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Este documento describe un experimento para determinar el punto isoeléctrico de varias proteínas. Los estudiantes midieron el pH en el que la caseína, la gelatina y la ovoalbúmina precipitaron, lo que indica que estaban en su punto isoeléctrico con una carga neta de 0. El punto isoeléctrico de la caseína fue de pH 5, de la gelatina fue de pH 4.8 y de la ovoalbúmina fue de pH 4-5.
Este documento describe un experimento para determinar el punto isoeléctrico de varias proteínas. Los estudiantes midieron el pH en el que la caseína, la gelatina y la ovoalbúmina precipitaron, lo que indica que estaban en su punto isoeléctrico con una carga neta de 0. El punto isoeléctrico de la caseína fue de pH 5, de la gelatina fue de pH 4.8 y de la ovoalbúmina fue de pH 4-5.
Este documento describe un experimento para determinar el punto isoeléctrico de varias proteínas. Los estudiantes midieron el pH en el que la caseína, la gelatina y la ovoalbúmina precipitaron, lo que indica que estaban en su punto isoeléctrico con una carga neta de 0. El punto isoeléctrico de la caseína fue de pH 5, de la gelatina fue de pH 4.8 y de la ovoalbúmina fue de pH 4-5.
Licenciatura: Qumico Farmacobilogo Equipo 1 Practica N3 Punto Isoelctrico de Protenas DE JESUS FLORES EDGAR GONZLEZ SNCHEZ VIRIDIANA, SOSA VARGAS LUCIA
INTRODUCCIN: Los grupos cido (-COOH) y bsico (-NH 2 ) de los aminocidos otorgan a las protenas un carcter cido-base o anfotrico. La carga total de las protenas depende del pH del medio y del nmero relativo de cada aminocido en la molcula.
El valor de pH en el que la carga neta de la protena es igual a cero, la suma de las cargas negativas iguala a la sima de las cargas positivas, a este pH se le llama punto isoelctrico o pH isoelctrico de la protena (pI).
El pH de la solucin afecta a su solubilidad, cuando la solucin se encuentra en el punto isoelctrico de la protena, sta pierde su carga neta y precipita.
La presencia de disolventes orgnicos tambin afecta a la solubilidad porque disminuye la capacidad de los disolventes acuosos para separar y solubilizar los grupos cargados de los aminocidos.
PUNTO ISOELECTRICO: El pH en el que precipitan las protenas se denomina punto isoelctrico (pI), ya que se encuentran en el equilibrio las cargas positivas y negativas presentando una carga neta de 0 y la protena presenta su mxima posibilidad para ser precipitada ya que la partculas se agregan. Debido a la composicin en aminocidos de la protena, los radicales libres pueden existir en tres formas dependiendo del pH del medio: catinicos, neutros y aninicos, y as cada protena tendr un pI diferente.
SOLUBILIDAD DE PROTEINAS: las protenas en disolucin se ven afectadas en su solubilidad por:
pH: El cambio de pH de la solucin en que se encuentre la protena promueve cambio en las cargas de los residuos y por lo tanto un cambio de carga total de la protena. Cuando el nmero de cargas positivas es igual al nmero de cargas negativas se dice que la protena se encuentra en su pH isoelctrico y presentan el mnimo de solubilidad ya que no hay repulsin de electrosttica entre las molculas.
Fuerzas de ionizacin: la solubilidad de las protenas en solucin est influenciada por la fuerza inica que est presente, a mayor fuerza inica menor solubilidad de las protenas y a menor fuerza inica mayor solubilidad de las protenas.
La polaridad del disolvente disminuye cuando se le aaden sustancias menos polares que el agua como el etanol o la acetona. Con ello disminuye el grado de hidratacin de los grupos inicos superficiales de la molcula proteica, provocando la agregacin y precipitacin. Los disolventes orgnicos interaccionan con el interior hidrofbico de las protenas y desorganizan la estructura terciaria, provocando su desnaturalizacin y precipitacin. La accin de los detergentes es similar a la de los disolventes orgnicos.
