INSTITUTO FEDERAL DE EDUCAO, CINCIA

E TECNOLOGIA DO PIAU - (IFPI)

CURSO DE LICENCIATURA EM QUMICA
PROFESSOR: Dr:. BARTHOLOMEU
DISCIPLINA: ANLISE INSTRUMENTAL -I



EDUARDO NETO
FLAVIO CARVALHO
JOSSICLEIDE SEIXAS
CROMATOGRAFIA GASOSA
PARNABA-2014
1
Informaes gerais A Cromatografia Gasosa (CG) uma tcnica
para separao e anlise de misturas de substncias volteis. A
amostra vaporizada e introduzida em um fluxo de um gs
adequado denominado de fase mvel ( FM) ou gs de arraste . Este
fluxo de gs com a amostra vaporizada passa por um tubo contendo
a fase estacionria FE (coluna cromatogrfica), onde ocorre a
separao da mistura. A FE pode ser um slido adsorvente
(Cromatografia Gs-Slido) ou, mais comumente, um filme de um
lquido pouco voltil, suportado sobre um slido inerte
(Cromatografia Gs-Lquido com Coluna Empacotada ou Recheada)
ou sobre a prpria parede do tubo (Cromatografia Gasosa de Alta
Resoluo). Na cromatografia gs-lquido (CGL), os dois fatores que
governam a separao dos constituintes de uma amostra so:
- a solubilidade na FE: quanto maior a solubilidade de um
constituinte na FE, mais lentamente ele caminha pela coluna.
- a volatilidade: quanto mais voltil a substncia (ou, em outros
termos, quanto maior a presso de vapor), maior a sua tendncia de
permanecer vaporizada e mais rapidamente caminha pelo sistema.

As substncias separadas saem da coluna dissolvidas no gs de
arraste e passam por um detector; dispositivo que gera um sinal
eltrico proporcional quantidade de material eluido. O registro
deste sinal em funo do tempo o cromatograma, sendo que as
substncias aparecem nele como picos com rea proporcional sua
massa, o que possibilita a anlise quantitativa

Detalhes do Equipamento
A amostra transportada por uma corrente de gs atravs de
uma coluna empacotada com um slido recoberta com uma
pelcula de um lquido. Devido a sua simplicidade, sensibilidade e
efetividade para separar os componentes de misturas, a
cromatografia de gs uma das ferramentas mais importantes
em qumica. amplamente usada para anlises quantitativos e
qualitativos de espcies qumicas e para a determinar constantes
termoqumicas tais como calores de soluo e vaporizao,
presso de vapor e coeficientes de atividade. A cromatografia de
gs tambm usada para monitorar os processos industriais de
forma automtica: analisam-se as correntes de gs
periodicamente e realizam-se reaes de forma manual ou
automtica para compensar variaes no desejadas.
1 - Reservatrio de Gs
e Controles de Vazo /
Presso.
2 - Injetor (Vaporizador)
de Amostra.
3 - Coluna
Cromatogrfica e Forno
da Coluna.
4 - Detector.
5 - Eletrnica de
Tratamento
(Amplificao) de Sinal.
6 - Registro de Sinal
(Registrador ou
Computador).


Muitas anlises de rotina so realizadas rapidamente no campo
medicinal e outros. Por exemplo, por meio do uso de apenas 0.1
centmetros cbicos (0.003 onas) de sangue, pode-se determinar as
porcentagens de oxignio dissolvido, nitrognio, dixido de carbono e
monxido de carbono. A cromatografia de gs til tambm na
anlise de contaminantes do ar, lcool no sangue, leos essenciais e
produtos alimentcios.




O mtodo consiste primeiramente na introduo da mistura
de prova ou amostra em uma corrente de gs inerte,
normalmente hidrognio, hlio, nitrognio ou argnio, que
atuaro como gs de arrastre. As amostras lquidas vaporizam-
se antes da injeo no gs de arrastre. O fluxo de gs passa
pela coluna empacotada atravs da qual os componentes da
amostra se deslocam a velocidades influenciadas pelo grau de
interao de cada componente com a fase estacionria no
voltil. As substncias que tm a maior interao com a fase
estacionria so retidas por mais tempo e, por tanto,
separadas daquelas de menor interao. medida que as
substncias eluem da coluna, podem ser quantificadas por um
detector e/ou tomadas para outra anlise.



