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Anlisis de extractos de plantas mediante espectroscopia

Raman de superficie amplificada (SERS)


Lpez Alvarado M.A 1; Miranda Beltrn M.L1; Gonzlez Slis J.L1; Frausto Reyes C4; Soria Fregoso C2, Gutirrez Coronado O2, Huacuja Ruiz L.3
1 Laboratorio

de Aplicaciones Biomdicas. 2Centro Universitario de los Lagos, Universidad de Guadalajara, Enrique Daz de Len S/N, Paseos de la Montaa, Lagos de
Moreno, Jalisco, 47460, Mxico. 3Instituto de Enfermedades Crnico Degenerativas, Centro Universitario de Ciencias de la Salud, Universidad de Guadalajara, Sierra
Mojada No 850, Col Independencia, 43100, Guadalajara, Jalisco, Mxico. 4 Centro de Investigacinen ptica (CIO), Aguascalientes, Ags. Mxico.nikemike77@yahoo.com.mx

INTRODUCCION

RESULTADOS

Las plantas del genero Kalanchoe se caracterizan por actuar a nivel de


membrana celular produciendo importantes cambios como consecuencia de
un proceso peroxidativo muy intenso alterando su estructura
significativamente por la lipoperoxidacin de las membranas. Estos cambios
son variables dependiendo de la planta: desestabilizacin de la membrana
plasmtica, formacin de vesculas membranosas y rompimiento de
membranas con ausencia absoluta de restos membranosos. Estos efectos se
demostraron, sobre las membranas de espermatozoides de humanos y de
diferentes mamferos. Sin embargo, los compuestos de los extractos de las
Kalanchoe, an se desconocen.

Resultados:. La concentracin de polifenoles fue mayor en K. blossfeldiana (246.65 g/ml) y menor en K. flamea y K. gastonis bonnieri
(96.66 y 8.33 g/ml). Las concentraciones de acido silico y carbohidratos fueron mayores solamente en la K. blossfeldiana (615.536 y
353.53 g/ml), observndose pocas diferencias cuantitativas en el rendimiento. Mientras que de los espectros SERS, obtenidos de las 3
especies del gnero K, encontramos la presencia de picos en las regiones 500-1700 cm-1 correspondientes a sacridos y aminocidos
entre otros como el Acido Mirstico, Glutation, L-prolina, etc. De acuerdo a esta caracterizacin podemos saber la funcin de cada uno de
ellos, por ejemplo el glutatin (GSH), que es un tiol no proteico, abundante en plantas, su funciones es proteger a la planta de estreses
ambientales, transportar sulfato orgnico, y poseer capacidad antioxidante., sin embargo los compuestos L-Serina, Glutation, Curcuma,
Quecetina y 12 cido metil-tetradecanoico presentes tanto en K.gastonis bonnieri y blossfeldiana, se encuentran ausentes en la K.
flammea. Otro compuesto que se comparte en dos especies de Kalanchoe es el L- Prolina presentes en K. gastonis bonnieri y K.
flammea, se encuentran ausentes en la K. blossfeldiana.

200

400

600

1000

1400

1600

1800

Kalanchoe gastonis bonnieri

Kalanchoe blossfeldiana

Intensidad Raman

1606,52356

1446,69531

1369,18457

1285,66528

1214,76392

1063,34766

967,81116

839,22748
892,70386

753,90558

624,12018
692,01715

200

2000

400

600

800

1000

1200

1400

1600

401 cm-1, Fructosa.


531 cm-1, Acetil Coenzima A
783 cm-1, L-Histidina
869 cm-1, Triloena
1286 cm-1, L-Prolina.
1411 cm-1, 14 cido Metilhexadecanoico

783,83185

401,85934

869,92724

1688,84119

1200

-1

Kalanchoe flammea

550 cm-1, Glutation.


753 cm-1, L-Valina.
839 cm-1, Acido Sialico.
967 cm-1, L-Serina.
1063 cm-1, 12 Acido metil-tetradecanoico.
1214 cm-1, L-Tirosina.
1369 cm-1, D-(+)- Galactosamina
1606 cm-1, Quercetina-Curcuma.

1125,83691

1611,33047

1486,95279

502,14594
550,81543

1333,73391

800

1214,76395

990,64378

1136,65236

826,60944

738,28326

El objetivo del presente trabajo es caracterizar fitoqumicamente y mediante


espectroscopa Raman los extractos de estas plantas Kalanchoe (gastonis
bonnieri, flammea, blossfeldiana).

Intensidad Raman

572,44635

572 cm-1, Acido Ascorbico.


826 cm-1, Glutation.
990 cm-1, 12 Acido metiltetradecanoico.
1136 cm-1, L-Serina.
1214 cm-1, L-Tirosina.
1333 cm-1, L-Prolina.
1486 cm-1, L-triptofano.
1611 cm-1, Quercetina-Curcuma.

