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Enzimologa :

Generalidades
Cintica enzimtica
Papel Clnico
Qu es una enzima?
Es un tipo de protena que acta como catalizador de
reacciones qumicas.
Incrementa la velocidad de reaccin sin cambiar el punto
de equilibrio.
Como catalizador:
Es especfico para cada reaccin. No necesariamente
para un solo sustrato, aunque muchas enzimas lo son.
Tiene gran poder cataltico, transformando hasta 10
3
a
10
4
molculas por segundo.
Est sujeto a diversos mecanismos de regulacin de
modo tal que no genere ms producto que el necesario.

Actividad enzimtica
Es la forma de medida de una enzima.
La ecuacin general de las reacciones enzimticas es:


Donde la enzima se une al sustrato para generar un producto. Algunas
veces con el auxilio de un cofactor que se modifica durante la
reaccin.
La actividad enzimtica se mide por la reaccin cataltica bajo la forma
de desaparicin del sustrato por unidad de tiempo.
Tambin por formacin de producto o modificacin del cofactor.
Unidades: katal = moles de sustrato/segundo.
Unid. Internacionales: umol/minuto.
1 U= 16,7 nkat.
2 1
Cof P E ES Cof S E
Clasificacin de enzimas
Clase de enzima Tipo de reaccin catalizada
Oxidoreductasas
Reacciones que transfieren electrones de un sustrato
a otro.xido reduccin
Transferasas
Transfieren un grupo funcional de una molcula a otra.
Grupos como metilos, acilos, fosfatos etc
Hidrolasas
Rompen enlaces entre carbonos u otras molculas
con la adicin de una molcula de agua.
Liasas
Rompen enlaces C-C, C-S, C-N sin el ingreso de una
molcula de agua.
Isomerasas
Transforman un ismero en otro transfiriendo un grupo
funcional de una posicin a otra.
Ligasas
Forman enlaces C-C, C-N, C-O y C-S uniendo dos
molculas con gasto de energa.
Especificidad y sitio activo
Las reacciones se inician
cuando el sustrato se une al
sitio activo de la enzima.
El sitio activo es una porcin
espacial de la enzima creada
por la coincidencia de varias
cadenas laterales de amino-
cidos especficos. Estos
pueden no estar en
secuencia, pero los dobleces
de la protena enzimtica los
aproximan.
Existen: residuos de captura
y residuos de catlisis.
enzima
sustrato
enzima
productos
Tipos de
especificidad enzimtica
En este modelo el sitio
activo tiene una estruc-
tura rgida, se le llama
de llave y cerradura.
Es complementaria del
sustrato.
Explica la especificidad
de sustrato an a nivel
de ismeros (estructu-
ras casi idnticas).


Aqu el sitio activo es ms
flexible, se le llama de ma-
no y guante.
Cuando el sustrato se acerca
a la enzima se producen
cambios conformacionales
que llevan a una exacta u-
nin entre ambos.
Modelo que explica mejor
la especificidad de sustrato.
Modelo de molde rgido Modelo de molde inducido
Enzimas y energa de
activacin
Las enzimas no afectan el
punto de equilibrio de una
reaccin qumica.
Slo aceleran la velocidad
para alcanzar este punto.
La energa de activacin
es la necesaria para que el
sustrato se eleve al estado
transitorio.
La velocidad de reaccin
es inversamente propor-
cional a la magnitud de la
energa de activacin.
sustrato
producto
Estado de
transicin
Energa de activacin
Actividad cataltica
Las enzimas aceleran la velocidad de reaccin por las
siguientes razones:
La unin de sustrato y enzima incrementa la
concentracin efectiva de sustrato en las inmediaciones
del sitio activo. Hay tambin un cambio
conformacional que orienta al sustrato.
La unin enzima sustrato tiene un nivel ms alto de
energa y las modificaciones de longitud y ngulo del
sustrato asemejan a la forma del estado transitorio.
Algunos de los residuos del sitio activo, participan de
la reaccin donando y aceptando protones.
Algunos residuos catalticos tienen grupos que ayudan
a romper enlaces covalentes.

Localizacin enzimtica
Las enzimas ejercen su
funcin predominantemente
en el interior celular. Mas an
lo hacen en determinado
organelo de la clula.
Las enzimas que se en-
cuentran en el plasma o l-
quidos diversos corresponden
a aquellas que se estn eli-
minando y muy pocas como
la LCAT (Lecitina colesterol
acil transferasa), LLP (Lipasa
lipoproteica), ejercen su
funcin a nivel plasmtico.
Succinato deshidro-
genasa.Citocromo oxidasa
Mitocondria
Catalasa
Peroxisoma
Alfa manosidasa
Complejo Golgi
Retculo endoplasma
Glucosa 6 fosfatasa
Na/K ATPasa
membrana
Factores que modifican la reaccin
enzimtica

La velocidad de una reaccin mediada por
enzimas est influenciada por:

