JOS ROBERTO ALEGRA COTO

Depto. de Desarrollo Cientfico y Tecnolgico

ralegria@conacyt.gob.sv
Centro Escolar Doroteo Vasconcelos
Ayutuxtepeque, San Salvador.
.
BIOLOGA MOLECULAR:
Herramienta de la
Biotecnologa
Fac. de CCNN y Matemtica (UES)
PROGRAMA DE JVENES TALENTO
Objetivos
Historia de la Biologa
Molecular
La Biologa Molecular:
herramienta de la
Biotecnologa
Tecnologa del ADN
Ingeniera Gentica
Marcadores
Reflexin Final
CONTENIDO:
Estimular el inters de los jvenes hacia la
Biologa Molecular y sus aplicaciones en la
Biotecnologa.
.
Promover en los educandos el espritu
crtico hacia el potencial de la investigacin
biotecnolgica para el desarrollo de la
humanidad.
.
Presentar elementos de juicio que permitan
comprender la importancia de la
investigacin en biologa molecular.
OBJETIVOS:
AVANCES HISTRICOS DE
BIOLOGA MOLECULAR
1941 Genes codifican las protenas
1944 Prueba que el ADN porta la informacin gentica
1953 Determinacin de estructura del ADN y de la Insulina
1956 Enfermedad monognica sustitucin de un aa cadena -hemoglobina
1961 Cdigo Gentico, ARN mensajero, regulacin gnica
1967 Wise y Richardson aislaron ADN ligasa
1970 Smith y colegas aislaron y caracterizaron la Hind III
1972 Janet Mertz y Ron Davis cortaron y pegaron mol de ADN
1973 Stanley Cohen y H. Boyer pusieron ADNr en bacterias
1974 Demostracin directa de deleccin gnica humana
1975 Southern Blotting
1976 Proto-oncogenes
1977 Fred Sanger secuenci el virus de ADN X174
1978 Biblioteca gnica humana
1979 RFPL para diagnstico prenatal, oncogenes celulares
AVANCES HISTRICOS DE
BIOLOGA MOLECULAR
1979-81 genes humanos clonados y secuenciados
1982 Tabaco, la primera planta modificada genticamente
1983 Kary Mullis concibe el PCR / Fred Sanger y colegas
publican la secuencia del lambda
1985 Un gen de enfermedad aislado por clonacin posicional
1986 La secuenciacin del ADN es automatizada
1987 Inicia el Proyecto del Genoma Humano
1995 Es secuenciado la bacteria Haemophillus influenzae
1996 Es secuenciada la levadura Saccharomyces cerevisiae
1998 Es secuenciado el nemtodo Caenorhabditis elegans
1999 Es secuenciado el cromosoma 22 humano
2000 Es secuenciada la mosca de la fruta D. melanogaster /
26 de junio se presenta 90% borrador genoma humano
2001 Feb 2001 se completa el genoma humano.
genoma
Clula
cromosomas
genes
los genes
contienen
instrucciones
para hacer
protenas
ADN
protenas
las protenas actan
solas o en complejos
para realizar las
funciones celulares
ADN ADN

ARN

PROTENAS
BASES MOLECULARES
DE LA VIDA
Es el medio o va de
manipulacin de las formas
de vida (organismos) para
proveer un producto deseable
para el uso del hombre.
Areas cubiertas por el trmino Biotecnologa
incluyen: i) Biologa Molecular: ADN
recombinante, cultivo de clulas animales, cultivo
de tejidos vegetales, inmunologa, mejoramiento
animal y vegetal, ii) Fermentacin, iii) Sistema de
Enzimas y iv) Otras.
.
Marcadores
Ingeniera Gentica
Tecnologa
del ADN
Frmacos
Anti-cncer
Diagnsticos
Cultivo de
Clulas
Vegetales
Transferencia
de genes en
animales
Sntesis
de Sondas
de ADN
Localizacin
desrdenes
genticos
Clonacin
Solucin de
crimenes
Produccin de
Protenas humanas
Terapia
Gnica
Bancos de
ADN, ARN
Protenas
Mapas de
Genomas
completos
Biologa
Molecular
Sntesis de Nuevas
Protenas
Nuevos
Antibiticos
Nuevas
Plantas y
Animales
Nuevos
Alimentos
Recursos humanos
qumicos raros
BIOTECNOLOGA
Tecnologa del ADN (Diagnstico
Molecular) PCR - REACCIN EN
CADENA DE LA POLIMERASA
El PCR utiliza la capacidad de las
Enzimas polimerasas que catalizan la
formacin y reparacin de ADN (y ARN),
mediante un mecanismo que permite
iniciar y parar su actividad en un punto
especfico de una hebra de ADN, para lo cual se
emplean polimerasas obtenidas de
arqueobacterias como Termophillus aquaticus que
resisten temperaturas arriba de los 100C.
