PROF CAROLI NA ZI NN

Mtodos diagnsticos em
parasitologia
Exame parasitolgico de fezes (EPF)
Grande importncia para o diagnstico de parasitoses
intestinais, causadas por helmintos e protozorios
EPF no o nome de uma tcnica, e sim do pedido para a
realizao de um exame de fezes em busca de parasitos
Grande desafio do diagnstico na parasitologia a baixa
sensibilidade das tcnicas quando no realizadas
corretamente
Falta de conhecimento sobre a coleta da amostra, os
fundamentos de conservao e da execuo do mtodo,
levam frequentemente a resultados falso-negativos!!!
Exame parasitolgico de fezes (EPF)
Outro erro indicao de anti-helmnticos sem
solicitar EPF para verificar a real necessidade
O profissional responsvel por escolher a tcnica
deve ter claramente delimitado o objetivo do exame
Pacientes assintomticos tcnica capaz de detectar
o maior nmero possvel de espcies
Existem tcnicas preferenciais para a busca de
determinadas estruturas
fundamental que o mdico indique a suspeita
clnica e, se possvel, a tcnica desejada



Exame parasitolgico de fezes (EPF)
Tem como objetivo diagnosticar os parasitos
intestinais, por meio da pesquisa das diferentes
formas parasitrias que so eliminadas nas fezes.
O exame macroscpico permite a verificao da
consistncia das fezes, do odor, da presena de
elementos anormais, como muco ou sangue, e de
vermes adultos ou partes deles.
O exame microscpico permite a visualizao dos
ovos ou larvas de helmintos, cistos, trofozotos ou
oocistos de protozorios. Pode ser quantitativo ou
qualitativo.
Exame parasitolgico de fezes (EPF)
A grande maioria dos mtodos apenas QUALITATIVO
= apenas indica a presena do parasita ou no
Existem mtodos QUANTITATIVOS (Kato-Katz) = se faz
a contagem dos ovos nas fezes, permitindo, assim, avaliar
a intensidade do parasitismo.

Mtodos QUALI rotina
Mtodos QUANTI pouco utilizados, pois a dose dos
medicamentos antiparasitria no leva em conta a carga
parasitria e sim o peso corporal do paciente. Estudos
epidemiolgicos e/ou controle de cura
Coleta da amostra

Deve ser colhida sem contato com o vaso sanitrio

Utilizar recipientes limpos, isentos de gua (pode conter
microorganismos de vida livre), urina (destri a mobilidade e
os trofozoitas) ou outro material que possa contaminar
pinico

Jornais e outros tipos de papis tambm devem ser evitados a
fim de no contaminar

Transferir a amostra para o frasco coletor cedido pelo
laboratrio
Coleta da amostra
Identificar o frasco com letra legvel, indicando nome
do paciente, data e hora da coleta lpis (no
borrar com o conservante)
Tempo de entrega do material depende da suspeita
clnica
Fezes diarreicas Giardia 30 min estrongiloidase com
exame de larvas vivas imediatamente aps a emisso das fezes
De preferncia coleta pela manh no laboratrio
ou enviada rapidamente
Caso no seja possvel enviar imediatamente o
material ser necessrio conservar o material
Conservantes
MIF (mercrio, iodo e formol) mais
popular
Formol 10% - proibio do mercrio
Formol tamponado
SAF (acetado de sdio, cido actico
glacial, formol e gua destilada)
bom para trofozotos em fezes
diarreicas
Embrulhar em papel e armazenar na
geladeira (5-10C) ou isopor com gelo
at 48hs

Semanas
Conservantes
Colocar o conservante, a amostra, homogeneizar
bem e colocar mais conservante

Quando so feitas vrias coletas em dias alternados,
elas podem ser misturadas no mesmo recipiente
Cuidados fundamentais
Usar luvas
Trabalhar com calma, identificando corretamente
Usar material descartvel evita falso-positivos
Escolha do mtodo
No existe um mtodo capaz de diagnosticar, ao mesmo tempo, todas as
formas parasitrias.

Alguns mtodos so mais gerais, permitindo o diagnstico de vrios
parasitos intestinais, outros so mtodos especficos, indicados para um
parasito em especial.

Mtodos gerais mtodo de Hoffman, Pons e Janer e o os mtodos de
centrifugao (MIFC, Ritchie e Coprotest).

Na maioria dos pedidos de EPF, a suspeita clnica no relatada, e o exame
feito por um dos mtodos gerais, acima citados.

