Capítulo 16

El ADN Recombinante y la
Ingeniería Genética
Arroz Dorado, o “Frankenfood”?
 124 millones de niños alrededor del mundo tienen
deficiencia de vitamina A

 Arroz dorado
–Plantas de arroz fueron transformadas con genes de narciso, lo
que les permite producir beta-carotenos en la semilla (arroz)
–Beta-caroteno es un precursor de la Vitamina A

 El arroz es el principal alimento de 3 mil millones de

personas
Arroz Dorado, o “Frankenfood”?
Arroz Dorado, o “Frankenfood”?
 Descubrimiento de las
Enzimas de Restricción

 Hamilton Smith estudiaba cómo

Haemophilus influenzae se defiende a sí
misma de los ataques de bacteriófagos

 Descubrió que la bacteria tiene una

enzima que corta el ADN viral
 sitio que reconoce la enzima fragmentos cortados

5’ GAAT T C 3’ G AATTC

3’ CTTAAG 5’ CTTAA G

5’ G 3’ 5’ A A T T C 3’

3’ C T T A A 5’ 3’ G 5’
un fragmento de ADN otro fragmento de ADN

muesca
5’ GAAT TC 3’

3’ CTTAAG 5’
muesca
Acción de la ADN ligasa

5’ GAAT TC 3’
Stepped Art
3’ CTTAAG 5’
Fig. 16-2, p.244
Plásmidos

Fig. 16-3b, p.254

 Usando Plásmidos

 El plásmido es un pequeño
círculo de ADN bacterial
 ADN extraño puede ser
insertado en el plásmido

Forma plásmidos
recombinantes
 El plásmido es un vector de
clonación
 Puede acarrear ADN al interior
de otra célula
Enzima de restricción corta Fragmentos de El ADN extraño y el ADN
sitios con secuencia ADN o ADNc del plásmido se mezclan
específica con extremos en un tubo de ensayo
pegajosos

Conjunto de
plásmidos
recombinantes
que contienen
el ADN extraño

La misma enzima Plásmido de

corta la misma ADN con
secuencia en el extremos
ADN del plásmido pegajosos
Las células hospederas
capaces de dividirse con
rapidez captan los
plásmidos recombinantes
Stepped Art

Fig. 16-4, p.255

 ARNm

Preparando Transcriptasa
reversa

ADNc ARNm
ADNc
ADN
polimerasa

ADNc
ADNc

Fig. 16-5, p.245

 Bibliotecas de Genes
 Bacterias que contienen

diferentes fragmentos de ADN

clonado

Biblioteca genómica
 Biblioteca de ADNc
Uso de la Colonias en placa
de Petri

Sonda Las células se

adhieren al papel
filtro

Las células se lisan;

el ADN se
une al papel
filtro

Se agrega la
sonda

El sitio en donde se une la sonda

produce un punto oscuro en el
film, esto indica
que la colonia
posee el gen
 Amplificando ADN
 Los fragmentos se pueden introducir en
microorganismos de rápido crecimiento

 Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR)

 Reacción en Cadena de la
Polimerasa
 La secuencia a copiar es calentada

 Se agregan cebadores que se unen a los extremos de

las bandas simples

 La ADN polimerasa utiliza nucleótidos libres para crear

bandas complementarias

 El número de copias de ADN se duplica

 ADN doble banda a
Reacción en ser copiado

Cadena de la ADN calentado

Polimerasa
a 90°–94°C

Se agregan
cebadores que se
aparean con los
extremos

Se enfría la mezcla;
apareamiento de
cebadores y
extremos de la
banda de ADN

ADN polimerasa
sintetiza nuevas
Stepped Art bandas de ADN

Fig. 16-6, p. 256

 Se calienta la mezcla
de nuevo; hace que
Reacción en se separen todos los
fragmentos de ADN
Cadena de la
Polimerasa Se enfría la mezcla;
apareamiento de los
cebadores y los
extremos de las
bandas de ADN

La acción de la ADN
polimerasa duplica
el número de copias
idénticas de ADN
Stepped Art

Fig. 16-6, p. 256

 TCCATGGACC
TCCATGGAC

Determinando TCCATGGA
TCCATGG

la Secuencia
TCCATG

TCCAT

TCCA Electroforesis
en gel
•Se coloca el ADN en un gel TCC

TC
•Los fragmentos ADN se Uno de los di-
versos fragmen-
T tos de ADN que
mueven en orden de migran en el gel

tamaño; pasan a través de

un rayo láser
•El color de la fluorescencia
Uno de los fragmentos de ADN que

de cada fragmento se graba pasa por un rayo láser después de

haberse desplazado por el gel

e imprime

T C C A T G G A C C A
Determinando la Secuencia

Fig. 16-8b, p.258

 Huellas Digitales de ADN
 Arreglo único de los fragmentos de ADN

 Heredado de los padres en un patrón

Mendeliano

 Incluso
permite revelar diferencias entre
hermanos
 Repeticiones en Tándem

 Secuencias cortas de ADN difieren

entre personas
 Muchos lugares en genoma donde
ocurren repeticiones en tándem
 Cada persona lleva una combinación
única del número de repeticiones
 Electroforesis en Gel

