ALERGIA MECANISMOS

INMUNOLOGICOS
METODOS DE
DIAGNOSTICO
Dr. Edgar Matos Benavides
Inmunologo Alergologo

PREVALENCIA DE LAS ENFERMEDADES ALERGICAS
EN LA POBLACION PEDIATRICA GENERAL

En la actualidad se estima que:
un 3% de los nios son alrgicos a alimentos
un 8 % presentan dermatitis atpica
entre un 8 % y un 10% padecen asma
casi un 20 % sufren de rinitis o rinoconjuntivitis.

El Pas, martes 24 de junio de 2003
ENFERMEDAD ALERGICA: ETIOLOGIA
Predisposicin
GENETICA
Exposicin a
ALERGENOS
ENFERMEDAD ALERGICA
CONTAMINACION
HUMO TABACO
VIRUS-BACTERIAS
ALERGIA

Reaccin exagerada de defensa a
una sustancia particular, que puede
ser inhalada, ingerida o inoculada en
nuestro cuerpo y provocar una
respuesta inmunolgica de tipo
inflamatorio.
Alergia una Enfermedad Sistmica
RINITIS
ALERGICA
CONJUNTIVITIS
SINUSITIS
OTITIS
RGE
ALERGIA
ALIMENTARIA
DERMATITIS ATOPICA
ASMA
BRONQUIAL

Alergia
URTICARIA
ANGIOEDEMA
PRURIGO POR
INSECTOS
histamina,
factor quimiotctico de los eosinfilos
factor quimiotctico de los neutrfilos
leucotrienos
prostaglandinas y tromboxanos
factor activador de las plaquetas
IL- 4 e IL- 5

vasodilatacin
aumento de la permeabilidad vascular postcapilar
edema
contraccin de la musculatura lisa
aumento de la secrecin de las glndulas mucosas

Componentes principales que se requieren
para que la reaccin alrgica se
desencadene

IgE


ALERGENOS



Mastocitos



Histamina
Leucotrienos

1
Identificar y relacionar la clnica
del paciente con los posibles alrgenos:
HISTORIA CLNICA
Etapas diagnsticas
2
Demostracin de sensibilizacin mediada por IgE
para el o los alergenos sospechoso:
P CUTNEA, IgE SRICA ESPECFICA
3
Confirmacin de que el alrgeno es el responsable de
la clnica:
P de PROVOCACION o EXPOSICIN CONTROLADA
TEST DE ACTIBACION DE BASOFILOS
PRUEBA CUTANEA INTRAEPIDERMICA
PRUEBA CUTANEA INTRAEPIDERMICA
+
Dimetro
3 mm
15 minutos
solo estn indicadas
en el estudio de la alergia medicamentosa y venenos
Prick-Film. Lectura de prick
test con Escner
Prick-Film. Lectura de prick
test con Escner


Aplicacin Alergenos
Puncin con Lanceta
Secado Piel
Espera de Reaccin

Contorneado de Habones
Traslado a Hoja Codificada
Lectura Escner
Impresin Resultados
FUNDAMENTO RIDA.pdf
La prueba se basa en el principio del anlisis del immunoblot. Los
alrgenos especiales estn pegados a la superficie de las membranas de
la nitrocelulosa que se colocan en un canal de reaccin.
.
B
NBT
B
B
NBT

Comparacin con el mtodo de
referencia (IgE):
Comparacin con el skin-prick test:
Sensibilidad: 84.3 % Sensibilidad: 95.1 %
FUNDAMENTO immulite.pdf
IMMULITE 2500 3gAllergy IgE Especfica es un anlisis
enzimoinmunomtrico quimioluminiscente en fase slida, en dos
pasos,
Se basa en cinticas en fase lquida en formato de bola10,11 .
Representa un avance significativo sobre los mtodos
convencionales basados en la unin de los alrgenos a un
soporte slido, como los discos de papel.
Los alrgenos se unen covalentemente a una matriz
polmero/copolmero soluble, la cual a su vez est marcada con
un ligando. El uso de un copolmero aminoacdico aumenta la
cantidad de alrgeno que puede soportar la matriz.

FA
S
FUNDAMENTOUNICAPSYSTEM.doc
UniCAP IgE total es un anlisis cuantitativo in vitro para la medida
de IgE total en muestras humanas del suero o del plasma.
Anti-IgE, covalente unida a ImmunoCAP, reacciona con el IgE total
en el espcimen paciente.
Se los anticuerpos contra IgE marcados con una enzima se agregan
para formar un complejo.
Se agrega una solucin de desarrollo y una para parar la reaccin.
Despus de parar la reaccin, la fluorescencia se mide. La
fluorescencia es directamente proporcional con la concentracin de
IgE en la muestra..
E
E
4MUP
E
4MUP
Tecnologa ImmunoCAP
CAP System
ImmunoCAP

ImmunoCAP

Capacidad de ligando: tubo recubierto; disco papel; esponja celulosa


Tubo
recubierto
ImmunoCAP
Disco papel
activado
Esponja celulosa
activada
1
50
150

