NUTRICION

MICROBIANA
Nutricin y factores de
crecimiento de microorganismos
Prof. Sandra Rivas Z.
Introduccin
La fisiologa microbiana comprende el estudio de las
funciones realizadas por los mismos.

Los microorganismos (m.o) son muy eficientes
fisiolgicamente, sintetizan en forma muy rpida sus
componentes celulares, siendo la mayora
autosuficientes a pesar de su simpleza estructural.

En los m.o se desencadenan una serie de procesos
qumicos que en conjunto constituyen el


Metabolismo Microbiano
Nutrientes
Son sustancias que se emplean en la
biosntesis y produccin de energa.

Son necesarios para el crecimiento
microbiano.
C,O,H,N, S y P
Son componentes de carbohidratos, lpidos,
protenas y cidos nucleicos.
Carbono
Fuente de energa y/o compuestos para biosntesis.
Nitrgeno y azufre
Se encuentra en las clulas en forma reducida como
grupos amino y sulfhidrilo. Lo asimilan en forma
reducida, aunque algunos m.o. los toman en forma
oxidada. Sulfatos, nitratos, peptonas (N y S) y
cisteina.
Fijacin de N
2
(N
2
NH
3
)

Monmeros Macromolculas Estructuras
celulares
Monosacridos


Aminocidos





cidos grasos

Bases nitrogenadas
Polisacridos


Protenas





Lpidos

cidos nucleicos
Pared celular
Glicoclix

Membrana
Ribosomas
Flagelos
Pelos y fimbrias
Enzimas

Membranas

Cromosoma
Ribosomas
Plsmidos

La nutricin microbiana consiste en aportar a las clulas los
ingredientes qumicos necesarios para la sntesis de
monmeros, que son los componentes de las macromolculas,
y a su vez construyen las estructuras celulares.

Macronutrientes o macroelementos
Son captados por los m.o. en
cantidades relativamente grandes
95% de la clula microbiana esta
constituido por C, O, H, N, S, P, K,
Ca, Mg y Fe.

Nutricin microbiana
Elemento ms abundante en las macromolculas. Constituye el
50% del peso seco de las clulas. Muchos m.o. son hetertrofos.
Necesitan algn tipo de compuesto orgnico como fuente de
carbono para hacer nuevo material celular.

Aminocidos, cidos grasos, cidos orgnicos, azcares, bases
nitrogenadas, compuestos aromticos y otros compuestos
orgnicos pueden ser utilizados por m.o.

Algunos m.o. son auttrofos, capaces de construir todas sus
estructuras orgnicas a partir del CO
2
con la energa obtenida de
la luz o de compuestos inorgnicos.

C
macronutrientes
Nutricin microbiana
En una bacteria tpica, alrededor del 12% de su peso
seco es N.

Forma parte de las protenas, cidos nucleicos y otros
constituyentes celulares.

En la naturaleza, se encuentra en forma orgnica e
inorgnica. Pero la mayor parte del N natural se
encuentra en forma inorgnica ( NH
3
, NO
3
-
o N
2
).

La mayora de las bacterias son capaces de utilizar
NH
3
como nica fuente de N, y otras muchas pueden
utilizar NO
3
-
.

El N
2
puede ser usado como fuente de nitrgeno por
algunas bacterias, las bacterias fijadoras de
nitrgeno.

N
macronutrientes
Nutricin microbiana
macronutrientes
El P se presenta en la naturaleza en forma de fosfatos orgnicos e
inorgnicos.
La clula necesita P para la sntesis de cidos nuclecos y
fosfolpidos.

El S es un componente de los aminocidos cis y met y se
encuentra en algunas vitaminas, como tiamina, biotina, cido
lipoico y Coenzima A.
La mayora del S celular procede de fuentes inorgnicas, ya sean
sulfatos o sulfuros.

El K es necesario para todos los organismos. Es cofactor de
muchas enzimas.

El Mg funciona como estabilizador de los ribosomas, las
membranas celulares y los cidos nuclecos. Tambin se necesita
para la actividad de muchas enzimas.

El Ca ayuda a estabilizar la pared celular bacteriana y tiene una
funcin importante en la termorresistencia de las endoesporas.

El Na es requerido por algunos microorganismos (halfilos)
P




S




K


Mg



Ca

Na
Macronutrientes: K, Ca, Mg y Fe.

Se encuentran en la clula en forma de cationes necesarios para
actividades enzimticas, sntesis de protenas (K
+
), termoresistencia de
endosporas (Ca
2+
), cofactores de enzimas.