Existem dois tipos de cromatografia de gs: cromatografia Gs -
Slido (CGS) e cromatografia Gs - Lquida (CGL). A cromatografia
Gs - Slida se baseia na base slida estacionria, na qual a
reteno das substncias analisveis a conseqncia da absoro
fsica. A cromatografia Gas -Lquida til para separar ons ou
molculas dissolvidas em um solvente. Se a soluo de amostra
estiver em contato com um segundo slido ou fase lquida, os
diferentes solutos interagem com a outra fase em diferentes graus,
devido a diferenas de adsoro, intercmbio de ons, partio, ou
tamanho. Estas diferenas permitem que os componentes da
mistura se separem usando estas diferenas para determinar o
tempo de reteno dos solutos atravs da coluna.
Gs de arrastre
A escolha do gs de arrastre depende do tipo de detector que
utilizado e dos componentes a determinar. Os gases de arrastre para
cromatgrafos devem ser de alta pureza e quimicamente inertes, por
exemplo, hlio (He), argnio (Ar), nitrognio (N
2
) e hidrognio (H
2
). O
sistema de gs arrastre pode conter um filtro molecular para a
remoo de gua e outras impurezas.


Sistema de injeo de amostra
Os sistemas de injeo mais comuns para a introduo de amostras
de gs em seringa.


Injeo direta com seringa
As amostras gasosas e lquidas podem ser injetadas com uma
seringa. Na forma mais simples a amostra injetada primeiro em
uma cmara aquecida, onde se evapora antes de ser transferida
para a coluna. Quando so utilizadas colunas empacotadas, a
primeira parte da coluna, em geral, serve como cmara de injeo,
aquecida separadamente a uma temperatura adequada. Para
colunas capilares utiliza-se uma cmara de injeo separada onde
somente uma pequena parte da amostra vaporizada/ gasosa
transferida coluna, este mtodo conhecido como split-injecton.
Isto necessrio para no sobrecarregar a coluna com volume de
amostra.


Detector por ionizao de chama
Um detector de ionizao de chama (FID ou DIC) consiste em uma
chama de hidrognio (H
2
)/ ar e um prato coletor. O efluente passa da
coluna do CG atravs da chama, a qual divide em molculas orgnicas
e produz ons. Os ons so recolhidos em um eletrodo negativo e
produzem um sinal eltrico. O FID extremamente sensvel com uma
faixa dinmica grande. Sua nica desvantagem que destri a
amostra.
Os detectores por ionizao de chama so usados para
detectar hidrocarbonetos (HC) como o metano (CH
4
),
etano (C
2
H
6
), acetileno (C
2
H
2
), etc.


A amostra a ser analisada mistura-se com hidrognio (H
2
), hidrognio
mais hlio (He) ou hidrognio mais nitrognio (N
2
). Os ons e eltrons
que se formaram na chama ficam presos em um eletrodo coletor
permitem que uma corrente flua no circuito externo. A corrente
proporcional aos ons formados, o que depende da concentrao de
hidrocarbonetos nos gases e detectada por um eletrmetro e
mostrado na sada anloga.


O FID oferece uma leitura rpida, precisa e contnua da concentrao
total de HC para nveis to baixos como ppb.
O consumo crescente de produtos naturais, utilizados como alimentos ou
como medicamentos, trouxe-nos a preocupao de verificar a qualidade de
alguns desses produtos. Essa verificao foi realizada por cromatografia em
fase gasosa, atravs de anlise dos cidos graxos de 60 amostras de leo de
amndoas, 33 de leo de germe de trigo, 16 de leo de gergilim, 16 de leo
de alho, 14 de leo de fgado de bacalhau e 8 de leo de semente de uva. No
caso dos leos de germe de trigo e fgado de bacalhau foi tambm verificado,
por via espectrofotomtrica, o teor de vitaminas E e A respectivamente. Das
amostras analisadas 79% dos leos de germe de trigo, 77% dos leos de
amndoas, 6 (38%) das de gergilim, e 2 (14%) das de fgado de bacalhau
estavam falsificadas. Todas as amostras de leo de semente de uva se
apresentavam puras. Concluiu-se que a cromatografia em fase gasosa um
mtodo adequado para a verificao da pureza de todos os leos analisados
Foram analisados comprimidos de Ecstasy provenientes de
sete diferentes lotes da droga apreendidos em So Paulo,
visando pesquisa de metilenodioxifenilalquilaminas. Em
seis amostras foi detectada a presena de 3, 4-
metilenodioximetanfetamina (MDMA), sendo que numa delas
foi encontrada tambm cafena. Apenas numa, foi identificada
a 3, 4-metilenodioxietilanfetamina (MDEA). A cromatografia
em fase gasosa com detector de nitrognio/fsforo (CG/DNP)
e a espectrometria de massas acoplada cromatografia em
fase gasosa (CG/EM) foram utilizadas como tcnica de
triagem e confirmao, respectivamente


