuentran diferentes niveles
vibracionales, por lo
que cuando una molcula es
irradiada con energa de cierta
frecuencia o longitud de
onda
SPN DEL ELECTRON:
molculas poseen un nmero
par de
electrones. diferente spin

durante el proceso de
transferencia del electrn del
estado basal al estado excitado
cambie su spin y en este caso
los dos electrones tienen el
mismo giro.

Estos estados se pueden
representar de la manera
siguiente:


PROCESOS DE DESACTIVACIN
Una vez que la especie ha sido
excitada a niveles energticos
superiores, la desactivacin
El fenmeno de fluorescencia
si la desactivacin por fluorescencia
es
rpida con respecto a los procesos
sin radiacin, se observa tal
emisin.


CONVERSIN EXTERNA.- Este
es el proceso que ocurre ms
frecuentemente en las
especies atmicas y
moleculares.
pierde por choques
moleculares entre la especie
excitada y el
solvente,
CONVERSIN INTERNA.- En este
proceso una molcula excitada pasa
del estado
electrnico ms alto al estado
electrnico ms bajo ocasionando
una serie de
relajaciones vibracionales sin
emisin de radiacin , se favorece
cuando dos niveles
electrnicos son de energa similar y
puede ocurrir un traslapamiento.
RELACIN ENTRE
INTENSIDAD DE
FLUORESCENCIA Y
CONCENTRACIN.- La
relacin que existe entre
fluorescencia y concentracin es
directamente proporcional; a
mayor concentracin mayor
fluorescencia y

FACTORES QUE AFECTAN LA
FLUORESCENCIA.-
La intensidad de fluorescencia es
afectada por los siguientes factores:
1. Estructura
2. Temperatura y naturaleza del
solvente
3. Efecto del pH
4. Efecto del oxgeno disuelto
Estructura: La fluorescencia se
presenta funcionales
aromticos con bajas energas
de transicin
Compuestos que tienen
estructuras de carbonilos
alifticos
alicclicos o de dobles enlaces
cojugados

Temperatura y naturaleza del
solvente: El efecto de un
aumento en la temperatura
incrementa el nmero de
choques moleculares,
desactivacin
tiende a efectuarse a travs de
procesos
no radiativos

Efecto del pH: Debido a las
diferentes formas qumicas que
son posibles de existir a
diferentes condiciones de pH,

Ejemplo: el fenol y el in
fenolato

Efecto del oxgeno disuelto:
Debido al paramagnetismo de la
molcula de oxgeno,
esta tiende a desactivar
cualesquier estado activado por
oxidacin

INSTRUMENTACIN PARA
FLUORESCENCIA
Los componentes de un
fluormetro o
espectrofluormetro son muy
similares a los de un
espectrmetro Visible- UV.

El haz de radiacin dirigido al
recipiente de muestra
pasa por un filtro oun
monocromador
Radiacin que va ha incidir en la
muestra.
La radiacin fluorescente emitida
por la muestra
es en todas direcciones pero es
ms convenientemente medida a
un ngulo de 90 con
respecto al haz incidente
COMPONENTES DE
FLUORMETROS


1. FUENTES DE EXCITACIN
2. FILTROS Y
MONOCROMADORES
3. DETECTORES
4. CELDAS


FUENTES DE EXCITACIN.-
La lmpara de tungsteno
ordinaria no da suficiente
intensidad para ser utilizada
en fluorescencia. Son comunes
las lmparas de
Xenn 250 a 600 nm.

Mercurio.

FILTROS Y
MONOCROMADORES.- Para
fluormetros de filtros de
utilizan
Frecuentemente

filtros de absorcin y filtros
de interferencia.
rejillas de difraccin

DETECTORES.- Debido a que
la seal de fluorescencia es de
baja intensidad se requiere
de un potente sistema de
amplificacin. Por esto son
preferidos los tubos
fotomultiplicadores, aunque
tambin se usan comnmente
los fototubos en aparatos de
menor precio.

CELDAS.- En fluorescencia se
utilizan celdas de vidrio o
cuarzo
APLICACIONES DE LA
FLUORESCENCIA

Hoy da la fluorescencia es de
primordial importancia en la qumica
analtica. Una de sus
ms espectaculares aplicaciones ha
sido en la deteccin y cuantificacin de
substancias
que son separadas a travs del uso de
la cromatografa de lquidos.

Por otra lado, especies
inorgnicas que son difciles de
detectar y cuantificar por
espectroscopia UV-Visible o
por Absorcin Atmica
se utilizan por fluorescencia.
Adicionalmente a esto los
niveles de deteccin son del
orden de partes por billn,

Compuestos Orgnicos y Bioqumicos:
adenina, cido antranlico, cistena,
hidrocarburos
aromticos policclicos, indol, naftol,
protenas, cido saliclico, escatol, triptfano,
cido
rico, adrenalina, alquilmorfina, LSD,
penicilina, fenobarbital, procana, reserpina,
clorofila, alcaloides, flavonoides, esteroides,
cido ascrbico, cido flico, nicotinamida,
piridoxal, corticoesteroides, estrgenos,
progesterona, andrgenos, cidos biliares,
colesterol, triglicridos, creatinina,
deshidrogenasas, transaminasas, fosfatasas,
perioxidasas, ATP, luciferina, luciferasa,
vitaminas: A, B1, B2, B6, C y la E, etc.

Compuestos Inorgnicos:
cianuro, fluoruro, sulfatos,
fosfatos, aluminio, arsnico,
berilio,
boro, calcio, magnesio, tierras
raras, selenio, uranio, etc




Gracias por su atencin