Kary B. Mullis, de Cetus Corporation que concibi
el mecanismo del PCR, en la dcada de los 80,s
recibi el Premio Nobel en 1993.
Tecnologa del ADN
FINGERPRINTING
El ADN tiene muchas
regiones que son muy
variables en su estructura
(RFLPs) y pueden ser usadas
para ADN fingerprintings. El
ADN puede ser obtenido de
sangre, fluidos corporales y
otros tejidos incluyendo
hueso, y es relativamente
estable, frecuentemente
sobre muchos aos. Se
requieren cantidades muy
pequeas y las muestras
pueden ser obtenidas de
manera no invasiva.
MADRE PADRE NIO 1 NIO 2 NIO 3 NIO 4
Tecnologa del ADN (identificacin de paternidad)
Campo convergente de la biologa,
computacin e informacin
tecnolgica en una misma
disciplina.
La meta ltima de este campo es
posibilitar el descubrimiento de
nuevas ideas biolgicas, as como
crear una perspectiva global de la que
puedan ser discernidos principios
unificadores de la biologa
(www.ncbi.nlm.nih.gov/Education/index.html).
Tecnologa del ADN
BIOINFORMTICA
Es el estudio del
genoma y su accin.
El genoma es la suma total del material
gentico presente en un organismo
particular e incluye el ADN presente en los
cromosomas y en los organelos
subcelulares (ej., mitocondrias) e incluye
el genoma de ARN de algunos virus.
El anuncio el 26 de junio de 2000, del borrador
del genoma humano en un 90%, marc un hito
histrico para la humanidad.
Tecnologa del ADN
GENMICA
Humanos
30,000
genes
GENOMAS
Chimpanc
30,000
genes
A. thaliana
25,000
genes
Ratn
30,000
genes
C. elegans
19,000
genes
D. melanogaster
13,000
genes
95% idntico
70%
20%
60%
De 289 genes
humanos
implicados en
enfermedades,
hay 177
cercanamente
similares a los
genes de
Drosophila.
Entre una persona y otra el ADN solo difiere en 0.2%
El genoma de un organismo es el juego completo de ADN.
La planificacin del Proyecto Genoma Humano se inici en
1986, previsto para el 2007. En Junio de 2000 se present el 90% del borrador con la
secuenciacin de unos 30,000 genes y 3 mil millones de pares de bases (pb). Los
genes son secuencias especficas de bases que codifican instrucciones para hacer
protenas. Los genes son un 2% del genoma humano.
IDENTIDAD GENTICA
Tecnologa del ADN
GENMICA FUTURA
14th International Genome
Secuencing and Analysis
Conference (oct. 2002), la
US Genomics Inc., present
un aparato que lee la doble hlice de ADN sin
cortarlo. Abre la doble hlice espiral de ADN, la
lineariza y la pasa por un escaner para leerla en
un lector fijo (como una plicula de carrete pasa
por un proyector), las molculas se mueven a 30 M
de bases por minuto. En 40 minutos se pueden
Leer 3 mil M de bases. Si el sistema se logra
pasar a un biochip el tiempo bajar a menos de
cinco minutos por la habilidad de capturar un
Terabyte (1024 o 1000 gigabites, un gigabite =
1024 o 1000 Megabites) de informacin cada pocos
segundos.(Uehling, M. D, Bio-It World Nov. 12 2002).
La Protemica es la caracterizacin sistemtica a
gran escala de las protenas presentes en una
clula, tejido u organismo. Es una disciplina en
su infancia limitada por la tecnologa disponible
para quienes la practican. Este es un diferente
paradigma del reduccionismo convencional de la
investigacin cientfica que tpicamente se enfoca
en un simple gen o una protena; en tanto, que la
investigacin del Proteoma (conjunto de todas las
protenas que intervienen en los procesos
biolgicos de una especie) aborda problemas
tales como el nivel de protenas o actividades que
cambian entre dos condiciones experimentales
(Spelcher, 2002. The Scientist 16(8): 12, Apr. 15).