Fases slidas:

IgE del paciente

Alergenos (Anti-IgE acoplado al ImmunoCAP)


Anti-IgE paciente unido a enzima -Galactosidasa
Complejo: Alergeno-IgE paciente


Sustrato de la enzima -Galactosidasa
Complejo: Alergeno-IgE paciente-Anti-IgE

Reaccin enzimtica: -Galactosidasa

Sustrato no fluorescente Sustrato fluorescente
Deteccin
FEIA: Fluoroenzimoimmunoensayo
N. Liappis, A. Starke, Allergologie, Jahrgang 20; no 6/1997: 291-295
Reproducibilidad del Sistema ImmunoCAP
Patrn WHO 75/502 Tecnologa
ImmunoCAP

WHO
El primer test alergolgico del mundo con calibracin
directa segn patrones 2 IRP WHO 75/502 pera IgE.
Similitudes y diferencias entre la tecnologa Phadia ImmunoCAP

in vitro y la prueba cutnea in vivo
Caractersticas Tecnologa
Phadia ImmunoCAP

Prueba cutnea
in vivo
Alta sensibilidad S S
Alta especificidad S S /No
Alta reproducibilidad S No
Resultados cuantitativos S S /No
Calibrado segn la OMS S No
Programa con garanta de calidad S No
Prueba utilizable con independencia S No
del tratamiento farmacutico
Prueba utilizable con independencia S No
del estado cutneo del paciente
(es decir, dermatitis atpica)
Referencia: From In Vitro Veritas Broschyre
IG E Especifica

Tests de screening
Tests de screening
Tests de screening
Tests de screening
Tests de screening

1.-La identificacin precoz de los nios que padecern asma
persistente es de capital importancia
2.-La atopia es el principal factor de riesgo en el padecimiento de
asma

3.-Es posible reconocer la atopia, desde muy temprana edad,
identificando la sensibilizacin a alimentos y a inhalantes
4.-En nios con dermatitis atpica, la presencia de esta
sensibilizacin tiene un alto valor pronstico de evolucin futura
a asma
Conclusiones
1
Identificar y relacionar la clnica
del paciente con los posibles alrgenos:
HISTORIA CLNICA
Etapas diagnsticas
2
Demostracin de sensibilizacin mediada por IgE
para el o los alergenos sospechoso:
P CUTNEA, IgE SRICA ESPECFICA
3
Confirmacin de que el alrgeno es el responsable de
la clnica:
P de PROVOCACION o EXPOSICIN CONTROLADA
TEST DE ACTIBACION DE BASOFILOS
COMO SE Dx ALERGIAS
2PRUEBAS
CUTANEAS
Ig E Srica


1 HISTORIA
CLINICA




3PRUEBAS DE PROVOCACION
TEST DE ACTIVACION BASOFILOS

BASOFILOS

TAB



CITOMETRIA
DE FLUJO
CITOMETRIA DE FLUJO
Procedimiento que mide
caractersticas de
dispersin y fluorescencia
que poseen las clulas
conforme pasan por un
rayo de luz
Las clulas interaccionan
con un rayo de luz
causando dispersin
dependiendo del tamao
y la complejidad

CITOMETRIA DE FLUJO
DIGITALIZACION
REPRESENTACION
GRAFICA
ANALISIS
LABORATORIO DE CITOMETRIA DE FLUJO
Y BIOLOGIA MOLECULAR
IHEMATEC
Test de Activacion de
Basofilos (TAB)
Es una herramienta til en el
diagnstico in vitro de las
reacciones de hipersensibilidad
inmediata a los Alergenos,
Medicamentos, si estas son
causados por mecanismos
dependientes de IgE u otros
mecanismos que conduzcan a la
liberacin de histamina.
MARCADORES
CELULARES
CD63
CD203c
Es una protena granular
tetraespan de 53 Kda
Est anclada en los
grnulos de la membrana
de los basfilos
Por CM se detecta Anti
CD63 PE y anti IgE FITC


Es un Ag de superficie,
expresado en basfilos
humanos recientemente
reconocida por el Acm 97A6
Es una ectoenzima
multifuncional llamada
pirofosfatasa ectonucleotide
phophodiesterase 3 (E-
NPP3)

La poblacin celular de inters se marca con anticuerpos monoclonales en presencia del
alrgeno. Previamente al anlisis por citometra de flujo, los eritrocitos se someten a
lisis. A continuacin se excluyen los linfocitos T (clulas positivas CD3) y despus se
analizan los basfilos utilizando la expresin de CRTH2 y CD203c.
Los basfilos no activados y en reposo se identifican como CRTH2posCD203cdimCD3neg,
mientras que los basfilos activados in vitro se identifican como
CRTH2posCD203cbrightCD3neg.
FUNDAMENTO
muestra
HISTOGRAMA DE MUESTRA
SANGUINEA
MUESTRA CON METAMIZOL
1mg/2ml
CONTROL POSITIVO
CONTROL NEGATIVO
MODELO DE
RESULTADO DE TAB
TEST DE ACTIVACIN DE BASFILOS
USANDO CD203C VERSUS PRUEBAS
CUTANEAS EN LA DETERMINACION DE
REACCIONES ADVERSAS A METAMIZOL: UN
ESTUDIO PILOTO

Matos Edgar
1
, Loyola-Sosa Steev
1,2
, Paredes Jos
1
,
Inocente Rosario
1
, Paiva Mario
1
, Ros Hugo
1
, lvarez
Marco
1
1
Instituto de Hemafresis y Terapia Celular (IHEMATEC)
2
Universidad Peruana Cayetano Heredia

Mtodos y Materiales
Participaron 40 pacientes: 75.0% (30/40) con
historia clnica positiva.