Intensidad Raman

OBJETIVO

437,2532

ESPECTROS RAMAN SERS CON NANOPARTICULAS DE ORO DE 20 nm

1286,45918

531,00243
1411,35812

1800

2000

200

400

600

800

1000

1200

1400

1600

1800

2000

1800

2000

-1

-1

Corrimiento Raman (cm )

Corrimiento Raman cm

Corrimiento Raman cm

Kalanchoe gatonis bonnieri

Kalanchoe blossfeldiana

Kalanchoe flammea

800

1000

1200

1400

Corrimiento Raman cm

1600

1800

2000

-1

Curcuma
L-Triptofano

cido Sialico

Triolena

Glutation
Acido Ascorbico

Fig. 2. Equipo Raman (830 nm) confocal. HR-800


Acetil Coenzima A

Dispersion Luz
Quercetina-Curcuma

Luz Incidente

200

400

600

800

1000

1200

1400

Corrimiento Raman cm

1600

2000

200

-1

600

800

1000

1337,93991

1107,2103

997,85408

734,07725

577,85408

400

636,13734

840,42918

1800

470,30043

Intensidad Raman

1547,63948

1175,1073
1219,57082

1112,01717
996,0515

941,37339

844,03433

721,45923

785,75107

639,74249

489,5279
521,97425

Intensidad Raman

1640,17167
1497,16738

1432,27468

1319,91416

810,98712

600

1327,72532
1370,38627
1400,42918
1438,88412

603,09013

1602,91845
1252,01717

1186,52361
965,40773

400

574,84979

460,08584

200

516,56652

Los extractos se obtuvieron de las hojas de las Kalanchoes. Se cuantificaron


fitoqumicamente (Polifenoles, carbohidratos, cido sialico y slidos totales);
as como la mezcla de ellos sobre los sensores nanoestructurados a base de
nanoparticulas de oro de 20 nm, mediante un equipo Raman (830 nm)
confocal. HR-800

Intensidad Raman

DESARROLLO

1607,12446

Fig. 1. Plantas que se utilizaron en este estudio

1200

Corrimiento Raman cm

Quercetina

1400

1600

-1

cido Sialico

Los requerimientos de aminocidos por parte del vegetal se extienden durante todo su ciclo. Funcion: nutricion en la germinacin, sintesis de proteinas
(asociadas a las membranas celulares) asi como en la regulacin del balance hdrico en las plantas cuando stas estan bajo estrs y como moleculas
quelatantes de cationes para el desarrollo vegetal, entre otras funciones.
Los cidos sialicos aparece frecuentemente en los oligosacaridos de la membrana dnde cumplen importantes funciones en reconocimiento celular,
forman parte de los receptores de virus o anticuerpos y confieren carga negativa a la superficie celular
la triolena se encuentran tres molculas de cido oleico enlazadas al glicerol. La triolena contiene tres cidos grasos insaturados, por lo tanto se le
clasifica como un triacilglicrido insaturado.
El glutatin (GSH) es el tiol no proteico ms abundante en plantas. Dentro de sus funciones biolgicas se encuentran: proteger la planta de estreses
ambientales, transportar sulfato orgnico, poseer capacidad antioxidante.
El cido ascrbico solamente se encuentra en concentraciones significativas en los vegetales. Efecto Antioxidante
El acetil coenzima A (Acetil-CoA) es un compuesto intermediario clave en el metabolismo. El acetil coenzima A se forma en numerosas rutas catablicas,
El acetil coenzima A es tambin una molcula clave en diversas rutas anablicas (biosntesis)
Quercetina es un flavonoide se encuentra en el t verde, en la cebolla, tiene propiedades analgesicas, anitoxidante y anticancerosas entre otros.
Curcuma Ionga (planta de origen asitico). Propiedades: Antiinflamatoria, antimicrobiana, antioxidante, cicatrizante, diuretica, expextorante,
hepatoprotectora. Capacidad para inhibir el crecimiento Tumoral

DISCUSION

Fenmeno Raman
Muestra

Dispersin Rayleight
Dispersin Raman

El fenmeno raman es un esparcimiento inelstico de la luz en un material,


donde la luz esparcida puede tener una longitud de onda menor o mayor
que la luz incidente. Permite obtener informacin sobre la estructura,
la composicin y los estados vibratorios o electrnicos del material
esparcidor.

En nuestros resultados obtenemos un hallazgo de compuestos que no estn reportados en las bases de datos en revistas especializadas
como tambin la caracterizacin de las Kalanchoes donde no se han realizado estudios de ninguna manera con Raman SERS o con otra
tcnica. Dentro de la caracterizacin de las kalanchoes encontramos la presencia de compuestos polifenolicos como es la curcuma y la
quercetina. Por lo que la presencia de polifenoles es de suma importancia ya que la mayora de los efectos biolgicos en las clulas son
debido en parte a este tipo de compuestos. Tambin se encontr la presencia del cido sialico, compuesto que en estudios anteriores refieren
que tiene una actividad importante en la lipoperoxidacin sobre las membranas de espermatozoides, por lo cual se espera que tenga un
efecto importante sobre las clulas de cncer de mama.

CONCLUSIONES
1.- Hallazgo de compuestos que no se han reportados en las bases de datos de revistas especializadas.
2.- Los compuestos encontrados en las kalanchoes podran tener un efecto importante sobre las celulas de cancer de mama.

Fig. 3. Imgen de MEB de


semillas de alfalfa recubierto con
partculas de oro.

La Espectroscopia RAMAN de Superficie Amplificada (SERS) utiliza


sensores de nanopartculas de metales nobles (plata, cobre, oro).
Mediante la tcnica (SERS) la sensibilidad de deteccin se mejora hasta
10 rdenes de magnitud con respecto
a
la
espectroscopia
RAMAN convencional.

3.- La Tcnica Raman SERS es una herramienta til en la caracterizacin de las Kalanchoes

BIBLIOGRAFIA
1. Jake De Gelder, et al. (2007). J. of Raman Spectrosc. 38: 1133-1147
2. L. Zeiri. (2007). J. of Raman Spectrosc. 38: 950-955
3. Huacuja L, et al. (1997). Advances in Contraceptive Delivery Sytems. 13:13-21
4. D. Wolverson, Raman Spectroscopy, in: D. L. Andrews and A. A. Demidov (Ed.),
An Introduction to Laser Spectroscopy, Plenum Press, New York, 1995, p. 91
5. Huacuja L, et al. (1995). Assited Reproductive Techonology / Andrology 8: 34-42

AGRADECIMIENTOS

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