Integrantes
Bruno Bignardi
Carlo Filho
Igor Durant
Mikael Valle
Pedro Garcia
Rodolfo Zacarias
Objetivos
Detectar se a infeco por malria pode
levar a estresse oxidativo e apoptose no
fgado de camundongos infectados com
Plasmodium yoelii.
Introduo
Todo ano 300 500 milhes de pessoas so
infectadas pela malria.
1 3 milhes morrem por ano.
Pode provocar disfuno heptica, como
necrose de hepatcito, colestase, estase da
bile, leso granulomatosa, ndulos malricos e
apoptose de hepatcitos.
Ciclo da Malria
ALBERTS, Bruce et al. Biologia molecular da clula. 5. ed. Porto Alegre: Artmed, 2010.
MATERIAIS
E
MTODOS
Medida da Reduo de
GSH
Fgado de ambos os grupos
Homogeneizao
Centrifugao
Submisso do sobrenadante obtido reaes qumicas;
remoo do precipitado.
Submisso do segundo sobrenadante obtido
espectofotometria (Padro: GSH)
Medida da peroxidao
lipdica como ndice de dano
oxidativo
Fgado ambos os grupos
Homogeneizao em salina gelada
Realizao de fraes subcelulares para obteno de fraes mitocondriais
Adio substncias reagentes; aquecimento; resfriamento; centrifugao
Determinao de produtos da peroxidao lipdica como reagentes do cido
Tiobarbitrico (Padro: Tetrahidroxipropano).
OBS: Fraes da MM foram usados ao invs de todo o fgado homogeneizado
(Continha materiais reagentes do AT no-lipdico).
Lavagem da protena
Dissoluo e centrifugao
Utilizao do sobrenadante para medir contudo da carbonila.
Permeabilizao
Incubao
Medida do potencial da
membrana mitocondrial
Mediu-se a integridade da MMI atravs da observao do
gradiente de potencial.
Isolao das mitocndrias atravs do kit de isolao
mitocondrial
Incubao (Tampo)
Disseco do fgado
Homogeneizao 20%
Preparao em gua triplamente destilada
Processamento para extrao de c. metanosulfnico (Produto reao de OH
com DMSO).
Medida da intensidade do cromforo resultante
DISCUSSO
E
RESULTADOS
Apoptose
Ativao da
caspase-3
Ativao da Caspase-3
Ativao da Caspase-3
Evidncia da presena de caspase-3 no citosol
de hepatcitos, atravs de tcnica de
imunohistoqumica.
Via do Receptor
de Morte
Ativao da
Caspase-8
Ativao da Caspase-8
Todos os receptores de morte estimulam a
apoptose atravs da ativao da caspase-8;
A ativao da caspase-8 culmina na ativao
da caspase-3;
Dessa forma, detectando a atividade da
caspase-8 pode-se medir a ao de outros
receptores de morte alm do Fas.
Ativao da Caspase-8
Concluso
Na malria:
Diminuio de antioxidantes.
Aumento de ROS (Reactive Oxygen Species) e OH.
Aumento do Estresse Oxidativo.
REFERNCIAS
Centers for Disease Control and Prevention, disponvel em:
<http://www.cdc.gov/malaria/about/biology/mosquitoes/freeborni_large.html>, acesso em:
20/09/2014
Guha M et al. FASEB J 2006;20:1224-1226