Forma complejos con el ATP y estabiliza los ribosomas y las
membranas celulares (Mg
2+
).

Forma parte de los citocromos, cofactor de enzimas y de protenas
transportadoras de electrones (Fe
2
+ y Fe
3+)
.


Es fundamental en la respiracin celular.

Forma parte de los citocromos y de protenas que contienen Fe y
S implicados en el transporte de electrones.

En condiciones anaerbicas, el Fe se encuentra en el estado de
oxidacin +2 (Fe
+2
) y es soluble.

En condiciones aerbicas suele estar en el estado de oxidacin
+3 ( Fe
+3
) y forma varios minerales insolubles.

Para obtener el Fe de minerales, las clulas producen agentes
quelantes llamados siderforos que solubilizan el Fe y lo
introducen en la clula.

Es necesario en mayores cantidades que otros metales y no se
considera un elemento traza.
Nutricin microbiana
Fe
Micronutrientes o microelementos u
oligoelementos
Mn, Zn, Co, Mo, Ni y Cu

Son aquellos que se requieren en cantidades tan
pequeas que contaminantes presentes en agua,
y otros componentes del medio de cultivo son
suficientes.

Son normalmente parte de enzimas y cofactores,
facilitan la catlisis de reacciones y
mantenimiento de la estructura de protenas.



Nutricin microbiana
Micronutrientes (elementos traza)

Co, Cu, Mn, Mo, Ni, Se, W, V, Zn.

Se requieren en muy pequeas cantidades.

Son tan importantes para el funcionamiento celular
como los macronutrientes.

Muchos son metales que actan como cofactores
de enzimas.

A menudo no es necesario aadirlos a los medios
de cultivo.

Si el agua utilizada para elaborar el medio es
ultrapura se aade al medio una pequea cantidad
de una solucin de metales traza.
Nutricin microbiana
Son compuestos orgnicos que se necesitan en muy pequeas
cantidades y slo por algunas clulas.

Son vitaminas, aminocidos, purinas y pirimidinas.

La mayora de los microorganismos son capaces de sintetizar estos
compuestos, pero en algunos casos es necesario aadirlos al
medio.

Las vitaminas son los factores de crecimiento que se necesitan con
mayor frecuencia, funcionan formando parte de coenzimas.

Las principales vitaminas requeridas por los microorganismos son:
tiamina (vitamina B
1
), biotina, piridoxina (vitamina B
6
) y
covalamina (vitamina B
12
)
Factores de crecimiento
Factores de crecimiento
Son sustancias precursoras de ciertos
constituyentes orgnicos de la clula que el m.o.
es incapaz de sintetizar, generalmente se
requieren en pequeas concentraciones.
Aas , protenas
purinas y pirimidinas, cidos nucleicos
Vitaminas, grupos prosteticos o centros activos de ciertas
enzimas.



Clasificacin microbiana segn:

a. Fuente de energa
Fototrofos: energa solar
Quimiotrofos: compuestos qumicos

b. Fuente de carbono
Autotrofos: CO
2
Si utilizan CO
2
+ Luz solar = fotoautotrofos
Si utilizan CO
2
+ compuestos qumicos = quimioautotrofos

Heterotrofos: Compuestos orgnicos preelaborados
Si utilizan compuestos orgnicos + Luz solar = fotoheterotrofos
Si utilizan cptos orgnicos + cptos qumicos = quimioheterotrofos

Auxotrofos: M.O. que han perdido la habilidad de sintetizar una enzima
particular, por mutaciones, requieren sustancias especiales.
Prototrofos: Son formas no mutantes, normales o de tipo salvaje


Curva de crecimiento de un m.o. en
medio de cultivo lquido
Crecimiento de poblaciones
Crecimiento exponencial: es el tipo de crecimiento de una
poblacin donde el nmero de clulas se duplica cada
cierto tiempo
CINETICA DEL CRECIMIENTO
MICROBIANO
nmero de generaciones (n): cantidad de generaciones
celulares producidas en un determinado periodo de
tiempo
n= Log
10
N
f
Log
10
No # de cel/mL
0,301
N
f
= No x 2
n

N
o
= poblacin inicial
N
f
= poblacin al tiempo t
n = nmero de generaciones en el tiempo t



velocidad o tasa de crecimiento (k):
rapidez del crecimiento poblacional,
(medida en gramos de biomasa/hora)
k=n/t generacin/hora

tiempo de generacin (g): tiempo que
necesita una clula o poblacin para
dividirse
g=t/n horas/generacin
CINETICA DEL CRECIMIENTO
MICROBIANO


Crecimiento microbiano
Factores fsicos:

a) pH: Es un parmetro crtico en el crecimiento de
microorganismos ya que cada tipo de microorganismo tiene
un rango de pH en el que puede vivir adecuadamente, fuera
de este rango muere.