Temperatura: Las protenas se encuentran en constante movimiento, un aumento en la temperatura hace que este movimiento aumente y por lo tanto la protena interacciona mejor con el agua mantenindose soluble. El rango de temperatura que permite la solubilidad de las protenas se encuentra entre 0 C y 40 C.
La casena es una protena conjugada de la leche del tipo fosfoprotena que se separa de la leche por acidificacin y forma una masa blanca. Las fosfoproteinas son un grupo de protenas que estn qumicamente unidas a una sustancia que contiene cido fosfrico. En la casena la mayora de los grupos fosfato estn unidos por los grupos hidroxilo de los aminocidos serina y treonina. La casena representa cerca del 77% al 82% de las protenas presentes en la leche y el 2,7% en composicin de la leche lquida.
OBJETIVO: 1. Determinar el pI de diferentes protenas. 2. Observar el efecto del alcohol como agente precipitante. Material Reactivos 25 Tubos de Ensaye 1 Gradilla 1 Pipeta 5 ml 1 Pipeta de 10 ml 1 Pipeta de 1 ml Caseinato de Sodio 0.1 N Gelatina al 1.0% Ovoalbmina en KCl 1:16 cido Actico 0.01 N, 0.1 N, 1.0 N Agua destilada NaOH 1.0 Acetato de Sodio 0.1 N Alcohol etlico CONCLUSIN Las protenas precipitan cerca a su punto isoelctrico debido a que sus cargas elctricas son estables, a diferencia de las protenas que se encuentran por arriba o por debajo de ste valor de pH, las cuales interactan con los iones del disolvente y de ste modo sus cargas son estabilizadas.
La presencia de sales a determinada concentracin, tambin influye en la solubilidad de la protena, debido a que los iones de dichos compuestos compiten con los grupos ionizados de las protenas por interaccionar con los iones del agua o del disolvente.
CUESTIONARIO:
1. Defina el pI de una Protena La carga total de la molcula proteica, depende pues, del pH de la solucin y del nmero relativo de cada aminocido en la molcula. As, cuando el pH de la solucin es tal que la carga neta de la molcula proteica es cero, es decir, cuando el nmero total de cargas negativas iguala al nmero total de cargas positivas presentes en la molcula, se llama a ste valor de pH, punto isoelctrico o pH isoelctrico de la protena.
Las protenas son molculas anfteras, es decir, segn el nmero relativo de grupos carboxilo y aminos libres, en solucin darn reaccin cido o alcalina .En otras palabras, algunas molculas se cargarn positivamente y otras negativamente
El pH al cual una protena determinada es elctricamente neutra se conoce como punto isoelctrico. Todas las protenas son menos solubles cuando se encuentran en su punto isoelctrico
2. Escriba la ecuacin de Henderson Hasselbach Se utiliza para calcular el pH de una solucin buffer o tampn, a partir del pka (la constante de disociacin del cido) y de las concentraciones de equilibrio del cido o base, del cido o la base conjugada.
La gelatina exhibe una conducta anfotrica debido a la presencia de grupos funcionales de aminocidos y grupos amino y carboxil terminales. En medios acdicos, es decir en presencia de altas concentraciones de iones H+, la gelatina tiene carga positiva. En medios alcalinos, es decir en presencia de iones OH-, la gelatina tiene carga negativa. En el punto isoelctrico (IEP) las cargas positivas de los radicales NH3+ igualan a las cargas negativas de los radicales COO-.
Esta es la conocida ecuacin de Henderson-Hasselbalch que se utiliza a menudo para realizar los clculos que requiere la preparacin de disoluciones tampn en el laboratorio, o para otras aplicaciones.
3. Por qu el alcohol acta como agente precipitante para la gelatina? La gelatina, es una mezcla heterognea de protenas, de alto peso molecular, todas son protenas solubles en agua, y el agua esta incorporada dentro de las molculas individuales de los aminocidos, lo que hace su carcter de gel. Al agregar suficiente alcohol etlico, se rompen las uniones de las molculas, pues el agua se mezcla con el alcohol, y las protenas precipitan, adems de no ser solubles en alcohol. Si en una solucin acuosa saturada, agregas un nuevo soluto (en este caso etanol) que tiene un mayor producto de solubilidad que el soluto presente (gelatina), este tiende a ser desplazado de la solucin y precipita.