 Se coloca el ADN en un extremo del gel

 Se aplica una corriente al gel
 Las moléculas de ADN están cargadas
negativamente y se mueven a través del
gel al extremo positivo
 Las moléculas más pequeñas se mueven
más rápido que las moléculas más
grandes
Analizando las Huellas Digitales
de ADN
 El ADN se tiñe o se hace visible por medio de

una sonda radioactiva

 El patrón de bandas se usa para:

 Identificar o descartar sospechosos de crímenes

 Identificación de cuerpos
 Determinar paternidad
Electroforesis
en Gel

Fig. 16-7, p.257

Electroforesis
en Gel
 Secuenciamiento del Genoma
 1995 – Se determina la secuencia de
Haemophilus influenzae
 Actualmente el principal método es el
Secuenciamiento Automático de ADN
 El borrador de la secuencia completa del
genoma humano se determinó de esta
manera
 La Iniciativa del Genoma Humano
Meta – Mapear el genoma humano completo
 Al inicio muchos pensaron que sería un
desperdicio de recursos
 El proceso se aceleró cuando Craig
Ventner utilizó segmentos de ADNc como
ganchos para encontrar genes
 El secuenciamiento se completó antes de
lo previsto, al inicio de 2001
Secuenciamiento del Genoma
Secuenciamiento del Genoma
 Ingeniería Genética
 Los genes son aislados, modificados, e
insertados a un organismo

 Es posible gracias a la tecnología del ADN

recombinante

Cortar el ADN y recombinar las secciones
 Amplificar las secciones modificadas
 Proteínas Transformadas
 Las bacterias se pueden utilizar para

incrementar proteínas valiosas para la

medicina

Insulina, factores de coagulación
 Vacunas
Pueden “Escapar” las Bacterias
Transformadas Genéticamente

 Bacterias transformadas genéticamente

están diseñadas de modo que no
puedan sobrevivir fuera del laboratorio

 Se les incluyen genes que se activarían

en condiciones naturales, causándoles
las muerte
Plantas
Modificadas
Genéticamente
 Plantas Modificadas
Genéticamente
 Plantas de algodón que muestran resistencia a
herbicidas

 Plantas alpinas que producen menos lignina y

más celulosa

 Plantas de tabaco que producen proteínas

humanas
 El plásmido Ti

 Se cambiaron Célula vegetal

genes causantes
de tumores con
genes beneficiosos Gen extraño
 incorporado al
plásmido Ti
 El plásmido
transfiere éstos
genes a cultivos
celulares vegetales
 El plásmido Ti
b La célula vegetal crece y se divide.
Algunas células descendientes dan
lugar a embriones que pueden llegar a
desarrollarse como plantas maduras
obtenidas por ingeniería genética

a El gen extraño es transferido a

e Plantas jóvenes
la célula vegetal. Después se
con un producto
incorpora a uno de los
génico fluorescente
cromosomas de la planta.

c La célula vegetal se
divide.

d Plantas modificadas
genéticamente.

Fig. 16-12, p.261

 Transferencia de Genes en los
Animales
 Ratones con deficiencia hormonal: enanismo

 Óvulos fertilizados fueron inyectados con gen

para la hormona de crecimiento

 El gen se integró en el ADN del ratón

 Los ratones modificados genéticamente

fueron 1 y 1/2 veces más grandes que sus
compañeros de camada no modificados
Ratones Transgénicos

Fig. 16-14, p.262

 Diseñando Ganado Vacuno
 Embriones de ganado idénticos
genéticamente se pueden crecer en
cultivos celulares
 Los embriones pueden ser modificados
genéticamente

Para crear resistencia a enfermedad de
las vacas locas

Para que el ganado produzca albúmina
humana de uso médico
 Animales
Modificados
Genéticamente
 Seguridad
 Superpatógenos

 ADN de organismos patogénicos o tóxicos

usado en experimentos de recombinación
 Hipercolesterolemia Familiar
 Un gen codifica para una proteína que
funciona como receptor celular de LDL
 Dos alelos del gen mantienen bajos los
niveles de LDL en sangre
 Dos alelos mutados producen altos
niveles de colesterol y enfermedad del
corazón
 Ejemplo de Terapia Génica

 Una mujer con hipercolesterolemia familiar

 Se le remueve parte del hígado

 Se utiliza un virus para introducir el gen del receptor

normal de LDL en células de hígado cultivadas

 Se colocan de vuelta las células modificadas de

hígado
Resultados de la Terapia Génica
 Las células modificadas sobrevivieron en el hígado de la
mujer
 Los niveles de LDL en sangre disminuyeron un 20%
 No hay evidencia de aterosclerosis
 Los niveles de colesterol se mantuvieron altos
 Al parecer el procedimiento prolongará su vida
 Usando Genes Humanos
 Aún con el gen en mano es difícil manipularlo
para tomar ventaja
 Se utiliza generalmente virus para insertar
genes en cultivos de células humanas pero el
procedimiento es problemático
 Es muy difícil obtener genes modificados
para que trabajen donde deben
 Cuestiones Éticas

 Quién decide qué debe ser corregido a través

de la ingeniería genética?
 Los animales deberían ser modificados para
proveernos de órganos para transplantes en
humanos?
 Los seres humanos deberían ser clonados?