NUTRICION Y METABOLISMO

BACTERIANO




Nutrientes
1- Fuente de energa luz
sustancias qumicas
2- Macronutrientes
H K
O Mg
C Na
N 95% Ca
S Fe
P
3- Micronutrientes (elementos traza)
Co, Zn, Mo, Cu, Mn, Ni, Se, W
4- Factores de crecimiento
Vitaminas
Purinas y pirimidinas
Aminocidos

Fuente de
carbono
- CO
2

- Compuestos
orgnicos

Carbohidratos, azcares,
protenas, aminocidos,
lpidos, cidos grasos,
glicerol
Fuente de
nitrgeno
- Inorgnica
- Orgnica
NH
4
, NO
3
-
, N
2

Protenas, peptonas, aa,
bases pricas y
pirimdicas, urea
Fuente de
fsforo
- Inorgnica
- Orgnica
Fosfatos
Esteres del cido
fosfrico
Fuente de
azufre
- Inorgnica
- Orgnica
Sulfuros y sulfatos
Aminocidos sulfurados,
vitaminas

Macronutrientes
Tipos nutricionales Fuente de
energa
Fuente de
C
Ejemplos
Fotoauttrofos Luz CO
2
Cianobacterias,
bacterias
prpuras y
verdes
Fotohetertrofos Luz
Compuestos
orgnicos
Algunas
bacterias
prpuras y
verdes
Quimioauttrofos o
littrofos
Compuestos
inorgnicos
ej.: H
2
, NH
3
,
NO
2
-
, H
2
S
CO
2
Algunas
Eubacterias y
muchas Archaea
Quimiohetertrofos
o hetertrofos
Compuestos
orgnicos
Compuestos
orgnicos
La mayora
Eubacterias,
algunas Archaea
CONDI CI ONES PARA EL CRECI MI ENTO MI CROBI ANO




Nutrientes
Agua
Fuentes de energa
Fuentes de C, N, y
otros elementos
Micronutrientes,
Factores de crecimiento
Condiciones
de cultivo

P
H
Temperatura
Luz
Aireacin
Actividad del agua
Potencial redox
Crecimiento
Medios de cultivo

FACTORES DE CRECIMIENTO

Los microorganismos auto o heterotrfos pueden requerir
pequeas cantidades de ciertos compuestos orgnicos que
no pueden sintetizar y deben incorporarse en los medios de
cultivo.

* bases pricas y pirimdicas ADN, ARN
* aminocidos esenciales sntesis proteica
* vitaminas coenzimas
Aislar: Es separar un tipo de microorganismo a partir de una
poblacin mixta. En habitats naturales, raramente encontramos
a los microorganismos en cultivo puro.

Aislamiento directo: se logra a partir de una muestra cuando el
o los microorganismos estn en una proporcin adecuada., se
realiza por estras (agotamiento) con o sin dilucin previa de la
muestra (suelo, alimentos), en medio slido.

Aislamiento por enriquecimiento: Cuando el microorganismo
que se desea aislar e identificar se encuentra en baja proporcin
en la muestra, y se incluye una primera etapa que consiste en
sembrar la muestra en medio lquido. Luego de varios pasajes
se aisla por el mtodo de estras.
AISLAMIENTO
MEDIOS DE CULTIVO
DEFINICION.-
Es una solucin acuosa (bien como tal, o incorporada a un coloide en
estado de gel) que contiene todas las sustancias necesarias para el
crecimiento de un determinado tipo de microorganismo.
CLASIFICACION:
a) Complejos o indefinidos.- son de composicin qumica no exacta, de
derivados y extractos naturales. Ejms: Extracto de carne; de levadura;
peptona de carne o de soya; etc.
b) Sintticos o definidos.- contienen cantidades concretas de diversas
sustancias puras, orgnicas, o inorgnicas disueltas en agua destilada,
para el crecimiento de determinado microorganismo.
c) Semisinttico.- contiene una mezcla de sustancias de naturaleza y
cantidades conocidas junto a otras sustancias de naturaleza y
composicin indefinidas.
Segn el estado fsico o aspecto, estos tres tipos de medios de cultivo,
podemos considerar:
Medios lquidos o caldos
Medios semislidos, que contienen Agar-agar extraido de Algas rojas,
y otros contienen slica gel.
Clasificacin de los medios de cultivo

Segn su naturaleza fsica
* lquidos
* slidos - solidificante: Ejm. Agar-agar
* semi-slidos
Segn su composicin
* definidos o sintticos: de composicin qumica conocida
* no definidos o complejos: de composicin qumica no
definida, enriquecidos con peptonas, extracto de carne,
de levadura, de suelo, sangre.

Segn su uso en el laboratorio

* Selectivos o inhibitorios: medios que contienen, adems
de los nutrientes, ciertas sustancias que inhiben el desarrollo de
algunos microorganismos permitiendo el crecimiento de otros o
cuya composicin permite el desarrollo de un grupo especfico.
Ejm. Agar-antibiticos; agua, sales, luz; medios con NaCl
superior a la concentracin fisiolgica.

* Diferenciales: medios de cultivo que contienen indicadores
para diferenciar los distintos tipos de microorganismos que
puedan crecer en l.
Ej. azcar fermentecible: lactosa, indicador:rojo neutro.