Historia Clnica de RAM AINE
AINE no Metamizol Metamizol
Pruebas Cutneas
Test de Activacin de
Basfilos CD203c
Prick Test
Intradermorreaccin
Resultados
PRUEBAS CUTNEAS
Prick Test Intradermorreacin
TAB
CD203c
Positivo Negativo Positivo Negativo
Positivo 0 4 (FN) 1 3 (FN)
Negativo 0 36 0 36
TOTAL 0 40 1 39
% sensibilizacin por RAM a Metamizol (30/40) segn:
Prick Test: 0.0% (0/30)
Intradermorreacin: 3.3% (1/30)
TAB CD203c: 13.3% (4/30)
Resultados
PT vs. TAB-CD203c:
Sensibilidad: 0.0%
Especificidad: 100.00%
Valor Predictivo Negativo: 90.0%
IR vs. TAC-CD203c:
Sensibilidad: 25.0%
Especificidad: 100.00%
Valor Predictivo Negativo: 92.3%
Valor Predictivo Positivo: 100.0%
Conclusiones
Se tiene exitosamente una primera fase de
evaluacin de desempeo del TAB-CD203c.
TAB-CD203c presenta mejor performance
para determinar alergia a frmacos; tipo
Metamizol, frente a pruebas cutneas.
Es necesario realizar estudios que evalen
el costo-beneficio del uso del TAB-CD203c.
DISCUSION
La BAT constituye una herramienta diagnstica
valiosa de inters en el estudio de reacciones de
hipersensibilidad inmediata a los medicamentos.
Reproduce in vitro mecanismos de hipersensibilidad
involucrados en reacciones alrgicas inmediatas.
Tambin permite el diagnstico de reacciones
alrgicas y pseudoalrgicas, particularmente por
medicamentos que a menudo no son detectables por
tcnicas serolgicas como la determinacin de IgE
especfica.



DISCUSION
La reproducibilidad intra-ensayo es muy
notable en la alergia a medicamentos con
coeficiente de variacin intra-ensayo de 0.89
(P <0.0001) para beta-lactmicos, 0.99 (P
<0.0001) para metamizol y 0.92 (P <0.0001)
para determinados AINES

DISCUSION
Adems, varios medicamentos pueden ser
probados simultneamente, con una
pequea cantidad de sangre
La colaboracin internacional ser til para
facilitar un consenso sobre el uso de BAT en
la evaluacin de alergia inmediata a
medicamentos.

59
Mrida, 22 Noviembre 2012
AUTOINMUNIDAD
Diagnostico in vitro
60
ENFERMEDADES AUTOINMUNES
Primeros sntomas muy genricos
Sntomas clnicos similares
Mltiples rganos afectados
Diferentes facultativos implicados (mdicos de atencin primaria,
reumatlogos, medicina interna, gastroenterlogos, gineclogos,
etc.)

DIAGNSTICO DIFICIL
PRUEBAS DE LABORATORIO
ESPECFICAS Y FIABLES COMO AYUDA
61
AUTOANTICUERPOS
Pruebas de laboratorio: tcnicas de deteccin de
autoanticuerpos
- Tcnicas de Precipitacin:
* Inmunoprecipitacin
* Inmunodifusin
* Contrainmuno-electroforesis
- Tcnicas de Aglutinacin: Hemaglutinacin
- Inmunoensayos:
* Inmunoblotting
* Radioinmunoensayo (RIA)
* Inmunofluorescencia (IFI)
* Enzimoinmunoensayo (ELISA)
* Tecnologa multiplex

61
Reacciones antgeno-
anticuerpo
antgenos
autoanticuerpos
2 anticuerpos marcado
62
62
EQUIPOS
Phadia 100
Phadia 250
AUTOINMUNIDAD DE PHADIA
63
MARCAS
64
TECNOLOGA EliA
- Enzimoinmunoensayo por fluorescencia.
- Pocillos individualizados EliA wells

64
COLORIMETRA FLUORESCENCIA
65
TECNOLOGA EliA
Tecnologa EliA
- Antgenos recombinantes o purificados producidos bajo condiciones
controladas segn las normas GMP (Good Manufacturing practice) e
ISO.
- Sistema de baculovirus
- Diferentes analitos en el mismo ensayo
- Sistema de calibracin nico e independiente del analito

65
66
Analitos enfermedades autoinmunes
67
68
69