Temperatura del medio
El pH del medio
Concentracin de la enzima
Concentracin del sustrato
Temperatura
No existe actividad enzimtica a -273C
o cero absoluto.
A partir de esa temperatura los incre-
mentos provocan mayor actividad enzi-
mtica. La que se expresa como coefi-
ciente de temperatura o Q
10
. Esto es, el
incremento de actividad por cada 10C de
aumento de temperatura.
En trminos generales Q
10
= 2, es decir
que por cada 10C de temperatura la
velocidad se dobla.
Existe una temperatura ptima tras la cual
los aumentos provocan desnaturalizacin
de la protena enzimtica y prdida de la
actividad.
temperatura
a
c
t
i
v
i
d
a
d

0 70
pH
Cada enzima tiene un pH
ptimo de trabajo, el cul es
variable. Las enzimas intra-
celulares trabajan entre 5 y 9 ,
las enzimas digestivas pueden
trabajar en pH diferentes.
Los extremos de pH afectan la
ionizacin de los centros
activos (-COO
-
NH3
+
SH).
X
Y
X
H Y
H X
H Y
Enzima Enzima Enzima

pH cido (inac) pH ptimo (activo) pH alcalino (inac)


pH
0
14
Concentracin de la enzima y
constante de equilibrio
La concentracin de la enzima incrementa la velocidad de la
reaccin, pero no modifica la constante de equilibrio.
As, si la reaccin se produce en ausencia de la enzima...


La constante de equilibrio ser:


Y, si la reaccin se produce en presencia de la enzima...


La constante de equilibrio ser:
P S
K
K

1
1
) (
) (
1
1
S
P
K
K
Keq

P Enz S Enz
K
K

1
1
) (
) (
) )( (
) )( (
1
1
S
P
S Enz
P Enz
K
K
Keq

Concentracin del sustrato
Si se aumenta la concentracin
del sustrato, manteniendo cons-
tante las dems variables, la
velocidad inicial de reaccin (Vi)
aumenta hasta un valor mximo
(Vmax) el que se estabiliza.
Se dice bajo estas condiciones
que la enzima est saturada con
el sustrato. Esto se produce de
acuerdo a la afinidad enzima
sustrato.
S
Vmax
Vmax/2
Km.
Ecuacin de Michaelis Menten
La relacin entre velocidad de reaccin y concentracin de sustrato
se describe en la frmula:




Bajo estas condiciones Vmax se observa cuando todos los sitios activos
estn llenos de sustrato. Toda la enzima est bajo la forma de [ES] y la
Km se define como concentracin de sustrato a Vmax/2
Vmax: es un ndice de la eficiencia de una enzima. Es la velocidad cuando
todos los sitios activos estn saturados, y es proporcional a la
concentracin de la enzima. Sus unidades son unidades de velocidad.
Km: es una medida inversa de la afinidad de la enzima por el sustrato. Una
baja Km indica alta afinidad entre enzima y sustrato. Las unidades de Km
son unidades de concentracin.

] [
] [
S Km
S Vmax
v

La aplicacin de la ecuacin de
Michaelis Menten se basa en...
La concentracin de sustrato es tan grande con respecto a la de
enzima, que la formacin de ES no altera significativamente la
concentracin de sustrato.
Al inicio de la reaccin la concentracin del producto es tan
insignificante que la velocidad descrita como k4 puede ser
ignorada.
La velocidad de transformacin de ES en E+P(k3) es el factor
limitante de la reaccin.
La formacin de ES es rpida y reversible y es igual a la
velocidad de desaparicin de ES.
P E ES S E
K
K
K
K


3
4
1
2
Grfica de Lineweaver Burk
La grfica de Lineweaver
Burk es usada para obtener
Vmax y Km.
Se usa la inversa de la ecua-
cin de Michaelis Menten.



Cuando 1/v se grafica frente a
1/s se obtiene una recta,
donde la pendiente es
Km/Vmax.
La interseccin en el eje de y
es igual a 1/Vmax y la del eje
de x es igual a 1/Km.
Vmax S Vmax
km
v
1
] [
1
.
1