Cultivo en medio lquido
Habitualmente se realiza en tubos o en matraces.
El crecimiento se puede manifestar por enturbiamiento, por
formacin de velo o pelcula, o por sedimento.
Cultivo en medio slido
Puede ser en tubos o placas
a) Tubos con agar inclinado.- Para sembrarlos, se mueve el
asa o la punta suavemente sobre la superficie del agar con un
movimiento en zigzag desde el fondo hasta la parte superior,
cuidando de no daar el agar.
b) Tubos sin inclinar.- Se siembran introduciendo una punta
en el centro del agar. Tambin se llama siembra por picadura.
c) Siembra en placas.- Puede ser en superficie (por estras o
baado) o incorporada (mezclando el inculo con el agar
semifundido)
Las colonias se describen por examen macroscpico en
funcin del tamao, la forma, el borde, la elevacin, la
transparencia y el color. Esto resulta a veces muy til en la
identificacin

A partir de colonias aisladas en medio de cultivo se realiza un
examen microscpico que debe mostrar clulas
razonablemente semejantes respecto al Gram y a la morfologa.

Las colonias aisladas deben aislarse nuevamente en medio no
selectivo por el mtodo de estras. Esto se conoce como
reaislamiento.

CULTIVO PURO

Crecimiento de un microorganismo en medio
de cultivo lquido
1- Fase de latencia
2- Fase exponencial
3- Fase estacionaria
4- Fase de muerte
Crecimiento en un volumen fijo de medio o
cultivo cerrado (batch)
Fase lag .- las clulas se adaptan al nuevo ambiente, aun no se dividen
Fase exponencial (log) .- velocidad mxima de crecimiento bajo
condiciones particulares, tiempo de generacin mnimo
Fase estacionaria .- sin crecimiento neto, vc=0 estadsticamente = 0
cuando: vc=vm (vel. crecimiento es igual a la de muerte).
nutrientes limitantes, pero suficientes para mantener actividad
acumulacin de desechos, inhibicin del crecimiento.
Fase de muerte .- velocidad de muerte celular > velocidad de divisin
celular.
Luego de la adicin de bacterias al medio lquido fresco se observa la
siguiente cintica de crecimiento:
Factores del ambiente

fsicos: temperatura, gases, pH, presin osmtica
qumicos: nutrientes, sustancias antimicrobianas
biolgicos: otros microorganismos, micro y
mesofauna, vegetacin, afectan las
actividades microbianas

Los distintos factores actan simultneamente y
resulta difcil el anlisis integrado de los efectos.

Sicrfilos - rango: < 0-20C, ptimo < 15
o
C
organismos marinos, algas: Chlamydomonas nivalis (nieve rosada),
bacterias: Pseudomonas, Flavobacterium
membrana contiene alto % de cidos grasos insaturados
Sicrtrofos o Sicrfilos facultativos
- rango: 0-35C, ptimo 20-30
o
C
Pseudomonas - crecen en el refrigerador
Mesfilos - rango: 15-45 C, ptimo: 30-40C
la mayora de los microorganismos (del suelo, aguas, patgenos)
Termfilos - rango: 40-70C, ptimo de 55-65
o
C
membrana contiene alto % de cidos grasos saturados
enzimas estables al calor
Bacillus stearothermophilus, organismos de compostaje
Hipertermfilos - rango: 80-113C, ptimo > 90
o
C
Pyrococcus, Pyrodictium (aguas termales)
Oxgeno
Clasificacin de los microorganismos segn
el efecto del oxgeno:
Aerobios
obligados: requieren oxgeno (21% o ms)
Ej. Bacillus, hongos, etc.
microaeroflicos: lo requieren pero a niveles menores que el
atmosfrico (5-10%)
Ej. Azospirillum
Anaerobios
facultativos: no requieren oxgeno, pero el desarrollo es mejor con
oxgeno.
Ej. Levaduras, E. coli
aerotolerantes: no son sensibles al oxgeno (crecen en ausencia o
presencia de oxgeno).
Ej. Enterococcus faecalis, Sreptococcus spp.
obligados: no toleran el oxgeno, muere en su presencia
Ej. Methanobacterium, Clostridium
.
tubos con medio de cultivo llenos por completo.
medios con sustancias que reaccionan con el oxgeno y lo excluyen.
dispositivo especial (cmara anaerbica)
cajas o tubos incubados en recipientes con granos germinados (cebada,
centeno)
Cultivos en anaerobiosis
Otros gases
N
2
componente principal de de la atmsfera (78%). Gas inerte: no es usado
por la mayora de los organismos, los que pueden reducir el triple enlace del
N
2
con la enzima nitrogenasa se denominan diazotrofos o fijadores de N
2
y
pueden desarrollarse en ambientes sin N-combinado
CO txico para la mayora de los organismos (cadena respiratoria)
puede ser oxidado a CO
2
por algunos microorganismos
CH
4
liberado a la atmsfera por microorganismos metanognicos, gas con
efecto invernadero, puede ser oxidado a CO
2
por bacterias metanotrficas
CO
2
importante gas, fuente de carbono para los autotrofos, aerobios y
anaerobios, fotosintticos o quimiosintticos. Muchos hongos lo requieren a
niveles superiores a los atmsfericos, para ciertas sntesis
H
2
poco usado, txico para la mayora de los microorganismos, brinda
energa a bacterias Hydrogenomonas: H
2
+O
2
= H
2
0 + ATP


pH
El pH es la acidez o alcalinidad de una
solucin, medida por el log 1/(H
+
)
Clasificacin de los microorganismos segn
su pH ptimo
Neutrfilo: pH ptimo 7 - Ej.: bacterias
patgenas humanas.
Acidfilo: pH ptimo 7 - Ej.: muchas de
las archeobacterias y hongos.
Basfilo: pH ptimo 7 - Suelos y aguas
ricas en carbonatos
Colonia Lactosa negativa
Colonia Lactosa positiva
MEDIO SELECTIVO Y
DIFERENCIAL
HEMOLISIS EN AGAR SANGRE
HEMLISIS COMPLETA HEMLISIS PARCIAL