Tecnologa del ADN
PROTEMICA
Est ocurriendo la transicin de dcadas de
biologa reduccionista, enfocadas a un gen o a una
protena, por utilizacin de las nuevas disciplinas
omicas que incluyen: Transcriptmica
(espectro de molculas de ARN en cada clula
tipo), Metabolmica (todos los qumicos en la
clula), Fisimica (funcin de rganos, tejidos y
ultimadamente el organismo completo).
Crtico para el xito de esta revolucin es la
bioinformtica y nuevas estrategias de
computacin, para modelar las propiedades de
clulas, rganos y estados de enfermedad,
produciendo rganos y pacientes virtuales
(Goldman, M., Bio-It World Nov.24 2002).
Tecnologa del ADN
DISCIPLINAS MICAS
La Ingeniera Gentica o tecnologa del
ADNr se inici en la dcada de los 70s.
Se refiere a un grupo de tecnologas
usadas para cambiar la composicin
gentica de las clulas y mover genes a
travs de las fronteras de las especies
para producir nuevos organismos.
Se pueden aislar genes, modificarlos,
introducirlos a nuevos hospederos, y
clonarlos para obtener una ventaja
novedosa sobre el organismo natural.
INGENIERA GENTICA O ADNr
ESTRUCTURA DE UN GEN
Promotores
Exones
Sitio de inicio de
la Transcripcin
Sitio de terminacin
de la Transcripcin
Realzadores
< 100 Kb
Los promotores pueden ser genricos o tejido especfico
La funcin del gen depende de los FACTORES de TRANSCRIPCIN (FT) que activan a las
ARN pol. Los FT son: los Factores de Transcripcin General (se unen a secuencias promotoras
genricas) y los Activadores de Transcripcin (se unen a secuencias promotoras especficas).
Los FT pueden encenderse o apagarse en respuesta a estmulos del entorno del individuo.
Entre los promotores de los genes que desarrollan la capacidad cerebral o talento de los
individuos estn la alimentacin, la salud, el estmulo temprano con experiencias motivadoras
(el juego), el amor.
Intrones
1. Agrobacterium. Uso de la bacteria
Como "Ingeniero Gentico". La bacteria
conteniendo el inserto, infecta las clulas
de la planta produciendo la recombinacin gentica.
2. Acelerador de Partculas (Gene Gun). Un can
artificial bombardea micropartculas con el inserto,
sobre la clula.
3. Electroporacin. Uso de carga elctrica para que
el ADN atraviese la membrana nuclear.
4. Polietilenglicol. Exposicin de las membranas al
PEG, facilita el movimiento de las molculas de ADN.
5. Silicon Wiskers. Inyeccin con fibras microscpi-
cas, que atraviesan las membranas con los insertos.
Ingeniera Gentica SISTEMAS
DE TRANSFERENCIA GENTICA
Enzimas producidas por Biotecnologa
mediante el ADN recombinante se usan
como aditivos en dietas de aves,
para digerir carbohidratos complejos como las
beta-glucanasas, alfa-amilasas, maltasas, oligo
1-6 glucosidasas, xilanasas, sacarasas; lipasas;
proteasas y fitasas (para la utilizacin del fsforo).
En Mxico, tienen un gran impacto en la produccin
avcola proporcionando 3/5 de carne de aves para el
consumo de protena animal. Se considera que el
mercado mundial de enzimas como aditivos en los
alimentos crecer del valor actual de US $ 60 millones
al doble para el 2005.
(Avila G., E. Huatulco 2001).
Ingeniera Gentica
NUEVAS PROTENAS
ARROZ con altos niveles de tolerancia a
diferentes condiciones ambientales de estrs.
Se insertaron dos genes fusionados de trehalosa
de E. Coli y un promotor tejido especfico
dependiente del estrs. Los genes de trehalosa
permiten la produccin de arroz an si est
estresado por frio, sequa o altos niveles de
salinidad e incrementa la produccin en 20%. La
composicin qumica de los granos no cambia.
El azcar trehalosa ayuda a estabilizar
molculas biolgicas: lpidos, enzimas y otras
protenas, en organismos en condiciones de
estrs (PNAS Online, 27 nov. 2002).
Ingeniera Gentica NUEVAS PLANTAS
1987 secrecin de Beta-lactoglobulina
en leche de ratn.
Produccin de protena C humana en
leche de cerdos, para desrdenes
como hemofilia.
Hormonas de crecimiento humano en
tejido seminal de cerdo.
Antitrombina humana III, anti-
coagulante sanguneo secretada en
leche de cabras transgnicas.
Cabras transgnicas para producir
BioSteel fibra hecha por el hombre
con propiedades de tela de araa.