INSTRUMENTOS PARA A CROMATOGRAFIA GS-
LQUIDO

O primeiro instrumento comercial para a cromatografia gs-lquido
surgiu em 1955. Atualmente centenas de milhares esto em uso no
Brasil.
A melhoria dos instrumentos de cromatografia gasosa cresceu,
principalmente, com o uso de computadores nas dcadas de 80 e 90 o
que possibilitou o controle automtico da maioria dos parmetros
instrumentais, como a temperatura da coluna, vazes e a injeo da
amostra; o desenvolvimento de instrumentos de alto desempenho a
custos moderados e, talvez o mais importante, o desenvolvimento das
colunas tubulares abertas que so capazes de separar os
componentes de misturas complexas de forma relativamente rpida.

As vazes so normalmente controladas por um regulador de
presso de dois estgios no cilindro do gs e algum tipo de
regulador de presso ou regulador de fluxo montado no
cromatgrafo. As presses de entrada situam-se na faixa de
10 a 50 psi (libras/polegada2) acima da presso ambiente, o
que produz vazes de 25 a 150 mL min1 em colunas
recheadas e de 1 a 25 mL min1 para as colunas capilares de
tubo aberto.
SISTEMAS DE DETECO

Dezenas de detectores tm sido investigados e empregados em
separaes cromatogrficas a gs.



Caractersticas de um Detector Ideal

O detector ideal para a cromatografia gasosa apresenta as seguintes
caractersticas:
1. Sensibilidade adequada. Em geral, as sensibilidades nos detectores atuais
situam-se na faixa de 108 a 1015 g do soluto/s.
2. Boa estabilidade e reprodutibilidade.
3. Resposta linear aos solutos que se estenda a vrias ordens de grandeza.

4. Faixa de temperatura desde a ambiente at pelo menos 400 C.
5. Um tempo de resposta curto e independente da vazo.

6. Uma alta confiabilidade e facilidade de uso. O detector deve, na
medida do possvel, tolerar a ao de operadores inexperientes.
7. Similaridade de resposta a todos os solutos ou, alternativamente,
uma resposta altamente previsvel e seletiva a uma ou mais classes
de solutos.
8. No deve destruir a amostra.
Detectores de Condutividade Trmica

O detector de condutividade trmica(DCT), que foi um dos
primeiros detectores para cromatografia gasosa, ainda
encontra ampla aplicao.



Esse dispositivo consiste em uma fonte aquecida
eletricamente cuja temperatura potncia eltrica constante
depende da condutividade trmica do gs que a envolve.
Detectores de Captura de Eltrons

O detector de captura de eltrons (DCE) tornou-se um dos mais
amplamente empregados para as amostras ambientais em
virtude de ele responder seletivamente aos compostos orgnicos
contendo halognios, como pesticidas e bifenilas policloradas.
Espectrometria de Massas

Um dos detectores mais poderosos para a cromatografia
gasosa o espectrmetro de massas.
Sistemas de Entrada

Alm das entradas de CG, as amostras podem ser
introduzidas em um espectrmetro de massas
moleculares de diversas formas. Os slidos podem ser
colocados na ponta de um basto,
Fontes de Ionizao Muitos tipos diferentes de fontes de
ionizao esto disponveis para a espectrometria de massas
moleculares.



Analisadores O analisador de massas separa os ons de
acordo com os valores de m/z.


Detectores de ons Em muitos espectrmetros, os ons so
detectados aps colidirem com a superfcie de um detector.
As colises causam a emisso de eltrons, ftons ou outros
ons.
O Instrumento Completo de CG-MS


As molculas so fragmentadas e ionizadas pela fonte e
analisadas e detectadas pelo multiplicador de eltrons.