Quando solicitada a pesquisa de um parasito que exige a execuo de um
mtodo especfico mtodo especfico e mtodo geral devem ser
executados o EPF ficar mais completo, pois ser feita a pesquisa dos
vrios parasitos intestinais e no apenas daquele solicitado.
Escolha do mtodo
Execuo de vrios mtodos com cada amostra fecal
um mtodo geral
um especfico para larvas de helmintos
um especfico para cistos de protozorios.
Procedimento invivel - quantidade insuficiente de
fezes, ou pelo elevado nmero de exames a serem
realizados por dia
Interao mdico-laboratrio contribuiria para que o
EPF fosse o mais exato possvel.
Automao ainda no uma realidade na parasitologia
Testes imunolgicos
Testes moleculares
Escolha do mtodo
Imunoenzimticos - EIA ou ELISA
Entamoeba histolytica/ dispar
Giardia lamblia
Cryptosporidium
Imunofluorescentes-IFAs
Cyclospora
Isospora
PCR
deteco e subtipagem
Cryptosporidium
Escolha do mtodo
A fim de obter mais qualidade no EFP, devemos
sempre ter em mente que
1. algumas espcies de parasitos s so evidenciadas
por tcnicas especiais;
2. um exame isolado, onde o resultado negativo,
no deve ser conclusivo, sendo recomendvel a sua
repetio com outra amostra;
3. a produo de cistos, ovos ou larvas no
uniforme ao longo do dia ou do ciclo do parasito.

Mtodos
Exame de fezes direto a fresco
Tcnicas de concentrao - Muitas vezes o nmero de formas
parasitrias eliminadas com as fezes pequeno, havendo
necessidade de recorrer a processos de enriquecimento para
concentr-las.
Espontnea ou por centrifugao
Flutuao ou sedimentao
Tcnicas para buscas de larvas

Existem diversas tcnicas semelhantes, baseadas no mesmo
fundamento, com nome diferente
Um mtodo ser mais ou menos utilizado na rotina do EPF,
quando, alm de permitir o diagnstico de vrios
parasitos intestinais, tambm de fcil execuo e
pouco dispendioso.
Helmintos - Formas evolutivas eliminadas via anal
OVOS
Ascaris lumbricoides
Trichuris trichiura
Enterobius vermicularis
Ancylostoma duodenale
Necator americanus
Taenia solium
Taenia saginata
Hymenolepis nana
Schistosoma mansoni

LARVAS
Strongyloides stercoralis

VERMES ADULTOS
Ascaris lumbricoides
Taenia sp. (proglotes)
Enterobius vermicularis

Protozorios - Formas evolutivas eliminadas via anal
CISTOS/TROFOZOTOS
Giardia lamblia
Entamoeba histolytica/E. dispar
Entamoeba coli
Endolimax nana
Iodamoeba btschlii
Chilomastix mesnili
Blastocystis hominis (apenas cisto)
Mtodo direto
Procedimento simples

Permite visualizar trofozotos vivos

Obtida diretamente da amostra fecal, sem
conservante, pouco material (falso-negativo)

Mtodos de concentrao so melhores mais
amostra, maior sensibilidade



Mtodo direto
Recolhe-se uma poro bem pequena (cabea do
palito de fsforo) e coloca-se sobre a lmina
Adiciona-se salina
Homogeiniza
Coloca lamnula
Anlise em microscpio em 10 e 40X

Processos de concentrao
Sedimentao espontnea: mtodo de Hoffman, Pons e Janer, tambm
conhecido como mtodo de Lutz. Permite o encontro de ovos e larvas de
helmintos e de cistos de protozorios;

Sedimentao por centrifugao: mtodo de Blagg (tambm conhecido por
mtodo de MIFC), mtodo de Ritchie, Coprotest. Usados para a pesquisa de
ovos e larvas de helmintos, cistos e alguns oocistos de protozorios;

Flutuao espontnea: mtodo de Willis. Indicado para a pesquisa de ovos
leves (principalmente ancilostomdeos);

Centrfugo-flutuao: o teste de Faust. Usado para a pesquisa de cistos e
alguns oocistos de protozorios, permitindo, tambm, o encontro de
ovos leves.