Ingeniera Gentica
NUEVOS ANIMALES
ARROZ DORADO con beta
caroteno de genes de narciso
y de Erwinia uredovora,
pigmentos que se transforman
en pro-vitamina A al ser ingeridos. Hay 70
patentes implicadas en la consecucin del
arroz dorado; acuerdo con la industria reducen a 12
las patentes esenciales y se limita su cultivo gratuito a
las explotaciones agrcolas que no superen los 10.000
dlares de beneficios anuales (Gebelli, 2001).
ARROZ fortificado con un gen de la ferritina del
frijol de soya. ARROZ con aa esenciales.
Ingeniera Gentica
NUEVOS ALIMENTOS
Salmn transgnico por
hormona de crecimiento. Producido por AF Protein Inc.
Cuenta con el promotor de la protena de anticongelamiento
de otra especie de pez. Crece de 4 a 6 veces ms rpido que
un salmn no transgnico. Tiene un 20% en mejoramiento de
la eficiencia de conversin del alimento.
Cerdo transgnico para el precursor de la hormona de
crecimiento proteasa resistente (GHRH). Por tcnicas de
mutagnesis sitio dirigida y terapia electrognica, se introdujo
en msculo de cerdo. Los efectos de una inyeccin de 10 mg
de dosis del plsmido, en cerdos de tres semanas de edad, se
mantuvo sobre 60 das con un 42% mayor que los controles a
los 62 das (42 kg contra 29 kg). (ISB, 2000 mar).
Ingeniera Gentica
NUEVOS ALIMENTOS
(ISB, 2001, oct; Netlink, 2000).
PAPA con la vacuna que previene la
insulina dependencia de la diabetes
mellitus 100 veces ms poderosa que la
actual vacuna. PAPA con la sub-unidad B
antignica de la enterotoxina del Vibrio
cholerae causante del clera). FRIJOL de
SOYA con anticuerpos que protegen
contra el virus 2 de Herpes simplex
(HSV). TABACO con anticuerpos que
previenen la caries dental producida por
Streptococcus mutans.
Ingeniera Gentica
NUEVOS ANTIBITICOS
Ingeniera Gentica
CLONACION
Trmino genrico para la
replicacin en un laboratorio
de genes, clulas u organismos
de una entidad original, con
copias genticas exactas del
gen, clula u organismo
original. Esta tcnica ha
producido avances
sensacionales en medicinas y
vacunas. Tambin hay
investigacin en clonacin de
clulas humanas, rganos y
otros tejidos. Esto puede
producir el reemplazo de piel,
cartilagos y hueso para
victimas de quemaduras y
accidentes, o de rganos.
CELULAS MADRE
BLASTOCISTO
Clulas NERVIOSAS
Clulas PANCREATICAS Clulas CARDIACAS
Clulas
Formadoras de
SANGRE
MASA DE CELULAS INTERNAS
Clulas MADRE para transplantes de Organos
DA 4
Cavidad
Masa de clulas
internas
(clulas Madre
Embrionarias) Masa de clulas
internas
clulas
de
cubierta
interna
Modificado de: Scientific American, 2001
Ingeniera Gentica
TERAPIA DE CLULAS MADRE
Ingeniera Gentica
TERAPIA GNICA
Rafael Valdes del Hospital de Nios de Mxico
Implant clulas de cerdo en 12 adolescentes
en procura de curar su diabetes.
En su mtodo, us clulas especializadas para proteger el transplante de
los sistemas inmunolgicos de los pacientes hospederos, que nunca
haba sido ensayado en humanos. Los implantes en los pacientes constan
de clulas pancreticas de cerdo, las cuales producen insulina
(hay 150 millones de diabticos en el mundo) . Para prevenir el rechazo
del transplante implant clulas de Sertoli (de testculo de cerdo) que han
mostrado que protegen a los tejidos transplantados del sistema inmune
recipiente en algunos modelos animales. Uno de los pacientes ha dejado
de inyectarse insulina y cinco otros estn tomando menos insulina que
antes. Los resultados han llegado sin usar medicamentos Inmuno-
supresores, los cuales tienen que ser dados por el resto de sus vidas a
recipientes de transplantes (Nature/Vol. 419/5 sept. 2002).