Em CG-MS, o espectrmetro de massas varre as massas
repetidamente durante o experimento cromatogrfico.
Outros Tipos de Detectores

Outros detectores importantes para CG incluem o detector
terminico, o detector de condutividade eletroltica ou de efeito
Hall e o detector de fotoionizao.


Os mtodos hifenados acoplam a capacidade de separao da
cromatografia com a capacidade de deteco qualitativa e
quantitativa dos mtodos espectrais.
COLUNAS E FASES ESTACIONRIAS
PARA A CROMATOGRAFIA GASOSA
Desde 1950
A fase estacionria era constituda de um filme fino de lquido retido
por adsoro na superfcie de um suporte slido inerte finamente
dividido.
Nas colunas capilares a fase estacionria constituda por um filme
de lquido de espessura igual a poucos dcimos de um recobrindo
uniformemente o interior do tubo capilar.
Razes:
Pequena capacidade da amostra;
Fragilidade das colunas;
Problema mecnicos associado com a introduo da amostra e com a
conexo da coluna com o detector;
Dificuldades de recobrimento da coluna de forma reprodutvel;
A vida curta das colunas preparadas de forma ineficientes;
A tendncia das colunas de entupirem;
As patentes.
1970
Os problemas foram contornveis;
Companhias de instrumentos comearam a oferecer colunas
tubulares abertas custos razoveis

COLUNAS CAPILARES OU TUBULARES ABERTAS
COLUNA TUBULAR ABERTA DE PAREDE RECOBERTA (TAPR) COLUNAS TUBULARES ABERTAS REVESTIDAS COM SUPORTE
SO TUBOS CAPILARES RECOBERTOS COM UMA
FINA CAMADA DE FASE ESTACIONRIA
EFICINCIA DE COLUNA MAIOR;
FORAM CONSTITUDOS DE AO INOXIDVEL,
ALUMNIO, COBRE OU PLSTICO
EFICINCIA DE COLUNA MENOR;
RETM UMA QUANTIDADE DE FASE ESTACIONRIA
MAIOR, APRESENTANDO MAIOR CAPACIDADE DE
AMOSTRA.
COLUNAS TUBULARES ABERTAS DE
SLICA FUNDIDA
So puxadas a partir de slica purificada especial que contm
pequenas quantidades de xidos metlicos;
Apresentam paredes muito mais finas que os de vidro;
Os tubos tm sua resistncia reforada por meio de recobrimento
externo de proteo de poliimida, sendo aplicado na medida em que
o tubo capilar puxado.
COLUNAS TUBULARES ABERTAS
DE SLICA MAIS EMPREGADAS



0,25 mm e 0,32 mm














Colunas Recheadas
Fabricadas tubos de vidro ou metal;
Comprimento tpico entre 2 e 3 m e dimetro interno 2 a 4 mm;
Recheados com um material uniforme e finamente dividido;
Tubos enrolados na forma de bobinas
Materiais slidos de suporte
Suporte slido (ou recheio)
Suporte ideal
O material deve ser inerte a temperaturas elevadas e deve ser molhado
uniformemente pela fase lquida
Fases estacionrias lquidas
Baixa volatilidade ( ponto de ebulio do lquido menor 100 C);
Estabilidade trmica;
Inrcia qumica;
Caractersticas do solvente.
Muitos lquidos tm sido propostos como fases estacionrias no
desenvolvimento da cromatografia gs- lquido, onde a escolha
apropriada de uma fase estacionria crucial para o sucesso de uma
separao.
O tempo de reteno;
Constantes de distribuio diferentes;
Constantes no devem ser extremamente grandes ou extremamente
pequenas.


Para se obter um tempo de residncia razovel na coluna, um
analito deve mostrar algum grau de solubilidade com a fase
estacionria: IGUAL DISSOLVE IGUAL
Geralmente a polaridade da fase estacionria deve igualar-se dos
componentes da amostra.

APLICAES DA
CROMATOGRAFIA GS-
LQUIDO
APLICAES DA CROMATOGRAFIA GS-
LQUIDO
A cromatografia gs-lquido pode ser aplicada s espcies
relativamente volteis e termicamente estveis a temperaturas de at
poucas centenas de graus Celsius.
Consequentemente, a cromatografia gasosa tem sido amplamente
aplicada na separao e determinao de componentes em variados
tipos de amostras.