Concentrao de larvas de helmintos por migrao ativa, devido ao
hidrotropismo e termotropismo positivos: mtodo de Baermann-Moraes
e mtodo de Rugai. Indicados para a pesquisa de larvas de Strongyloides
stercoralis.
Sedimentao espontnea, Mtodo de Lutz ou de Hoffman,
Pons e Janer (HPJ)
Mtodo de concentrao
Cistos, oocistos, ovos ou larvas
Procedimento:
Colocar aproximadamente 2g de fezes em um frasco de Borrel (pode
ser substitudo por copo plstico descartvel), com cerca de 5mL de
gua, e triturar bem com basto de vidro (ou "palito de picol").
Acrescentar mais 20mL de gua.
Filtrar a suspenso para um clice cnico de 200 mL de capacidade,
por intermdio de tela metlica ou de nilon com cerca de 80 a 100
malhas por cm2, ou gaze cirrgica dobrada em quatro; os detritos
retidos so lavados com mais 20mL de gua, agitando-se
constantemente com o basto de vidro, devendo o lquido da lavagem
ser recolhido no mesmo clice.
Completar o volume do clice com gua.
Sedimentao espontnea, Mtodo de Lutz ou de Hoffman,
Pons e Janer (HPJ)
Deixar essa suspenso em repouso durante 2 a 24 horas

Sedimentao espontnea, Mtodo de Lutz ou de Hoffman,
Pons e Janer (HPJ)
Existem duas tcnicas para se colher o sedimento para
exame:
a. introduzir uma pipeta obliterada pelo dedo indicador at o
sedimento contido no fundo do clice, retirar o dedo e deixar subir
uma pequena poro do sedimento; recolocar o dedo e retirar a
pipeta;
b. desprezar o liquido sobrenadante cuidadosamente, homogeneizar
o sedimento e colher uma gota do mesmo (esse procedimento
melhor, pois a gota colhida mais representativa do sedimento).
Colocar parte do sedimento numa lmina com uma gota
de lugol e fazer um esfregao.
O uso de lamnulas facultativo. Examinar com as
objetivas de 10x e 40x. Deve-se examinar, no mnimo,
duas lminas de cada amostra.
Sedimentao espontnea, Mtodo de Lutz ou de Hoffman,
Pons e Janer (HPJ)
Mtodo mais utilizado
Barato
Sensvel para cistos de protozorios, ovos e larvas de
helmintos
Desvantagem: demorado
Coprotest formol 10% - facilita o procedimento
paciente coleta j com o conservante e homogeiniza por 2
minutos o laboratorista somente continua o
procedimento anterior
Paratest formol 5% com sistema de filtragem
eficincia reduzida devido a quantidade pequena de
amostra
Centrfugo-sedimentao, Mtodo de Ritchie, de Blagg ou
formol-ter
Baseia-se na sedimentao forada pela centrifugao
Ovos e larvas de helmintos, cistos e alguns oocistos de
protozorios
Procedimento:
Colher as fezes recm-emitidas em liquido conservador de MIF.
Homogeneizar bem.
Filtrar a suspenso de fezes em gaze dobrada em quatro ou em filtro
descartvel, num copo plstico descartvel.
Transferir 1 a 2mL do filtrado para um tubo cnico de centrifugao,
com capacidade para 15mL
Acrescentar 4 a 5mL de ter sulfrico e agitar vigorosamente
(importante para desengordurar o material).
Centrifugar por um minuto a 1.500rpm.
Se formaro 4 camadas no fundo est o sedimento com os
parasitos
Com o auxlio de um basto, descolar a camada de detritos da
parede do tubo.
Inverter o tubo para desprezar o liquido, mantendo-o com a
boca voltada para baixo, at limpar a parede do mesmo,
utilizando um basto de vidro (ou palito de picol) contendo
algodo na extremidade.
Inverter o tubo em uma lmina, deixando escoar todo o
sedimento. Se a quantidade de sedimento for excessiva,
utilizar uma pipeta para colh-lo e preparar as lminas.
Colocar uma gota de lugol
Cobrir com lamnula e examinar com as objetivas de 10 e 40X
em zig-zag
Centrfugo-sedimentao, Mtodo de Ritchie, de Blagg ou
formol-ter
Mtodo dos mais recomendados
Rpido
Fcil
Sensvel
Desvantagem: necessita de centrfuga
Centrfugo-sedimentao, Mtodo de Ritchie, de Blagg ou
formol-ter
Centrfugo-flutuao ou Mtodo de Faust
Indicado para pesquisa de cistos de protozorios; ovos leves
de helmintos podem ser detectados algumas vezes
Procedimento
Diluir 10g de fezes em 20mL de gua filtrada.
Homogeneizar bem.
Filtrar atravs de gaze dobrada em quatro, num copo plstico, e
transferir para um tubo de centrfuga.
Centrifugar por um minuto a 2.500rpm.
Desprezar o lquido sobrenadante e ressuspender o sedimento em
gua.
Repetir as operaes 4 e 5 mais duas ou trs vezes, at que o lquido
sobrenadante fique claro.
Desprezar a gua sobrenadante e ressuspender o sedimento com
uma soluo de sulfato de zinco a 33%, densidade de 1,18g/mL.
Centrifugar novamente por um minuto a 2.500rpm.
Os cistos e alguns oocistos de protozorios e os ovos leves, presentes
na amostra fecal, estaro na pelcula superficial. Recolher a pelcula
com ala de platina, colocar numa lmina, acrescentar uma gota de
lugol e cobrir com lamnula.
Examinar com as objetivas de 10x e 40 x.