1/v
1/[S]
1/Vmax
-1/Km
Inhibidores competitivos
Estructuras semejantes al sustrato que compiten con l por el mismo
centro activo.
Sus efectos pueden revertirse si se incrementa la concentracin del
sustrato hasta ocupar todos los centros activos.
La Vmax no cambia, pero si el Km porque se necesita ms sustrato.
v
[S]
inhibidor
1/[S]
1/V
1/Vmax
-1/Km
Inhibidores no competitivos
Estructuras diferentes al sustrato por lo que se unen a un sitio indepen-
diente de la enzima.
Ambos, sustrato e inhibidor pueden unirse a la enzima al mismo tiem-
po. Su efecto no puede revertirse aumentando la concentracin del
sustrato.
No tiene efecto sobre la Km pero s sobre la Vmax.
V
[S]
inhibidor
1/V
1/[S]
1/Vmax
-1/Km
Inhibidores irreversibles
Reaccionan covalentemente con la cadena lateral de un aminocido de
la enzima, para formar un complejo estable permanentemente
inactivado.
Se les llama tambin substratos suicidas.
Su efecto es igual al de un inhibidor no competitivo.
Droga Uso teraputico Enzima afectada Tipo de inhibidor
Lovastatina Hipercolesterolemia HMGCoA reductasa Competitiva
5-fluouracil Cncer Timidilato sintetasa Irreversible
Metrotexate Cncer Dihidrofolato reductasa Competitiva
Alopurinol Gota Xantino oxidasa Irreversible
Cumadin Anticoagulante Glutamil carboxilasa Competitiva
Aspirina Antiinflamatorio Ciclooxigenasa Irreversible
Captopril Hipertensin art. Enz.convert.angiotensina Competitiva
Efecto clnico de los Inhibidores
Papel Clnico de las Enzimas
Si bien es cierto las enzimas cumplen su actividad en
el interior celular, es posible encontrarlas en los
lquidos biolgicos con cierta frecuencia.
Todas las enzimas plasmticas, las del LCR, del L.
Asctico o Pleural se encuentran en bajos niveles de
concentracin actividad- provenientes de los tejidos
ricos en ellas y generalmente de paso a un proceso de
destruccin heptica o eliminacin renal.
nicamente algunas enzimas como las del
metabolismo de lpidos (LCAT, LLP) o los factores
de coagulacin ejercen su actividad en el plasma o
suero.
Elevacin enzimtica en el
plasma...
La actividad enzimtica en el plasma y otros lquidos biolgicos
se produce por:
Necrosis: destruccin celular y vaciamiento de las enzimas
como en el infarto de miocardio, hepatitis viral.
Permeabilidad: aumento de permeabilidad de membrana
igual a necrosis.
Sobre produccin: mayor metabolismo en un tejido
-neoplasia-.
Menor eliminacin: no se elimina normalmente
-obstruccin biliar-.
I ncremento de clulas inflamatorias: en lquidos como
Pleural y Asctico los exudados se acompaan de aumento de
actividad enzimtica.
Origen de las enzimas
en el plasma
Enzimas Ejemplos
Especficas del plasma
Protrombina, plasmingeno,ceruloplasmina,
Lipasa Lipoproteica,colinoesterasa
Secretadas Amilasas, fosfatasa prosttica, pepsingeno
Del metabolismo celular
Lctico deshidrogenasa, aldolasa, aspartato y
alanina transferasa.
Enzimas de uso diagnstico
Enzima Uso diagnstico
Fosfatasa cida Cancer de prstata
Fosfatasa alcalina Enf. heptica y osea
Amilasa Enf. pancretica
Aspartato amino transferasa Enf. heptica y cardiaca
Alanina amino transferasa Enf. heptica
Creatino fosfo quinasa Enf. muscular y cardiaca
Dehidrogenasa lctica I nfarto de miocardio
GOT
GPT
GLDH
SDH
CPK
LDH
Papel de las enzimas en la
medicina
Establecer un diagnstico,
como en el caso de las
enzimas del infarto de
miocardio (CPK y LDH).
Valorar la magnitud de la
lesin
Monitorizar la mejora del
paciente.
Mostrar la repeticin del
fenmeno (reinfarto)
TGO
2 4 6 8 10
LDH
CPK
Das despus del infarto de
Miocardio.
Isoenzimas
Enzimas que realizan la misma funcin pero difieren en su estructura
qumica y propiedades cinticas.
Las formas isoenzimticas distintas pueden pertenecer a distintos
tejidos revelando sus modificaciones el tejido que le dio origen.
Generalmente son estructuras oligomricas con varios tipos de cadenas
proteicas -dmeros o tetrmeros- .
Isoenzimas LDH
0%
10%
20%
30%
40%
50%
60%
70%
80%
90%
100%
H

g
a
d
o
R
i

n
M
i
o
c
a
r
d
i
o
M

s
c
u
l
o
E
r
i
t
r
o
c
i
t
o
s
P
u
l
m
o
n
e
s
B
a
z
o
LDH1
LDH2
LDH3
LDH4
LDH5
%
Dehidrogenasa lctica
Existen cinco isoenzimas
de la deshidrogenasa lctica
(LDH). Cada una es un oli-
gmero con cuatro prot-
meros de los tipos H y M y
tiene un PM de 34 000.
Los protmeros se combi-
nan de manera distinta y se
originan en distintos tejidos
con preferencia.
El suero tiene un contenido
representativo de todos los
tejidos.
Isoenzima SubunidadesTejido predominante
LDH1 HHHH corazn
LDH2 HHHM corazn
LDH3 HHMM rin, pulmn
LDH4 HMMM hgado
LDH5 MMMM hgado
normal
infarto
Creatino fosfokinasa
Existen tres isoenzimas de
la creatino fosfokinasa.
Cada una es un dmero
formado por la combina-
cin de protmeros M y B.
Cada dmero representa a
un tejido en particular.
Isoenzima Subunidades Tejido predominante
CK1 BB Cerebro
Ck2 MB Msculo cardiaco
CK3 MM Msculo esqueltico
(+)
(-)
CK1
CK2
CK3