Anlise Qualitativa
Os cromatogramas obtidos por CG so amplamente utilizados para se
estabelecer a pureza de compostos orgnicos. Os contaminantes, se
presentes, so revelados pelo aparecimento de picos adicionais; as
reas sob esses picos fornecem estimativas grosseiras da extenso da
contaminao. A tcnica tambm til para se avaliar a eficincia dos
processos de purificao.

Anlise Qualitativa
Anlise Qualitativa
a cromatografia gasosa prov um meio excelente de confirmao da
presena ou ausncia de compostos suspeitos em uma mistura, supondo
que uma amostra autntica da substncia esteja disponvel. Nenhum outro
pico deve aparecer no cromatograma da mistura em adio ao do
composto conhecido e o aumento de intensidade de um pico previamente
existente deve ser observado.

Embora um cromatograma possa no levar a uma identificao positiva das
espcies presentes em uma amostra, este frequentemente prov uma
evidncia segura da ausncia de uma espcie. Assim, se a amostra falha em
produzir um pico com o mesmo tempo de reteno que um padro obtido
sob condies idnticas, isso uma evidncia forte de que o composto em
questo est ausente (ou presente em concentrao abaixo do limite de
deteco do procedimento).
Anlise Quantitativa
A cromatografia gasosa deve seu enorme crescimento em parte sua
velocidade, simplicidade, custo relativamente baixo e ampla
aplicabilidade a separaes. duvidoso, contudo, que a CG poderia
ter se tornado to amplamente utilizada, se no fosse capaz de
fornecer informaes quantitativas sobre as espcies separadas.

A CG quantitativa est baseada na comparao da altura ou da rea
de um pico analtico com aquele de um ou mais padres.
Anlise Quantitativa
Procedimento Geral
Obteno do cromatograma
da amostra
Medio das reas dos
picos de interesse
Clculo da massa
correspondente a cada um
dos picos
rea dos picos registrados no cromatograma
proporcional massa do composto injectado.
Mtodos para medir a rea dos picos
Mtodo da Normalizao
das reas
Mtodo do Padro Interno
Anlise Quantitativa
Mtodo da Normalizao das reas
Mtodos para calcular as reas
O clculo das reas deve ser feito pelo mtodo da meia altura
A = h x wmeia altura
No clculo das reas necessrio corrigir as reas
obtidas com base num factor de correco
apropriado, dada a sensibilidade do detector ser
diferente para cada componente detectado.
Anlise Quantitativa
Factor de correco
Anlise Quantitativa
Mtodo do padro interno
(Calibrao com Padres)
Vantagens
- Grande preciso
- No necessrio injectar com grande rigor
- No necessita de boa estabilidade
cromatogrfica
MISTURA
Padres de componentes com concentrao
crescente
Padro interno com concentrao constante
Anlise Quantitativa
Calibrao com Padres - O mtodo mais direto de anlise
cromatogrfica gasosa quantitativa envolve a preparao de uma
srie de solues padro cuja composio se aproxima daquela da
amostra (mtodo do padro externo). Os cromatogramas para os
padres so obtidos e as alturas dos picos ou suas reas so
empregadas em um grfico em funo da concentrao para se obter
uma curva analtica. Um grfico dos dados deve fornecer uma linha
reta passando pela origem; as anlises quantitativas so baseadas
nesse grfico. A calibrao deve ser frequente para maior exatido.
Calibrao com Padres
Uso da CG-MS na Identificao de um Metablito
de um Medicamento no Sangue
Um paciente em coma estava sob suspeita de ter ingerido uma dose excessiva de um
medicamento, a glutetimida (Doriden), tendo em vista um frasco vazio do medicamento
encontrado prximo a ele.
Um cromatograma a gs foi obtido de um extrato de plasma do seu sangue e dois picos foram
encontrados, como mostrado na Figura.
Uso da CG-MS na Identificao de um Metablito
de um Medicamento no Sangue
O espectro de massas do pico 2, contudo, mostrou uma massa para o on molecular na razo
massa-carga de 233, como pode ser visto na Figura. Isso difere da massa molecular do on da
glutetimida por 16 unidades de massa, indicando a incorporao de oxignio na molcula de
glutetimida. Isso levou os cientistas a acreditar que o pico 2 era devido a um metablito 4-hidroxi
da droga original (droga pai).

Espectros de massas obtidos
CROMATOGRAFIA GASOSA VDEO