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LA CaMKII es la kinasa de la MEMORIA

Jesús F. Torres-Peraza, MD PhD


Proteínas Kinasas

PKA (AMPc)
Kinasas Activadas por
Nucleótidos Cíclicos PKG (GMPc)

a.-Activadas por DAG,


Kinasas Activadas por Calcio y fosfolípidos (PKC)
Calcio
b.-Activadas por
Calcio/Calmodulina (CaMK)

a.-Integrales de Membrana
Tirosinas Kinasas
(Recp. Tirosina Kinasa)

b.-Citosólicas (Recepores
asocidos a Tirosina kinasas
solubles)

Jesús F. Torres-Peraza, MD PhD


RECEPTORES PARA MOLÉCULAS DE SEÑALIZACIÓN
EXTRACELULAR

A) Receptores unidos a canales


iónicos

De
Superficie B) Receptores acoplados a
Proteínas G
RECEPTORE
S
C) Receptores unidos a Enzimas
(Tirosina-kinasa y otros)

Intracelular
es

Jesús F. Torres-Peraza, MD PhD


Señalización a través de
RECEPTORES DE SUPERFICIE ASOCIADOS A ENZIMAS

Encargados de responder a señales extracelulares que modulan


la proliferación, diferenciación, supervivencia, crecimiento y/o
migración celular. Producen respuestas lentas

Estructura

Dominio Extracelular:
Reconocimiento del ligando

Dominio
Transmembrana

K K
Dominio Intracelular:
Con o sin actividad enzimática

Jesús F. Torres-Peraza, MD PhD


Tipos
RECEPTORES TIROSINA KINASA: Con actividad kinasa intrínseca. Las
dianas de fosforilación son proteínas de señalización intracelular
(adaptadores).

RECEPTORES ASOCIADOS A TIROSINA KINASA: La actividad tirosina


kinasa reside en otra proteína citoplasmática que se asocia al
receptor activado.

RECEPTORES GUANIDIL-CICLASA: Con actividad enzimática


intrínseca, catalizan la producción de GMPc (Guanidilciclasa de
membrana).

“RECEPTOR” TIROSINA FOSFATASA

RECEPTORES SERINA/TREONINA KINASA: Fosforilan residuos de serina o


treonina de proteínas reguladoras génicas.

RECEPTORES ASOCIADOS A HISTIDINA KINASA: Con actividad kinasa


intrínseca. Las dianas de fosforilación son proteínas de señalización
Jesús F. Torres-Peraza, MD PhD
Receptores con actividad enzimática Tirosinia Kinasa

Jesús F. Torres-Peraza, MD PhD


RECEPTORES TIROSINA KINASA
Responden a una gran variedad de factores de crecimiento y hormonas

Jesús F. Torres-Peraza, MD PhD


La unión del ligando al dominio extracelular de unión activa el
dominio intracelular tirosina kinasa…PERO COMO LO HACE?

La activación se produce por un proceso de


dimerización/reorientación del receptor

Dímeros Monómero

Jesús F. Torres-Peraza, MD PhD


La autofosforilación contribuye a la activación del receptor por
medio de dos vías

1.-La fosforilación de los dominios Tirosina Kinasas aumenta la


actividad enzimática intrínseca.

2.-La fosforilación fuera de los dominios Tirosina Kinasas crea


sitios de unión o acoplamiento para determinadas proteínas
(ACOPLADORAS) de señalización que reconocen con altísima
afinidad los residuos de Tirosinas fosforiladas

Los acopladores han de tener la capacidad


de reconocer y unirse a los dominios de
SH2
unión formado por las fosfo-tirosinas
PTB
SH2: SRC homology region
PTB: Phosphotyrosine-binding

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SOS

Acoplador Grb2
En algunos casos los dominios fosfo-tirosinas de unión a los acopladores
no están en el propio receptor…….. EJM.: I.R.S.
Los adaptadores no se unen al directamente al receptor, se unen al IRS

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Las proteínas ACOPLADORAS unidas al receptor son activadas:
-FOSFORILACIÓN y/o
-CAMBIO CONFORMCIONAL DEPENDIENTE DE LA UNIÓ AL RECEPTOR

Adaptadores con atividad enzimática


Además de los dominios de unión de fosfo-tirosinas pueden
tener dominios de unión a otras proteínas…..formación
decomplejos multiproteínicos