Determinacin de pH de Casena Nmero de Tubo pH=pK + log(base/cido) Concentracin de Acido Concentracin de Base C1V1=C2V2 C1V1=C2V2 (0.1N)(0.62ml)=C2(10ml) (0.1N)(1ml)=C2(10ml) pK pH 1 C2=6.4x10-4 C2=0.01 4.76 5.96 2 C2=1.25x10-3 C2=0.01 4.76 5.62 3 C2=2.5x10-3 C2=0.01 4.76 5.36 4 C2=5x10-3 C2=0.01 4.76 5.06 5 C2=0.01 C2=0.01 4.76 4.76 6 C2=0.02 C2=0.01 4.76 4.45 7 C2=0.04 C2=0.01 4.76 4.15 8 C2=0.08 C2=0.01 4.76 3.85 9 C2=0.16 C2=0.01 4.76 3.55 Determinacin de pH de Gelatina Nmero de Tubo pH=pK + log(base/cido) Concentracin de Acido Concentracin de Base C1V1=C2V2 C1V1=C2V2 (0.1N)(0.12ml)=C2(8ml) (0.1)(2)=C2(8) pk pH 1 C2=1.5x10-3 C2=0.025 4.76 5.98 2 C2=3.125x10-3 C2=0.025 4.76 5.66 3 C2=6.25X10-3 C2=0.025 4.76 5.36 4 C2=0.0125 C2=0.025 4.76 5.06 5 C2=0.025 C2=0.025 4.76 4.76 6 C2=0.05 C2=0.025 4.76 4.45 7 C2=0.1 C2=0.025 4.76 4.157 8 C2=0.225 C2=0.025 4.76 3.803 9 C2=0.4 C2=0.025 4.76 3.5 pH de Olvoalbumina N de tubo pH 1 8 2 7 3 5 4 4 5 4 6 3.4 7 2.8 Determinacin de P.I. de Casena N de tubo Turbidez Precipita cin 1 0 2 0 3 + 4 ++ 5 ++++ 6 ++++ X 7 +++ 8 ++ 9 0 Determinacin de P.I. de Ovoalbmina N de tubo Turbidez 7 0 6 0 5 + 4 + - X 3 + - X 2 ++ - XX 1 ++ - XX Determinacin de P.I de Gelatina N de tubo Turbidez Precipitac in 1 + 2 + 3 + 4 + 5 +++ X 6 ++ 7 + 8 + 9 ++ pH TEORICO DE PROTEINAS Protena pH Casena 4.6 gelatina 6.3- 9.2 Ovoalbmina 7 -9 DISCUSIN DE RESULTADOS: Las protenas presentaban mayor precipitacin y turbidez en los tubos en los que el pH se encontraba ms cercano a su valor de pI.
El valor de pH es modificado por la influencia del cido actico o del acetato de sodio que se encuentra en la solucin, por lo que a diferentes concentraciones y cantidad de los reactivos, el pH de las soluciones ser diferente y la apariencia de la solucin cambiar.
En el caso de la Casena el P.I. lo determinamos en los tubos 5 y 6 puesto que fueron los tubos en el que presenta ms turbidez adems de presentar fragmentos precipitados, son los que mas se acercan al P.I. terico que es 4.6.
En el caso de gelatina la mayor turbidez la encontramos en el tubo 5, aqu hubo una mayor diferencia ya que el P.I. terico que se reporta es de 6.3 y el obtenido fue de 4.76, hay una diferencia de 1.54.
Y por ltimo el caso experimental de la ovoalbmina, los tubo que tuvieron la mayor turbidez fueron 1 y 2, revelndonos que el punto isoelctrico se encuentra en algunos de estos dos tubos, se acercan mucho al P.I. terico que es de 7 - 9. RESULTADOS: