Cours de 1 e anne rsidanat Toxicologie 2013-2014 Khaoula KOULOUGHLI 16/04/2014 1 Plan : I. Introduction ; II. Rappel physiologique ; III. Reprotoxicit ; IV. Evaluation de la reprotoxicit ; V. Conclusion. 2 I. Introduction : La reproduction humaine est l'ensemble des processus par lesquels un homme et une femme engendrent un nouvel individu. Il sagit certainement dun phnomne biologique complexe, le plus complexe de tous, impliquant des processus divers et hautement spcifiques.
4 II. Rappel Physiologique : 1. Systme reproducteur masculin : Il comprend: 02 testicules ou gonades mles, double fonction: gamtogne, se traduisant par la production des spermatozodes ; et endocrine, consistant en l'laboration de diverses hormones, surtout les andrognes. Des voies spermatiques extra testiculaires : pididyme, canal dfrent et canal jaculateur.
5 II. Rappel Physiologique : 1. Systme reproducteur masculin : Testicules : Contiennent les tubes sminifres au sein desquels se fait la spermatognse.
Ces tubules contiennent des cellules nourricires : cellules de Sertoli.
Entre les tubules sminifres, se trouvent les cellules de Leydig ; responsables de la fabrication des hormones mles ou andrognes(Testostrone).
6 II. Rappel Physiologique : 1. Systme reproducteur masculin : Des glandes annexes, exocrines, dont les produits de scrtion entrent dans la composition du sperme. Il s'agit de la prostate, des vsicules sminales et des glandes de Cowper.
7 1) Les vsicules sminales: Au nombre de 02, elles scrtent un liquide alcalin , riche en glucides et nourrissant les spermatozodes. 2) La prostate: Situe sous la vessie, autour de lurtre. Scrte un liquide blanchtre responsable de la couleur du sperme. 3) La glande de cowper: Scrte un liquide alcalin qui enlve les traces durine dans lurtre. II. Rappel Physiologique : 1. Systme reproducteur masculin : Fonction : Spermatognse : Formation des spermatozodes. Se droule dans les tubules sminifres des testicules. Dclenche la pubert par les hormones hypophysaires sous linfluence de lhypothalamus. Seffectue partir des cellules souches: spermatogonies et les spermatozoides se fabriquent en millions/jour. Permanente et non cyclique comme lovognse.
8 II. Rappel Physiologique : 1. Systme reproducteur masculin : Fonction : Les spermatozodes: Petites cellules(3 de large et 60 de long) trs mobiles forms de 03 parties: La tte: acrosome (sac contenant les enzymes ncessaires la pntration dans lovocyte) + noyau. La pice intermdiaire: trs riche en mitochondries qui fournissent lnergie ncessaire au mouvement. Le flagelle: organe de propulsion du spermatozoide. la dure de vie des spermatozoides dans les voies gnitales fminines est de 48 72 h.
9 II. Rappel Physiologique : 1. Systme reproducteur masculin : Fonction : Production de testostrone : Effets : Dveloppement des organes gnitaux. Pulsion sexuelle. Apparition des caractres sexuels secondaires; Ex : voix grave; barbe, poils sur le corps; augmentation masse musculaire; augmentation densit des os
10 II. Rappel Physiologique : 2. Systme reproducteur feminin :
11 II. Rappel Physiologique : 2. Systme reproducteur feminin : A. Anatomie : Ovaires Glande reproductrice situe dans la cavit pelvienne. Produisent les ovules et les hormones fminines (Progestrones /strognes). la naissance, les ovaires renferment des millions de follicules I aires . la pubert, les follicules se dveloppent et librent chacun un ovule mature par le cycle menstruel.
12 II. Rappel Physiologique : 2. Systme reproducteur feminin :
Trompes de Fallope 02 conduits reliant, chacun, un ovaire lutrus. Deux rgions: Pavillon : recueille lovule au moment de lovulation. Ampoule : lieu o seffectue la fcondation.
13 II. Rappel Physiologique : 2. Systme reproducteur feminin :
Utrus : Organe creux, unique, mdian, sigeant dans le petit bassin. Accueillir, hberger et nourrir lovule fcond. Vagin : Conduit membraneux qui s'tend de la vulve au col utrin. Taille: 8 12 cm de long et de 2 4 cm de large.
14 II. Rappel Physiologique : B. Fonction : 1. Ovogense : Ovocyte : Il s'agit d'une grosse cellule sphrique, immobile, mesurant environ 140 de diamtre en fin de phase de croissance. Deux types d'ovocytes: Lovocyte I ou ovocyte immature: Le noyau est bloqu en prophase de 1re division de la miose et qui n'a pas de globule polaire.
Ovocyte II ou ovocyte mature : Le noyau est bloqu en mtaphase de 2me division de la miose et qui possde un dans lespace sparant la zone pellucide et l'ovocyte. 15 II. Rappel Physiologique : B. Fonction : 2. Fonction endocrine : - Les andrognes : scrts par la thque interne des follicules en volution . - Les strognes: scrts par la granulosa lors de la croissance folliculaire et par le corps jaune aprs l'ovulation . - La progestrone: scrte par les cellules folliculaires en phase folliculaire et par cellules lutales en phase lutale. - L'inhibine: scrte par les cellules folliculaires durant la phase folliculaire et par le corps jaune en phase lutale. 16 II. Rappel Physiologique : B. Fonction : 2. Fonction endocrine :
Rles :
L'inhibine: inhibe la scrtion de F.S.H.
L'aromatase: transforme les andrognes en strognes.
Le couple strognes-progestrone assure :
La prparation l'implantation (muqueuse utrine). La menstruation (par chute de leurs taux).
17 II. Rappel Physiologique :
3. Fcondation :
18 Trajet des spermatozodes fcondation ovaire Muqueuse utrine L'embryon va ensuite se connecter aux vaisseaux sanguins de l'utrus (placenta) ce qui lui permettra d'obtenir les substances nutritives ncessaires son dveloppement. II. Rappel Physiologique : B. Fonction : 3. Dveloppement embryonnaire : 1 er mois : apparition du cur; la moelle pinire et cerveau: 1 g / 2,5 mm ; 2 me mois : apparition des futurs membres: 11 g / 3 cm: ftus ; 3 me mois: diffrentiaciation des organes sexuels : 45g / 11 cm ; 4 me mois : aspect vraiment humain: 225g / 20 cm ; 5 me mois : 1 e ractions auditives et tactiles; dveloppement des poumons (non fonctionnels): 700g / 26 cm.
II. Rappel Physiologique :
20 III. Reprotoxicit
La reprotoxicit dsigne tout phnomne de toxicit pour la reproduction, en particulier quand elle entrane la strilit, ou la tratognse.
21 1. Dfinitions III. Reprotoxicit :
Un reprotoxique :
Des substances qui possdent un caractre toxique sur la reproduction et/ou le dveloppement. Altration des fonctions de reproduction humaine ou du produit de la conception. Certains perturbateurs endocriniens ayant une action sur les hormones sexuelles ont un potentiel reprotoxique mais pas deffet spcifique sur la reproduction ou le dveloppement. Tous les reprotoxiques nagissent pas selon un mcanisme de perturbation endocrinienne (1).
22 1. Dfinitions III. Reprotoxicit : Classification : Catgorie 1 : T toxique, R 60 et/ou R 61 : Substances connues pour altrer la fertilit. Substances connues pour provoquer des effets toxiques sur le dveloppement. Catgorie 2 : T toxique R 60 et/ou R 61 : Substances devant tre assimiles des substances altrant la fertilit. Substances devant tre assimiles des substances causant des effets toxiques sur le dveloppement. Catgorie 3 : Xn nocif R 62 et/ou R 63 : Substances proccupantes pour la fertilit Substances proccupantes pour lhomme en raison deffet toxique possibles sur le dveloppement (1). 23 1. Dfinitions III. Reprotoxicit : Un reprotoxique :
247 substances classes reprotoxiques UE dont 21 en cat. 1, 101 cat. 2. 95% nouvelles substances mises sur le march ne sont pas testes pour la reprotoxicit. Programme REACH (1).
24 1. Dfinitions III. Reprotoxicit 25 La toxicit pour la reproduction comprend : Laltration des fonctions de reproduction ou de la capacit de reproduction chez lhomme ou la femme ; Linduction deffets nfastes, mais non hrditaires, sur la descendance. Effets sur la fertilit masculine ou fminine: Effets sur la libido, le comportement sexuel, les diffrents aspects de la spermatognse ou de lovognse, ou sur laction hormonale ou la rponse physiologique qui perturberaient la capacit de fcondation, la fcondation elle-mme ou le dveloppement de lovule fcond y compris limplantation. La toxicit pour le dveloppement dans son sens le plus large : Y compris tout effet perturbant le dveloppement normal aussi bien avant quaprs la naissance (comportement maternelle et lactation) (1). 2. Effets En rsum, les effets reprotoxiques :
A. Effet sur la frtilit ; B. Effet sur le dveloppement pr et post-natal ; C. Effet durant la lactation. III. Reprotoxicit A. Effet sur la fertilit :
26 2. Effets 1. Action directe 2. Action indirecte Action sur les organes reproducteurs Action sur les glandes endocrine. Sur le SNA Trois niveaux daction :
27 1. Action directe A. Effet sur la fertilit : 2. Action sur les cellules testiculaires. 3. Action sur la vascularisation. 1. Action sur le spermatognse et les sprmatozoides ;
28 1. Action directe A. Effet sur la fertilit
1. Action sur le spermatognse et les sprmatozoides
Les atteintes qui en rsultent peuvent tre qualitative ou quantitative : 1. Diminution du nombre de spermatozoides: Azoospermie: absence de spermatozoide ljaculation ; Oligospermie : spermatozoides < 20 millions /ml. 2. spermatozoides dfectueux, moins mobiles et morts: Tratospermie: < 50 % des spermatozoides sont normaux ; Ncrosospermie : sprmatozoides morts ljaculation ; Immobilit totale. des SPZ.
29 1. Action directe A. Effet sur la fertilit
1. Action sur le spermatognse et les sprmatozoides
SPZ.
Mcanismes Action sur le mtabolisme Raction de stress Gnotoxicit Antimitotique. Radiation ionisante. Oxyde dthylne. Polychloro biphnyl (PCB). Epichlorohydrine 30 A. Effet sur la fertilit
1. Action sur le spermatognse et les sprmatozoides
Mcanisme : Interaction directe des produits chimiques gnotoxiques avec les brins ou avec dautres macromolcules stabilisant lADN.
Gnotoxicit 31 A. Effet sur la fertilit
1. Action sur le spermatognse et les sprmatozoides
1. Antimotiques : Ces mdicaments peuvent induire une strilit transitoire ou dfinitive chez lhomme: La procarbazine et les alkylants ( Cyclophosphamide, Mthotrexate) dtruisent les spermatogonies souches A1. Les sels de platine dtruisent les spermatocytes I et lon observe 100 % dazoospermie durant la chimiothrapie.
Gnotoxicit 32 A. Effet sur la fertilit 1. Action sur le spermatognse et les sprmatozoides
2. Radiation ionisante : Les testicules avec la MO reprsentent les organes les plus sensibles aux radiations ionisantes. Exposition professionnelle ou thrapeutique. Le mcanisme : La gnration de cassure simple et double brin de lADN dont labsence ou les anomalies de rparation conduisent linactivation cellulaire durant la mitose. Effets : Sobserve sur la ligne germinale sobserve partir dune dose de 0,1gray applique aux testicules; On observe une oligospermie partir de 8 cG et une azoospermie 80 cG en irradiation unique; Les testicules sont plus sensibles une irradiation fractionne qu une irradiation unique. Gnotoxicit 33 A. Effet sur la fertilit 1. Action sur le spermatognse et les sprmatozoides
3. Oxyde dthylne :
Interaction directe avec les protamines: molcules stabilisantes de lADN. Une baisse du comptage et de la mobilit spermatique a t observe chez le singe expos 50 ppm pendant 24 mois (12).
Gnotoxicit 34 A. Effet sur la fertilit 1. Action sur le spermatognse et les sprmatozoides
Dans un tissu comme le testicule, avec ses taux levs de mtabolisme et de la rplication cellulaire, le stress oxydatif peut tre particulirement prjudiciable, ce qui rend la capacit antioxydante du tissu trs importante (9).
Raction de stress 35 A. Effet sur la fertilit 1. Action sur le spermatognse et les sprmatozoides
Ces radicaux peuvent tre gnrs pendant le mtabolisme oxydatif de divers composs:
1. PCB (PolyChloroBiphnyles): Effets cytotoxiques directs par lintermdiaire des ions superoxydes librs par les PN => altration de la morphologie; mobilit; numration des SPZ et de leur pouvoir fcondant.
Raction de stress 36 A. Effet sur la fertilit 1. Action sur le spermatognse et les sprmatozoides
2. Alcool et tabac : Consommation excessive d'alcool ou de la cigarette entraine une augmentation de la production de radicaux libres dans tous les tissus et ont plusieurs reprises t associe l'infertilit masculine ou des conditions qui contribuent cette infertilit (9). Raction de stress 37 A. Effet sur la fertilit 1. Action sur le spermatognse et les sprmatozoides
La principale forme nergtique utilise par les sprmatozoides est ladnosine Triphosphate (ATP). La qualit de la mobilit des spermatozoides reflte la qualit de la production mitochondriale dATP. EX: Epichlorhydrine : Exemple d'un compos qui semble affecter la mobilit des spermatozodes par interfrence avec le mtabolisme.
Action sur le mtabolisme 3. Action sur la vascularisation. Trois niveaux daction :
38 1. Action directe A. Effet sur la fertilit : 2. Action sur les cellules testiculaires. 1. Action sur le spermatognse et les sprmatozoides ;
39 A. Effet sur la fertilit 2. Action sur les cellules testiculaires 1. Action sur les cellules de Sertoli 2. Action sur les cellules de Leydig 40 A. Effet sur la fertilit
Phtalates: perte de contact intercellulaire entre les cellules germinales et les cellules de Sertoli: atrophie testiculaire et dgnrescence des tubes sminifres.
2. Action sur les cellules testiculaires 1. Action sur les cellules de Sertoli 41 A. Effet sur la fertilit
Busulfan : Interfre avec la synthse des andrognes produits par les cellule de leydig. Altration de la spermatognse et endommagement des cellules de Sertoli.
2. Action sur les cellules testiculaires 2. Action sur les cellules de Leydig 3. Action sur la vascularisation. Trois niveaux daction :
42 1. Action directe A. Effet sur la fertilit : 2. Action sur les cellules testiculaires. 1. Action sur le spermatognse et les sprmatozoides ;
Cadmium: une exposition excessive a t implique dans linfertilit associe la varicocle.
Anomalies de la spermatognse en raison de: Probable augmentation de la T locale. Hypoxie relative du testicule en raison de la stase veineuse.
43 1. Action directe A. Effet sur la fertilit : 3. Action sur la vascularisation
Avant la pubert, les ovocytes sont plus rsistants aux toxiques en raison de leur tat de quiescence. Ex: Les radiations ionisantes: responsables de la destruction de la rserve ovarienne en follicules insuffisance ovarienne mnopause prcoce ( +/- court terme).
44 1. Action directe A. Effet sur la fertilit : 45 2. Action indirecte A. Effet sur la fertilit : Action sur les glandes endocrines Action sur le SNA 1. Alcool : Chez la femme: La consommation modre peut conduire Irrgularits menstruelles et une infertilit, absence de scrtion LH. Plus rcemment, une augmentation temporaire des taux dstradiol et testostrone a t mise en vidence. Lalcoolisme chronique chez la femme se manifeste par une srie de troubles de la reproduction: irrgularit des cycles voire arrt complet des menstruations, avec strilit/mnopse prcoce. Chez lhomme: certaines tudes montrent un baisse du taux de testostrone. 46 2. Action indirecte A. Effet sur la fertilit : Action sur les glandes endocrines 2. Perturbateurs endocriniens (Xnstrognes): Substances chimiques dorigine naturelle ou synthtique ; susceptibles dagir de nombreux niveaux des axes hormonaux naturels , par des mcanismes molculaires variables en mimant et/ou en bloquant les R dune hormone / liaison sa prot transporteuse ou / blocage des R.
Consquences: Perturbation de la maturation sexuelle et du dveloppement des organes reproducteurs. Malformation des gonades. Cancers hormono-dpendants.
47 2. Action indirecte A. Effet sur la fertilit : 2. La leuprorline: est un nanopeptide de synthse analogue agoniste de la Gn-RH naturelle. Indication: pour le traitement du cancer de la prostate hormono- dpendant un stade avanc.
Mcanisme daction: 1er temps : augmentation de la production de la testostrone. 2me temps : ladministration prolonge entraine une inhibition de la scrtion gonadotrope (diminution de la scrtion de LH) Supprimant par consquent, les fonctions testiculaires chez lhomme: (atrophie testiculaire, douleur testiculaire, strilit). Chez la femme, latrophie de lendomtre utrin est un effet li la diminution de sensibilit du R la GN-RH, qui provoque une diminution de LH et FSH qui est lorigine dun hypogonadisme. 48 2. Action indirecte A. Effet sur la fertilit : Action sur SNA B. Effet sur le dveloppement pr et post-natal :
49 B1- Avortement B3- Tratognse B2- Cancrogense B. Effet sur le dveloppement pr et post-natal
Une conception sur deux se termine par un avortement (2). 10-15% des grossesse se terminent par une fausse couche. Taux maximal de ltalit : entre 0J-14J. Priode pr-implantatoire et la diffrentiation cellulaire nest pas encore ralise. Sous laction dun toxique loeuf peut mourir et tre expuls.
Pb: est ftotoxique et peut tre responsable de mort in utro, de prmaturit ou de troubles de dveloppement crbral.
Chez le rat, lactinomycine administre la femelle gestante ds la fcondation a une action abortive mais non tratogne, par contre administr aprs limplantation entre le 7 et 9me jour ,elle se montre tratogne (Le type de malformation dpend strictement de la priode dadministration).
50 B1- Avortement B. Effet sur le dveloppement pr et post-natal
Lapparition dune volution cancreuse chez le jeune suppose une anomalie trs prcoce du DNA et doit avoir un rapport intra-utrin. (post natal) ?
51 B2- Cancrogense B. Effet sur le dveloppement pr et post-natal L'embryognse: 13me au 58me jour de grossesse. C'est la priode de morphognse ou organogense (seule la formation de l'appareil gnital externe et la maturation du systme nerveux central dbordent le 58me jour). C'est une priode critique : c'est ce moment que les xnobiotiques peuvent provoquer des malformations, c'est-- dire une tratognse (14). Les malformations qui en rsultent peuvent tre irreversibles, viables ou ltales (2). Tout les organes, ne sont pas sensibles au meme moment de la grossesse. Leffet tratogne varie en fonction de lintensit et la dure dexposition (2).
52 B3- Tratognse
53 B. Effet sur le dveloppement pr et post-natal 54 B2- Tratognse
55 B. Effet sur le dveloppement pr et post-natal Mcanisme :
1. interfrence avec lADN ; 2. Diminution de lapport denergie et dosmolarit ; 3. Inhibition enzymatique ; 4. Autres modes dactions. 56 B3- Tratognse B. Effet sur le dveloppement pr et post-natal Mcanisme : 1. interfrence avec lADN : De nombreux agents tratognes interfrent pendant la rplication, la transcription des acides nucliques ou durant la translation de lARN. Ex: les agents alkylants (Chlorambucil), les agents dintercalation (Ethidium). Certaines de ces molcules sont actives par elle-mme, dautres ncessitent une bioactivation comme les aflatoxines et la thalidomide.
57 B3- Tratognse B. Effet sur le dveloppement pr et post-natal Mcanisme daction de la thalidomide :
La thalidomide induit la formation de radicaux libres qui perturberaient lquilibre complexe des facteurs paracrines de transcription impliqus dans la diffrenciation du membre : exacerbation de lapoptose.
58 B3- Tratognse B. Effet sur le dveloppement pr et post-natal Mcanisme : 2. Diminution de lapport denergie et dosmolarit : Certains tratognes peuvent modifier lapport dnergie ncessaire au mtabolisme gnral en diminuant la disponibilit des substrats, soit directement (carence alimentaires), soit par la prsence danalogues ou dantagonistes des vitamines ou des acide amins essentiels.
Une hypoxie ou des molcules induisant cette hypoxie (CO,CO 2 ) peuvent aussi tre tratogne par modification des voies mtaboliques de lO 2
indispensable ou par production de dsquilibres osmotiques, ces phnomnes provoquent des dmes et des hmatomes qui seront cause de distorsion et dischmie tissulaire.
59 B3- Tratognse B. Effet sur le dveloppement pr et post-natal Mcanisme : 3. Inibition enzymatique : 5-fluoro uracile peut provoquer des malformations par interfrence avec la croissance et la diffrenciation du fait de linhibition de la thymidylate synthtase. 6-amino nicotinamide inhibiteur de la glucose-6-P deshydrognase.
60 B3- Tratognse B. Effet sur le dveloppement pr et post-natal Acide valproique : Par inhibition des actylase des histones. Le syndrome dexposition lacide valproque associe des anomales craniofaciales mineures et ,le cas chant, des anomalies viscrales svres (spina bifida ++). 61 B3- Tratognse B. Effet sur le dveloppement pr et post-natal L'aspirine et les anti-inflammatoires non- strodiens (AINS) sont contre-indiqus ds le 6 me
mois de la grossesse. Par leur effet inhibiteur de la COX, Ils peuvent entraner une fermeture partielle du canal artriel du ftus (un vaisseau important pour la circulation ftale). 62 B3- Tratognse B. Effet sur le dveloppement pr et post-natal Mcanisme : Autres modes daction : Lhypervitaminose A peut tre associ des lsions ultrastructurales des membrane cellulaires de lembryon chez les rongeurs. Ce mcanisme pourrait expliquer le caractre tratogne de la Vit A. Des agents physiques comme les radiations, hypo/hyperthermie, les traumatismes dorigine mcanique peuvent aussi tre responsables de malformations structurales.
63 B2- Tratognse C. Effet duarant la lactation :
Diffrentes substances sont excrtes dans le lait maternel: Nicotine, dioxine; plomb ; mdicaments: tolune ; AVK, perchlorthylne. Mais leur consquences sur lenfant allait et sur lallaitement sont mal connues. 64 1. Exprimentale : A. In vivo ; B. In vitro. 2. Diagnostic : A. Strilit masculine ; B. Strilit fminine ; C. Diagnostic pr-natal. 65 IV. Evaluation Les autorits sanitaires ont mis en place des rglementations spcifiques. Rglementation REACH pour les substances chimiques. Utilise les protocoles de lOCDE. ICH pour les substances mdicamenteuses pour se conformer lensemble des requetes internationales en matire dvaluation de la toxicologie de la reproductionet du developpement (ICH 5S (R2)). 66 IV. Evaluation 1. Exprimentale In vivo LD OCDE 414 : tude de toxicit pour le dveloppement pr-natal : But : valuer les proprits toxiques vis-vis du developpement prnatal de la substance teste, cd les effets sur la mre, les pertes pr- ou postimplantatoire, la mortalit foetale, les anomalies structurelles ou les altrations de la croissance du foetus. Animaux dexprience: Les animaux prfrs sont le rat et le lapin. Trois groupes (trois doses) de traitement et un groupe tmoin (vhicule). Voie dadministration : Oralement par intubation. Programme exprimentaux : Administration a des femelles gravides en priode dorganogense : de limplantation jusqu la veille du sacrifice. On sacrifie habituellement un jour avant la parturition. Les foetus sont extraits par csarienne. Nombre des animaux : On doit choisir un nombre suffisant danimaux par groupe, afin dautopsier environ 20 femelles.
67 IV. Evaluation 1. Exprimentale In vivo Observations : Pendant ltude : signe de toxicit, poid corporel, consommation de nourriture. Examen terminal de la mre : autopsie, valuation macroscopique de tous les organes, particulirement lutrus (poids de lutrus gravide, nombre de corps jaunes) et le placenta. Examen terminal du foetus vivant et mort (poids, sexe, malformations, anomalies du squelette et des tissus mous). Rapport et donnes : les rsulats seront valus selon les effet observs chez le foetus et la mre et en fonctions de lincidence et a svrit des effet. 68 IV. Evaluation 1. Exprimentale In vivo LD OCDE 415 : tude de toxicit de la reproduction sur une gnration: But : Evaluer les effets dune substance teste sur les performances de reproduction des mles et des femelles, telles que la fonction gnitale, le cycle oestral, comportement lors de lacouplement, la conception, la gestation, la parturition, la lactation et le sevrage. Animaux dexprience : Au moins une espce, gnralement le rat. Il est conseill dutiliser un nombre suffisant danimaux afin dobtenir au moins 20 femelles gravides. Programmes exprimentaux : Application en phase de gamtogense, avant laccouplement : 3 semaines pour les rats femelles et 10 semaines pour les rats mles. Le traitement se poursuit pendant laccouplement, puis jusquau sevrage des nouveaux ns femelles. Les mles seront sacrifis aprs laccouplement et les femelles aprs sevrage.
69 IV. Evaluation 1. Exprimentale In vivo Observation : Pendant ltude : on observe les signes de toxicit, mortalit, comportement pendant la gestation, poids corporel, consommation de la nourriture, dure de la gestation, parturition. Aprs la naissance : mortalit la naissance, nombre et sexe des petits, poid la naissance, puis 4jours, puis chaque semaine jusqu la fin de ltude, developpement physique, malformation ou anomalie, fonctions sensorielles et rflexes. Examen terminal : examens macroscopiques des adultes et des nouveaux ns, examens histologiques des organes de la reproduction des adultes, isolement des autres organes pour des examens histologiques eventuels. Rapport et donnes : On value les rsultats en fonction des effets, des doses auxquelles on observe des effets. Doit fournir une estimatimation satisfaisante dune dose sans effets, et value les effets nocifs sur la reproduction. 70 IV. Evaluation 1. Exprimentale In vivo LD OCDE 416 : tude de toxicit de la reproduction sur deux gnrations : But : evaluer leffet dune substance sur lintgrit et le fonctionnement des appareils reproducteurs mmes et femelles, ainsi que la croissance et le dveloppement de la dscendance. Animaux : Au moins une espce, gnralement le rat. Il est conseill dutiliser un nombre suffisant danimaux afin dobtenir au moins 20 femelles gravides. Trois groupes danimaux et un groupe tmoins. Programmes exprimentaux : Substance administre au cours de la gamtogense avant laccouplement : durant plusieurs cycle oestraux et un cycle de spermatigense pour les mles (70 jours chez le rat, 56 jours chez la souris). Les parents gnration P continuent a tre trats pendant la priode de laccouplement, de gravidit, et jusquau sevrage des nouveaux ns. Aprs sevrage les nouveaux ns gnration F1 sont eux aussi trats puis accoupls entre eux (la procdure est identique). 71 IV. Evaluation 1. Exprimentale In vivo Observation : Pendant ltude : Signes de toxicit, mortalit, poids corporel, comportement pendant la gestation, dure de la gestation, consommation de la nourriture, parturition. Aprs la naissance : Mortalit la naissance, nombre et sexe des nouveaux ns, poids la naissance et au jour 4, puis chaque semaine jusqu la fin de lallaitement, developpement physique, malformation et anomalies, activit rflexe, fonction sensorielle, etc. Examen terminal : Examen macroscopique des adultes et des nouveaux ns, pese des organes de la reproduction des et (P, F1), pese du cerveau rate thysmusdes peitis (P, F1) destins lautopsie. Examens histologiques des organes de la reproduction. Rapport et donnes : Les seront valus en fonctions des effets observs, des doses auxquelles on observe les effets. Permettent de dfinir la dose sans effets. 72 IV. Evaluation 1. Exprimentale In vivo LD OCDE 421 : essais de dpistage pour la toxicit pour la reproduction et le dveloppement :
But : Obtenir une premire srie dinformations sur les effets possibles dune substance sur les performances de la reproduction chez le mle et la femelle. Elle ne remplace pas les LD 414, 415, 416.
73 IV. Evaluation 1. Exprimentale In vivo ICH : Segment I effets sur la fertilit But : dterminer leffet dun produit administr avant, pendant accouplement (femelles et males) et jusqu limplantation de luf dans lutrus, sur le comportement sexuel et la fertilit.
Segment II dveloppement embryonnaire But : dterminer leffet dun produit administr des femelles gestantes pendant la priode dorganogense.
Segment III dveloppement pr et post natal But : produit administr aux femelles gestantes pendant lorganognes et pendant la lactation, voir si il y a des effet indsirables sur la gestation, la parturition, la lactation et la fertilit des jeunes.
74 IV. Evaluation 1. Exprimentale In vivo
Culture cellulaire : Cellules de Sertoli et cellules Leydig germinales pour valuer la toxicit testiculaire Ovocytes.
Culture de tissu : Cultures dovaire: tudes des scrtions ovariennes. 75 IV. Evaluation 1. Exprimentale In vitro Intrrogatoire :
Antcdents : infertilit, anomalies de migration testiculaire, TRT hormonaux (andrognes, strognes) ou chirurgicaux (hernie, varicocle). Profession et habitudes alimentaires (s/ , suralimentation, thylisme) et comportement sexuel.