Actúan como puentes entre el receptor y las


proteínas de señalización
RAS

SOS

La activación de RAS dependiente de receptor TK se debe a la


interacción indirecta con el receptor mediada Grb2. La Grb2 tiene
dominios SH2 (unión al receptor TRK activado) y a la GEF llamada
SOS (a través de un dominio SH3)
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Proteínas Ras
phophoTRK-GRB Calcio-DAG

SOS GEF

GDP GTP
GTP GDP

Ras Ras Activa


inactiva
P
AutoGTP-asa

GAP Raf
GEF: Intercambiador de
nucleótidos de Guanina.
GAP: Proteína Activadora de la
GTPasa
Señal
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Los receptores Trirosina Kinasa utilizan proteínas
acopladoras para conducir la señal a una cascada
de señalización celular
MAPK:
RUTA MITOGÉNICA
Mitogen
Actiated
Protein Kinase

Proliferación,
diferenciación,
SOS
supervivencia

MAP-KKK Raf

MAP-KK MEK

MAP-K ERK

Serina/Treonina Kinasas

Expresión de
genes
tempranos

Jesús F. Torres-Peraza, MD PhD


Tomando en cuenta que RAS no tiene
actividad kinasa sino GTP-asa:

¿Cuál es el mecanismo mediante el cual RAS


activa a RAF (MAP-KKK) ?
Adaptadores con actividad enzimática

RUTA DE LA PI 3-K
PI 3-KINASA
Una de las principales kinasas involucradas en el crecimiento y
supervivencia celular

TRK Ras

Subunidad Subunidad
Reguladora Catalítica

La PI3-K cataliza la fosforilación de los fosfoinsitoles


en la posición 3 del anillo INOSITOL.

Actividad de la PI Kinasa: Activación indirecta de la Proteína


Kinasa B (AKT) y de la PLC-γ

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Sustrato y productos de la PI 3-K

DAG
PLC

IP3
PI (4,5)P2

PI (3,4)P2 PI (3,4,5)P3

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Los polifosfoinositoles productos de la PI3-K forman dominios
lipídicos en la membrana especializados para la unión
(reclutamiento) de determinadas proteínas activadoras (BTK y PDK)

Activación de PLC-γ por PI3-K (mediada por BTK)

Jesús F. Torres-Peraza, MD PhD


Activación de PKB(AKT) por PI3-K
Activación Indirecta mediada por PDK

LA vía de la PI3K-AKT es la principal vía


prosupervivencia neuronal

PDK: Phosphatidylinositol-dependent Protein Kinase


Jesús F. Torres-Peraza, MD PhD
Las proteínas ACOPLADORAS unidas al receptor son activadas:
-FOSFORILACIÓN y/o
-CAMBIO CONFORMCIONAL DEPENDIENTE DE LA UNIÓ AL RECEPTOR

Adaptadores con atividad enzimática


Activación de PLC-γ directamente por Receptores Tirosina Kinasa

La PLC-γ posee un dominio SH2

Jesús F. Torres-Peraza, MD PhD


Explicar detalles de la
señalización de las
neurotofinas

Edosoma de señalizaCION
Tipos
RECEPTORES TIROSINA KINASA: Con actividad kinasa intrínseca. Las
dianas de fosforilación son proteínas de señalización intracelular
(adaptadores).

RECEPTORES ASOCIADOS A TIROSINA KINASA: La actividad


tirosina kinasa reside en otra proteína citoplasmática que se
asocia al receptor activado.

RECEPTORES GUANIDIL-CICLASA: Con actividad enzimática


intrínseca, catalizan la producción de GMPc (Guanidilciclasa de
membrana).

“RECEPTOR” TIROSINA FOSFATASA

RECEPTORES SERINA/TREONINA KINASA: Fosforilan residuos de serina o


treonina de proteínas reguladoras génicas.

RECEPTORES ASOCIADOS A HISTIDINA KINASA: Con actividad kinasa


intrínseca. Las dianas de fosforilación son proteínas de señalización
intracelular. Jesús F. Torres-Peraza, MD PhD
Señalización a través de
RECEPTORES DE SUPERFICIE ASOCIADOS A ENZIMAS

Estructura

Dominio Extracelular:
Reconocimiento del ligando

Dominio
Transmembrana

K K
Dominio Intracelular:
Con o sin actividad enzimática

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Receptores asociados a tirosinas kinasas
Tirosinas Kinasas no receptoras

-Los receptores carecen de actividad catalítica.