Observao: O material deve ser examinado
imediatamente, pois o contato com a soluo de
sulfato de zinco pode deformar as formas
parasitrias, especialmente os cistos de protozorios.
Centrfugo-flutuao ou Mtodo de Faust
Flutuao espontnea ou Mtodo de Willis
Bom para pesquisa de ovos leves como de
ancilostomdeos
Procedimento:
Colocar 10g de fezes em um frasco Borrel (pode ser usado o prprio
frasco no qual as fezes foram enviadas).
Diluir as mesmas em soluo saturada de acar ou sal (NaCl).
Completar o volume at a borda do frasco.
Colocar na boca do frasco uma lmina, que dever estar em contato
com o lquido.
Deixar em repouso por cinco minutos.
Findo esse tempo, retirar rapidamente a lmina, voltando a parte
molhada para cima.
Levar ao microscpio e examinar com objetiva de 1ox e 40x.
Mtodo para demonstrao de larvas de helminto
Avaliao de larvas de helmintos
Baseado no hidrotropismo e termotropismo das
larvas
Necessidade de fezes frescas e sem uso de
conservantes
Importante redobrar os cuidados a fim de evitar
contaminao no laboratrio.
Necessrio ter preparado o aparelho de Baermann suporte de
madeira com orifcios para os funis que sero utilizados
Procedimento
Utilizar 8 a 10g de fezes.
Colocar numa gaze dobrada em quatro ou em uma peneira.
Colocar o material assim preparado sobre um funil de vidro, contendo um tubo
de borracha conectado a extremidade inferior de sua haste.
Obliterar o tubo de borracha com uma pina de Hoffhan e adicionar, ao funil,
gua aquecida (45C) em quantidade suficiente para entrar em contato com as
fezes.
Deixar uma hora em repouso.
Findo esse tempo, colher 5 a 7mL da gua, em um tubo de centrfuga, abrindo-
se a pina.
Centrifugar a 1.000rpm por um minuto.
Colher o sedimento, sem desprezar o liquido sobrenadante e examinar
ao microscpio (10x). Caso se detecte a presena de larvas, essas devero ser
coradas com lugol e observadas com a objetiva de 40x, para identificao
Mtodo de Baermann-Moraes
Mtodo de Baermann-Moraes

Mtodo de Rugai
Retirar a tampa do recipiente que acondiciona as fezes e
envolv-lo em uma gaze dobrada em quatro, fazendo uma
pequena "trouxa".
Colocar o material assim preparado, com a abertura voltada
para baixo, num clice de sedimentao, contendo gua
aquecida (45C), em quantidade suficiente para entrar em
contato com as fezes.
Deixar uma hora em repouso.
Retirar cuidadosamente a trouxa
Colher o sedimento no fundo do clice, com a ajuda de uma
pipeta.
Examinar no microscpio, com a objetiva de 10x.
Corar as larvas com o lugol e observ-las com o maior
aumento, para identificao.
Mtodo de Rugai

