FORMULA:
Ng/µl de ADN = (D.O 260 nm)(Factor de dilución)
(50)
Factor de dilución = volumen total de la celda (1005)/
volumen de muestra (5 µl) = 201
50 = factor para ADN de doble cadena
35 = factor para ADN de cadena sencilla
1983
Historia de la PCR
•1983 Kary Mullis Inventa la PCR
•1985 Primera publicación científica
•1986 Cetus corparation y Perkin Elmer inician
desarrollo de reactivos e instrumentos para PCR
•1988 Se publica el uso de la Taq para PCR (Saiki et al)
•1990-1993 Batalla de las compañías por los derechos
de fabricación de reactivos.
•1993 Kary Mullis recibe el premio Nobel en Química.
Componentes de la PCR
PTC-100 Dyad
Tetrad Opticon
Tipos de PCR
- PCR
- PCR-RFLP
- PCR in situ
- RTPCR
- PCR en tiempo real
• Aseguran la inmunidad.
Histocom
(CMH)
Clase I y
Clase II
Sistema HLA
• Transmitidas de padres a hijos
Clase I A B C E F G H J K L Total
Clase II DRA DRB DQA1 DQB1 DPA1 DPB1 DMA DMB DOA DOB
Hijos
c ac bc
d ad bd
Apilado
del gel MPM
EXON 2 Marco
Corrimien de
to del gel plástic
o
Ánod
o
Revelado de los geles
• Pasos a seguir:
1.- Solución fijadora 10´
2.- Colorante AgNO3 5´
3.- Lavar de 2 a 3 veces con
H2O.
4.- Solución reveladora.
5.- Solución fijadora
Interpretación de resultados.
serología
2. Los resultados pueden guardarse indefinidamente
3. Se pueden identificar todos los componentes del
sistema HLA
4. más fiable en cuanto a la identificación de cada
individuo.
5. Más exacto ya que se eliminan reacciones cruzadas
6. Rapidez en los resultados.
Puntos críticos en la técnica de PCR
1. Riesgo de contaminación:
• ADN de la muestra
• Moléculas de ADN previamente amplificadas
1. Alto costo de los reactivos y equipo
2. Espacio físico específico
Secuenciación automática
Secuenciaciòn de ADN
Cromosoma 6
GRACIAS