-Se activan al formar dímeros inducidos por la unión del (los)
ligando(s) al igual que los TRK
-Se asocian no covalentemente a proteínas kinasas citosólicas.
-Las kinasas citosólicas fosforilan al receptor y se auto-trans-
fosforilan.

-Familia Src (SRC, YES, LYN, FYN)


-JAK-STAT
-FAK (Kinasas de adhesión focal … integrinas)

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Familia Src
Tirosinas Kinasa no receptores

SH2
SH2

SH3 Csk

Catalítico

Inactiva Activa Inactiva

Jesús F. Torres-Peraza, MD PhD


Sistema de kinasas JAK/STAT
-Participan en la señalización de citoquinas (IL-3, interferón),
hormona decrecimiento, eritropoyetina y otras.
-La activacion de las JAK/STAT permite una señalizacióin
directa hacia el núcleo: Control de la expresión génica

Jesús F. Torres-Peraza, MD PhD


Tipos
RECEPTORES TIROSINA KINASA: Con actividad kinasa intrínseca. Las
dianas de fosforilación son proteínas de señalización intracelular
(adaptadores).

RECEPTORES ASOCIADOS A TIROSINA KINASA: La actividad tirosina


kinasa reside en otra proteína citoplasmática que se asocia al
receptor activado.

RECEPTORES GUANIDIL-CICLASA: Con actividad enzimática


intrínseca, catalizan la producción de GMPc (Guanidilciclasa de
membrana).

“RECEPTOR” TIROSINA FOSFATASA

RECEPTORES SERINA/TREONINA KINASA: Fosforilan residuos


de serina o treonina de proteínas reguladoras génicas.

RECEPTORES ASOCIADOS A HISTIDINA KINASA: Con actividad kinasa


Jesús F. Torres-Peraza, MD PhD
Sistema de señalización mediado por
Receptores Serina/TreoninKinasas y proteínas
SMAD (no kinasas)
Receptor con actividad Serina-Treonina Kinasa
-Activados por los Factores de Crecimiento Transformadores (TGF).

-Forman dímeros al unir el ligando

-Dos tipos de receptores: Tipo I y Tipo II.

-Señalizan a través de las proteínas SMAD (sin actividad enzimátca).

-Señalización directa hacia el núcleo: Control rápido de la expresión


génica.

Jesús F. Torres-Peraza, MD PhD


Receptor con actividad Serina-Treonina Kinasa

Jesús F. Torres-Peraza, MD PhD


Tipos
RECEPTORES TIROSINA KINASA: Con actividad kinasa intrínseca. Las
dianas de fosforilación son proteínas de señalización intracelular
(adaptadores).

RECEPTORES ASOCIADOS A TIROSINA KINASA: La actividad tirosina


kinasa reside en otra proteína citoplasmática que se asocia al
receptor activado.

RECEPTORES GUANIDIL-CICLASA: Con actividad enzimática


intrínseca, catalizan la producción de GMPc (Guanidilciclasa de
membrana).

“RECEPTOR” TIROSINA FOSFATASA

RECEPTORES SERINA/TREONINA KINASA: Fosforilan residuos de serina o


treonina de proteínas reguladoras génicas (SMAD).

RECEPTORES ASOCIADOS A HISTIDINA KINASA: Con actividad kinasa


intrínseca. Las dianas de fosforilación son proteínas de señalización
Jesús F. Torres-Peraza, MD PhD
Jesús F. Torres-Peraza, MD PhD
PKG Sustrato

Relajación muscular

Jesús F. Torres-Peraza, MD PhD


Tipos de Receptores con actividad enzimáica

RECEPTORES TIROSINA KINASA: Con actividad kinasa intrínseca. Las dianas


de fosforilación son proteínas de señalización intracelular (adaptadores).

RECEPTORES ASOCIADOS A TIROSINA KINASA: La actividad tirosina kinasa


reside en otra proteína citoplasmática que se asocia al receptor activado.

RECEPTORES GUANIDIL-CICLASA: Con actividad enzimática intrínseca,


catalizan la producción de GMPc (Guanidilciclasa de membrana).