Acidfilos: < de 5.4 ej: Lactobacillus, Thiobacillus
Neutrfilos: 5.4 8.5 ej: Escherichia coli
Alcalinfilos: 7 11.5 ej: V. cholerae, Agrobacterium

b) Temperatura

Temperaturas cardinales: T mnima, T ptima, T mxima

Termfilos extremos: >80C
M.O. SEGN LA TEMPERATURA
c) Oxgeno

Aerobios Obligados ej: Pseudomonas
Facultativos ej: Escherichia coli
Microaerfilos ej: Campylobacter
Anaerobios Obligados ej: Bacteroides
Facultativos ej: Lactobacillus

Formas Txicas Enzimas
Anin superxido: O
-
2
Superxido dismutasa
Perxido de H: H
2
O
2
catalasa, peroxidasa
Radical hidroxilo: HO
-
Crecimiento microbiano
aerobios
estrictos
Microaero-
filico
anaerobios
estrictos
anaerobios
facultativos
anaerobios
aerotolerantes


Crecimiento microbiano
Enzimas bacterianas relacionadas con el oxgeno
Tipo de
microorganismo
catalasa Superoxido
dismutasa
comentarios
Aerobios y
anaerobios
facultativos
presente presente Toleran el O
2

neutralizando
todas sus formas
txicas
Anaerobios
aerotolerantes
ausente presente Toleran el O
2

neutralizando
parcialmente sus
formas txicas
Anaerobios
estrictos
ausente ausente No toleran el O
2
,
no neutralizan
sus formas
txicas


Crecimiento microbiano
d) Humedad
Mohos 70%
Bacterias 100%
Levaduras 85%

e) Presin osmtica e hidrosttica
Plasmolisis: retraccin del contenido celular cuando el
ambiente es hiperosmtico
ej: uso de sal como preservativo
Bacterias halfilas: NaCl >3.5%
Cultivo de Microorganismos
Medios de Cultivo:
Composicin y preparacin
Cultivo de microorganismos
En la naturaleza:

a) biofilms
b) consorcios
Cultivo de microorganismos
En el laboratorio: Se estudian como cultivos
puros crecidos con abundancia de nutrientes a
muy altas densidades (cultivo esttico o
continuo)
Quimiostato
Cultivos continuos
CULTIVO SINCRONICO

Cultivos en los que todos los individuos de una poblacin
estn en la misma etapa del ciclo celular.

Se utiliza el mtodo de Helmstetter-Cummings


Medios de cultivo
El material alimenticio en el que crecen los
microorganismos es el Medio de Cultivo y el
crecimiento de los microorg. es el Cultivo.
Medios de cultivo
Clasificacin
1. COMPOSICIN:
Definido
Son medios en que se conocen todos
los componentes.

Los medios definidos se emplean
ampliamente en investigacin dado
que con frecuencia se requiere
conocer que est metabolizando el
m.o.
Medio BG-11 para cianobacterias
Cantidad (g/l)
NaNO3 1.5
K2HPO4.3H2O 0.04
MgSO4.7H2O 0.075
CaCl2.2H2O 0.036
cido ctrico 0.006
Citrato amnico frrico 0.006
Na2CO3 0.02
EDTA 0.001
Solucin de metales traza 1 ml/l
1. COMPOSICIN:
Complejo
Son medios suficientemente ricos para
satisfacer las necesidades nutricionales de
diversos microorganismos.
De gran utilidad cuando se desconoce los
requerimientos nutricionales de un m.o. en
particular.
2. CONSISTENCIA:
Slidos
Lquidos
Semislidos
3. Uso:
Enriquecidos

Selectivos


Diferenciales








Mantenimiento
Colonias de bacterias
Serratia marcescens
Cultivada en Agar
MaConkey
Pseudomonas aeruginosa
Cultivada en
Agar Tripticasa-soja
Shigella flexneri
Cultivada en
Agar MacConkey
Colonias de Bacillus subtilis que
han crecido en medios con pocos
nutrientes