INTERAO

ANTGENO-ANTICORPO
Ensaio Imunoadsoro Enzimtica - ELISA
substrato
(incolor)
Qualitativos
Quantitativos
Direto = Ag
Indireto = Ac
Ac marcados
com Enzimas
+
+ = COR
Ag
Fosfatase alcalina
Peroxidase
B-galactosidase
ELISA Indireto
ELISA Direto ou Sanduche
Radioimunoensaio RIA
Hormnio
protenas sricas
drogas
vitaminas
Ac
0,0001 microgramas/ mL
Molculas marcadas
com ISTOPO
Marcaes:
I
125
: emite raios gama
H
3
: raios beta

Aplicaes:
Testes que necessitem de alta sensibilidade
Triagem vrus da hepatite B em doadores de
sangue
Pesquisa


Desvantagem:
No um teste seguro!

Imunofluorescncia
luz

Ac + fluorocromo
Ac +
Fluorocromo

r
ght
IMUNOFLUORESCNCIA DIRETA
IMUNOFLUORESCNCIA INDIRETA
Reagentes secundrios:

Anticorpo secundrio marcado com fluorocromo
protena A marcada com fluorocromo = poro Fc das IgGs

Isotiocianato de fluorescena (FITC) VERDE
Ficoeritrina (FE) VERMELHA


Aplicaes:

Identificar subpopulaes de linfcitos
Identificar espcies bacterianas
localizao de hormnios
Deteco complexos ag-ac em doenas auto-imunes
Deteco anticorpos anti-DNA
Teste qualitativo



Fc
Western Blotting
Eletroforese de protenas
Diferena de tamanho
(PM)
Mobilidade da protena
Deteco Ag ou Ac

Western Blotting
Gel
membrana de transferncia
papel filtro
preenchimento
tela de suporte
Gel/ membrana/ filtro
Tampo
( +)
( - )
Separao e deteco
de protenas
Identificao de Ac
especfico
Ac radiomarcado ou
Ac sec. ligado a enzima
Citometria de Fluxo
Separao de clulas ativadas por fluorescncia
Anticorpos contra molculas de membrana ou
Antgenos do Conjunto de Diferenciao (CD)
Cada Ac marcado com um fluorocromo diferente
Teste qualitativo e quantitativo
CD 4
CD 18
CD 125
CD 147
Tamanho
Granulosidade
Fluorescncia
CD4
CD8
CD20
Aplicaes:

Determinar o tipo e n
o
de
cls. sanguneas brancas

isolar populaes celulares

distribuio de cls de acordo
com a densidade dos Ag

o tamanho celular.


Uso de mltiplos anticorpos fluorescentes
HIV , Leucemias


Interao: ac - ag solvel forma uma
rede que pode desenvolver um
precipitado visvel.




Anticorpos bivalentes
+
Antgenos multivalentes


Reao de Precipitao
PRECIPITADO
1- Reao de precipitao em solues
Reao quantitativa:
Qtidade cte Ac
Qtidade cresc. Ag


Qtidade precipitina
Reaes de Aglutinao
Ac + Ag particulado
aglutininas


Agregao visvel de partculas





Efeito pr-zona



Eritrcitos
Bactrias
Fungos
ltex
Aglutinao Direta
Tipagem ABO

Testes confirmatrios para sfilis

Clulas ou partculas insolveis + Ac = Aglutinao
Deteco Acs especficos
Quantificao
Aglutinao bacteriana
Presena de infeco
Diferenciao de espcies

Aglutinao passiva
Ag solveis associados a outras superfcies
(Partculas de ltex ou superfcie de hemcias)


+