Marcadores SONDAS DE ADN
COMPAA
PRODUCTO GENES CARACTERSTICAS
Affimetrix GeneChip Human Genoma + 12000
GeneChip Human Cancer + 1700 Seleccin de investigadores
GeneChip Custom Arrays + 12000 Arreglos diseados por clientes
MBG Biotech Pan Human array 30000 Genes humanos en 3 slides
Clontech Atlas Human 1.0 1081
Atlas Human Apoptosis array 205
Atlas Human Cardiovas array 588
Atlas Human Neurobiol array 588
Atlas Human Oncogene array 588
El microarreglo de ADN pone secuencias de genes en una lmina. Los ARNm de una
clula particular con tags fluorescentes, se hibridizan, a las secuencias
cuando son complementarias. Un escner mide la fluorescencia de cada muestra
sobre la lmina, para determinar la presencia o actividad de los genes.
Marcadores
LOCALIZACIN DESORDENES GENTICOS
GEN

DROGA

CONSECUENCIAS CLNICAS
NAT-2 Isoniazida, hidralazina,
procainamida, sulfonamidas
Neuropata, lupus eritomatoso
CYP2D6 bloqueadores antidepresivos,
codena, debrisoquina,
antisicticos, muchos otros
Arritmias, disquinecia con antisicticos,
efectos narcticos, cambios en eficacia,
muchos otros
CYP2C9 Tolbutamida, feniltoina, anti
inflamatorios no esteroideos
Efectos anticoagulantes
modificados de warfarin
RYR-1 Halotano y otros anestsicos Hipertermia maligna
G6PD Primaquina, sulfonamidas,
acetanilida, otros
Anemia hemoltica
ACE Captopril, enalapril Modif. respuesta a tratamiento de falla
cardaca, hipertensin, enfermedad renal
HERG Quinadina Arritmia cardaca (sndrome QT
largo)
HKCNE2 Claritromicina Arritmia inducida por droga
Shumin Nie y sus colegas desarrollaron un
cristal superconductor a escala nanomtrica llamado
punto cuntico (diez nanmetros es un dimetro 1000
veces menor que el grosor de un cabello humano). Las
nanopartculas que usa pueden brillar en un espectro de
seis colores visibles y cuatro infrarrojos. Variando su
tamao ligeramente, se puede hacer que brillen en uno de
los 10 colores disponibles. En un futuro prximo, podrn
ser enlazadas a frmacos mdicos o agentes teraputicos
para identificar y tratar clulas cancerosas. Una vez
detectadas estas ltimas, podran actuar como "bombas
inteligentes", liberando una cantidad controlada de
medicamento que sea apropiado para cada tipo particular
de clula (Bowie, L. Georgia Institute Technology, oct. 23 2002).
Marcadores
FUTURO NANOTECNOLGICO
El que investiga genera nuevos
CONOCIMIENTOS, que pone a
disposicin de otros como
DATOS, que al ordenarse son
INFORMACIN, que puede
llegar a ser CONOCIMIENTO til,
apropiado o adaptado, por la
infraestructura de investigacin
de C&T que posea un pas.
REFLEXIONES
La incidencia positiva que las actividades de I+D tienen sobre el
desarrollo de los pases ha conducido a los gobiernos de los
diferentes estados a destinar una parte de sus recursos financieros a
potenciar ambas actividades. De esta manera ha sido posible
diversificar las lneas de investigacin con la finalidad de abarcar
cada vez ms campos y, al mismo tiempo, asegurar la formacin de
personal cualificado.

CHINA, actualmente a la vanguardia en el desarrollo
cientfico y tecnolgico mundial, fundament en 1980 su
productividad y competitividad, mediante Polticas de Ciencia y
Tecnologa, que form miles de Ph.D. en todas las disciplinas de la
C&T, en las ms prestigiosas Universidades del mundo.

CHILE, pas al que imitamos constantemente, ejecuta la
estrategia de las tres (C) COPIAR, COMPRAR,
CREAR, para lo cual cuenta con recurso humano calificado.
REFLEXIONES
Es de urgencia para el pas
apostarle a una Poltica de
Nacin de Ciencia y de
Tecnologa, que identifique
los nichos de conocimiento
a ocupar, y promueva la adquisicin
de infraestructura necesaria y la
formacin de recursos humanos con
capacidad de investigar, desarrollar
y aprovechar tecnologas que
ayuden a mejorar la calidad de vida
de los salvadoreos.
REFLEXIONES
MUCHAS GRACIAS
POR SU ATENCION
BIENVENIDAS SUS
PARTICIPACIONES
Atentamente:
ROBERTO ALEGRIA
ralegria@conacyt.gob.sv
www.conacyt.gob.sv
llamado punto cuntico