Mtodo quantitativo Kato-Katz
Preparar uma soluo de verde malaquita (essa soluo tem a
finalidade de conservar as fezes e clarificar as formas parasitrias),
de acordo com a seguinte frmula: Glicerina 100mL, gua destilada
100mL, Verde-malaquita a 3% 1 mL
Cortar papel celofane semipermevel em pedaos de 24mm por
30mm e deix-los mergulhados na soluo de verde malaquita por
pelo menos 24 horas.
Colocar, sobre um papel higinico, uma poro da amostra de fezes
frescas sem conservantes.
Comprimir as fezes com um pedao de tela meilica (marca IBRAS -
So Bemardo do Campo - no 120 fios, urdume e trama: 0,091nm)
ou similar de nilon. Nesta malha passam ovos de helmintos e
detritos menores do que eles.
Retirar as fezes que passaram para a parte superior da tela e
transferi-las, com o auxlio de um palito, para o orificio (6mm de
dimetro) de um carto retangular de plstico, colocado sobre uma
lmina de microscopia.
Mtodo quantitativo Kato-Katz
Aps encher completamente o orificio, retirar o carto,
cuidadosamente, deixando sobre a lmina de vidro.
Cobrir as fezes com a lamnula de papel celofane
embebida na soluo de verde malaquita, inverter a
lmina, sobre uma folha de papel absorvente e
comprimi-la.
Aguardar uma a duas horas e examinar ao microscpio,
contando todos os ovos presentes na preparao.
O nmero de ovos encontrados no esfregao fecal,
multiplicado por 23, corresponder ao nmero de ovos
por grama de fezes (OPG).

Situao atual do diagnstico parasitolgico
Mdico s vezes pouco capacitado na indicao do
exame, na orientao coleta de material e na
interpretao dos resultados. Pouca confiana no
resultado do laboratrio. Tratamento prvio.
Paciente Coleta incorreta, atribui pouca importncia
infeco parasitria, questes culturais. Auto-medicao.
Laboratrio exame trabalhoso, pouco padronizado, no
automatizado, variabilidade intra e interobservadores,
profissional pouco valorizado, qualificao profissional
insuficiente, pouco compromisso/envolvimento,
sobrecarga, mtodos adaptados (no originais)
Informaes Importantes na Solicitao
Dados scio-demogrficos (sexo,idade, escolaridade,
ocupao, procedncia)
Indicao clnica: sintomatologia, investigao
diagnstica, acompanhamento do tratamento,
controle de cura, tratamento prvio ao diagnstico,
rotina pr-natal/ pr-operatria.
Questionamentos Importantes na entrega do material
Ingesto prvia de medicao, compostos qumicos
na semana anterior ao exame
Forma de coleta, tempo de coleta, preservao do
material, intercorrncias na coleta.
Sensibilidade X Especificidade
SENSIBILIDADE
Um teste sensvel quando seu resultado positivo em
indivduos doentes. Pouco falso-negativo

ESPECIFICIDADE
Um teste especfico quando seu resultado negativo em
indivduos no doentes. Pouco falso-positivo


EPF - BAIXA SENSIBILIDADE (muitos falsos
negativos) e ALTA ESPECIFICIDADE (poucos falsos
positivos)
Causas de negatividade no exame parasitolgico
EVITVEIS PROFISSIONAIS
Treinamento
Escolha do mtodo (sensibilidade)
Inadequao do mtodo
Leitura parcial da lmina
Sobrecarga de trabalho
INEVITVEIS - BIOLGICAS
A) Protozorios - perodos de negatividade
B) Helmintos
infeco unissexual por espcimes machos
fmeas sexualmente imaturas
aps eliminao do verme adulto
carga parasitria leve
irregularidade na postura/eliminao
Causas de negatividade no exame parasitolgico
Controle de qualidade
Treinamento dos profissionais
Controle externo de qualidade:
CONTROL- LAB SBPC/ML
PNCQ SBAC
INTERLABORATORIAIS
INTERNACIONAIS: CAP
Controle interno de qualidade
Amostra cega amostra j processada no dia
Pool de amostras positivas ( COCOTECA )
Amostras conservadas com parasita nico
Lminas com colorao permanente
Lminas da rotina.
Laudo final
Reportar todos os parasitas encontrados
Sempre com os nomes cientficos: grifados, ou em itlico, ou em
negrito
Colocar o estgio de diagnstico identificado
Exemplo:
Foram encontrados:
Ovos de Hymenolepis nana
Ovos de Hymenolepis nana
Ovos de Hymenolepis nana

Larvas de Strongyloides stercoralis
Larvas de Strongyloides stercoralis
Larvas de Strongyloides stercoralis


Laudo final
Para ausncia de parasitos, reportar:
Exemplo
Negativo - No foram visualizadas formas
diagnsticas de parasitas
Ou
Negativo - No foram visualizadas formas
diagnsticas de parasitas, na amostra enviada
Laudo final
Reportar o(s) mtodo(s) utilizado(s).

Reportar nmero de amostras analisadas:
Ex. resultado positivo ou negativo e na Obs. o n de
amostras

Reportar parasitas que no foram diferenciados
Ex. cistos de Entamoeba histolytica /dispar