RECEPTORES SERINA/TREONINA KINASA: Fosforilan residuos de serina o


treonina de proteínas reguladoras génicas (SMAD).

RECEPTORES ASOCIADOS A HISTIDINA KINASA: Con actividad kinasa


intrínseca. Las dianas de fosforilación son proteínas de señalización
intracelular.

“RECEPTOR” TIROSINA FOSFATASA.

Jesús F. Torres-Peraza, MD PhD


IMPORTANCIA DE LAS PROTEINAS FOSFATASAS

Kinasas
ATP ADP
P Proteína
Proteína
Inactiva Activa

P
Fosfatasas

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PROTEINAS FOSFATASAS

Especificidad
Treonin-Serin-Fosfatsas: Calcineurina (PP2B), MAPK-
Fosfatasa 1 (MKP-1), SHP

Tirosina fosfatasas: CD45, PP1


Ubicación

Citosólicas: Tirosina o Treonin-Serin-Fosfatsas


Calcineurina, MAPK-Fosfatasa, SHP

De Membranas: Tirosina fosfatasas CD45 (receptores)


Sustrato

Fosfatasas de proteínas: Calcineurina, CD45, MKP-1.

Fosfatsas de fosfolípidos: PI(3,4,5)P3 Fosfatasa (PTEN)

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Tirosina Fosfatasas

Citosólicas Membrana

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Receptores Tirosina Fosfatasas

Membrana Proteínas de membrana con


estructura similar a un
receptor, pero sin ligados
conocidos

Dominio citoplasmático
con actividad TIROSINA
FOSFATASA

EJEMPLO: CD45

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Inactivable Activable Activa

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Activación de proteínas SRC

CD45
Autofosforilación

p56-Lck
Inactiva

Activa
No susceptible de Susceptible de
Autofosforilada
autofoforilación autofoforilación
(inactivable) (activable)

p56-Lck es una SRC Jesús F. Torres-Peraza, MD PhD


Serina-Treonina Fosfatasas

-Fosfatasas citosólicas.

-Existen en forma de
complejos formado por la
subunidad catalítica y la (las)
subunidad(es) reguladoras.

-Las subunidades reguladoras


le confieren mayor
especificidad de acción:
PP1 Regulan la unión a sustratos
PP2a específicos

PP2b
PP3
PAPEL DE LAS FOSFATASAS EN LA MODULACIÓN DE LA
SEÑALIZACIÓN CELULAR

1.- Desactivación de vías activadas por fosforilación

SEÑAL

RAS

MAPK-Kinasa P
ERK ERK

MAPK-Fosfatasa
Inactiva Activa

Jesús F. Torres-Peraza, MD PhD


MAPK:
RUTA MITOGÉNICA
Mitogen
Actiated
Protein Kinase

Proliferación,
diferenciación,
SOS
supervivencia

MAP-KKK Raf

MAP-KK MEK

MAP-K ERK

Serina/Treonina Kinasas

Expresión de
genes
tempranos

Jesús F. Torres-Peraza, MD PhD


MODULACIÓN DE LA SEÑALIZACIÓN: Vía mitogénica Fosfatasa MKP-1

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MODULACIÓN DE LA SEÑALIZACIÓN: PAPEL DE LAS FOSFATASAS

2.- Activación de vías desactivadas por fosforilación

Señal

P CD45 (Fosfatasa)

p56-Lck p56-Lck

Kinasa
Inactivabe Activable

p56-Lck es una SRC

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MODULACIÓN DE LA SEÑALIZACIÓN: Vía JAK-STAT. Fosfatasa SHP1

Jesús F. Torres-Peraza, MD PhD


MODULACIÓN DE LA SEÑALIZACIÓN: PI3K-AKT Fosfatasa PTEN

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Regulación de la actividad de las proteínas
Fosfatasas

1.- Fosforilación de la fosfatasa

2.- Proteínas Inhibdoras de Fosfatasas

3.- Segundos Mensajeros

Jesús F. Torres-Peraza, MD PhD


Regulación de la actividad de las proteínas Fosfatasas

1.- Fosforilación de la fosfatasa

Jesús F. Torres-Peraza, MD PhD


Regulación de la actividad de las proteínas Fosfatasas

2.- Proteínas Inhibidoras de Fosfatasas (DARPP-32)