76 IV. Evaluation 2. Diagnostic A. Strilit masculine Examen clinique :
Etat gnral/vasculaire/neurologique/mtabolique/n utritionnel/endocrinien. Examen de l'appareil gnital : prcise l'tat des testicules (sige, volume, consistance) et du scrotum.
77 IV. Evaluation 2. Diagnostic A. Strilit masculine 1. Spermogramme : affirme une strilit. 2. Test de pntration croise : permet : Apprcier la capacit de migration des SPZ dans les voies gnitales fminines. Observer in vitro le comportement (pntration et survie) du sperme du sujet dans la glaire cervicale de sa femme et dans une glaire tmoin et celui d'un sperme tmoin dans la glaire de la femme. 3. Dosages : par radio immunologie de :FSH /Testostrone/Prolactinmie / test au LH-RH. 4. Biopsie testiculaire : est un geste dangereux. 5. Dfrentographie: localise l'obstacle au niveau des canaux jaculateurs, ou dans le canal inguinal. 78 IV. Evaluation 2. Diagnostic A. Strilit masculine Classification L'infcondit primaire (femme n'ayant jamais eu de gestation ) L'infcondit secondaire : dsigne le fait d'avoir dj eu une grossesse.
L'interrogatoire : L'anciennet de l'infcondit du couple ; La contraception utilise ; Notion de prise de mdicaments ; Les problmes professionnels.
79 IV. Evaluation 2. Diagnostic B. Strilit fminine Examen Physique : L'examen de l'appareil gnital par le toucher vaginal ; L'examen des seins avec mise en vidence d'une galactorrhe ; La vrification de la glaire cervicale ; L'ouverture du col. Examen biologique : Les dosages hormonaux : FSH, LH, stradiol et andrognes au 2 me j du cycle. Progestrone et prolactine au 22e jour. LHystrosalpingographie Cet examen permet d'analyser l'anatomie de l'appareil gnital interne. Dtecter les anomalies constitutionnelles ou acquises.
80 IV. Evaluation 2. Diagnostic B. Strilit fminine Echographie obsttricale : Cest une technique dimagerie employant des ultrasons mis par une sonde; renvoys par le ftus et analyss par systme informatique les traduisant en images. 1 er trimestre : Dtermination de la vitalit de la grossesse. Dpistage prcoce de certaines malformations. Localisation de la grossesse en reprant luf afin de sassurer de sa situation intra- utrine. Dtermination du nombre dembryons. Ralisation dune biomtrie pour une datation prcise de la grossesse. 2 me trimestre: Dpistage des malformations ftales. Contrle du bon dveloppement ftal. 3 me trimestre: Apprciation de la croissance et du bien-tre du ftus. Etude de la morphologie ftale.
81 IV. Evaluation 2. Diagnostic C. Pr-natal
Les tudes de la toxicit de la reproduction font partie des tudes rglementaires demandes, dans le dossier dAMM.
Les diffrents types dtude segment I, II, et III couvrent les domaines de fertilit, gestation, lactation et permettent ainsi un maximum de scurit pour le passage aux tudes chez lhomme et la commercialisation de nouveaux mdicaments.
82 V. Conclusion BIBLIOGRAPHIE : (1) Gaelle Rivire. De la conception la grossesse, les substance reprotoxique. La semaine sant scurit au travail. 2009 (2) Alain viala, Alain Botta. Toxicologie. 2 e dition. (3) FrancK Lu. Toxicologie Gnrale 1991. (4) 14. Amine Belmouden. Mdicament et grossesse. Esprance Mdicale Octobre 2011, Tome 18, N 182. (5) Stadler J, Lafon D. Reprotoxicit rglementaire : REACH et ICH. EMC Volume 7, Octobre 2012. (6) 17. Manuel MARK, interactions gntiques et pigntique des substances tratognes. Institut dEmbryologie Institut de Gntique et de Biologie Molculaire et Cellulaire Hpital Universitaire de Strasbourg. (7) INRS, fiche toxicologique de loxyde dthylne. (8) 9. TERRY T et al. Oxidative Stress: A Common Factor in Testicular Dysfunction. Journal of Andrology, Vol. 29, No. 5, September/October 2008. 83