AC -DARPP-32: Inhibidora de fosfatasas


regulada por Dopamina y AMPc.
-Expresada en zonas especíicas del SNC

PKA PKA
Inactiva Activa

Sustrato de
DARPP-32 DARPP-32 PKA

X
Inactiva Activa

PP1 PP1 Persistencia de la


fosforilacón en los
Activa Inactiva
sustratos de la PP1

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Regulación de la actividad de las proteínas Fosfatasas

3.- Segundos Mensajeros: Calcineurina

-Abundante en tejido nervioso y linfocitos T


-Es activada por la unión de Calcio (5% activa) y
Calcio-Calmodulina (100% activa)

Sitio
A catalítico
B
Ca-
Calmodulina Ca

Defosforila sustratos de la PKA y PKC directa e indirectamente


(inactiva el inhibidor de fofataasas I-1)

Jesús F. Torres-Peraza, MD PhD


Jesús F. Torres-Peraza, MD PhD
MODULACIÓN DE LA SEÑALIZACIÓN: PAPEL DE LA CONCENTRACIÓN
INTRACELULAR DE CALCIO

Calcio: 2 mM

Calcio: 0,1 μM

Jesús F. Torres-Peraza, MD PhD


Los efectos fisiológico del calcio dependen de que su concentración
intracelular se mantenga dentro de un margen determinado

Jesús F. Torres-Peraza, MD PhD


La concentració intracelular de Calcio responde al balance entre
los mecanimos de entrada y los de salida/almacenamiento de
Calcio
Aumento Calcio i:
-Canales activados por
ligando
-Canales activados por
voltaje (Membrana citp. y
R.E)
-Canales activados por IP3

Disminución Calcio i:
-Bombas ATPasa
citoplasmática,
Mitocondrial y del R.E.
-Bombas intercambidoras
Na/Ca
-Proteínas quelantes de
Calcio
Jesús F. Torres-Peraza, MD PhD
Las células poseen los mecanismos restringir finamente los aumentos
intracelulares de calcio: MICROAMBIENTES INTRACELULARES: Espinas
dendríticas

ESPINA
DENDRITICA
Proteínas Moduladas por Calcio
(directa o indirectamente mediante la calmodulina)
Parvalbúmina
Troponina
Adenilciclasa
Cadena ligera de Miosina
Sinaptotagmina
ATPasa-Ca (membrana y RE) MAP-2

Adenilciclasa NOS

Calpaina Calcineurina Tau


Calmodulina
Calcineurina
CaMK CaMK
PKC Cadena ligera
Ras Miosina
Oxido Nítrico Sinatasa

Jesús F. Torres-Peraza, MD PhD


Control de la expresión génica mediada por Calcio

-Participación de RAS, PKA y /o


CaMKII

Jesús F. Torres-Peraza, MD PhD


Jesús F. Torres-Peraza, MD PhD
La activación de los receptores NMDA produce una entrada de calcio
capaz de activar la transcripción de genes regulados por CREB y por NFkβ

Al estimular una neurona


in vitro con un baño de
NMDA (agonista NMDAr)
no se produce el mismo
patrón de expresión
génica

Jesús F. Torres-Peraza, MD PhD


El baño de NMDA activa todos los receptores
NMDA, tanto los que están en las sinapsis como
los que están n el soma neuronal.

¿La acción del calcio puede depender de la


fuente de calcio o sólo es necesario un
aumento en la concentración celular?
Sólo la estimulación de los receptores que están
en las sinápsis son capaces de producir la
activación de CREB.
Canal de Calcio acoplado
a la cascada intracelular

Canal de Calcio NO
acoplado a la cascada
intracelular

La cascada de señalización
inducida por el aumento
intracelular de calcio puede estar
modulado por el tipo de fuente de
entrada de calcio Jesús F. Torres-Peraza, MD PhD
Presináptico

Post-sináptico PSD

Los incrementos en la
concentración intracelular de
Calcio puede estar dirigida
directamente hacia una
cascada de señalización gracias
a proteínas de andamiaje, entre
otros factores

Jesús F. Torres-Peraza, MD PhD


Coupling NMDAr to cytoplasmic signaling pathways and NMDA
modulators

GKAP/Shank

nNOS SynGAP
HOMER

RAS mGluR

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