Biotecnologa

La biotecnologa es la tecnologa
basada en la biologa, especialmente
usada en agricultura, farmacia, ciencia
de los alimentos, ciencias forestales y
medicina.
Se desarrolla en un enfoque
multidisciplinario.

La biotecnologa podra definirse como "toda

aplicacin tecnolgica que utilice sistemas
biolgicos y organismos vivos o sus derivados
para la creacin o modificacin de productos
o procesos para usos especficos".

Los inicios de la transformacin de

alimentos
Hace 8 mil aos, los sumerios y
babilonios comenzaron a producir
cerveza mientras que los egipcios
descubrieron la tcnica para
elaborar pan de levadura hace 6 mil
aos.

Alrededor de la misma poca se desarrollaron otros

procesos para la conservacin de alimentos
(particularmente en en China) como la fabricacin de
yogurt, queso, vinagre y vino.

El bilogo Louis Pasteur gracias

a cuyos trabajos se comprendi
el mecanismo de la
fermentacin.

En 1798 Edward Jenner, infectaba a la gente con viruela

bovina para inducir resistencia a la viruela humana,
(vacuna viene de la palabra latina vaccinus que quiere
decir "a partir de vacas").

En 1928, Alexander Fleming, descubre la

penicilina.

-La Ingeniera Gentica es una

nueva ciencia que trata de la
manipulacin de los genes y de
sus productos.
Sus mtodos de trabajo son
tambin conocidos como tcnicas
del ADN recombinante.

Las aplicaciones de esta tecnologa y, por

tanto, sus finalidades entre otras muchas, son:
a)facilitar la prevencin de algunas
enfermedades.
b)identificacin de personas con fines
legales.
c)posibilidad de aislar un gen y expresarsintetizar la protena que codifica a gran
escala.

La Ingeniera Gentica naci como consecuencia

del descubrimiento de que algunas bacterias
resistentes a los fagos tienen unas enzimas que
cortan en trozos pequeos las molculas de
ADN extraas..
Estas enzimas se conocen como enzimas

de

restriccin o restrictasas (son del tipo de

las endonucleasas y se conocen ms de 200)

-Las tcnicas del ADN recombinante,

bsicamente, consisten en lo siguiente:
a) se toman fragmentos de ADN de distintos
organismos y se unen 'in vitro' ('recombinacin in
vitro'); el ADN que resulta se conoce como ADN
recombinante.

b) el ADN recombinante se introduce en otras

clulas (generalmente bacterias), en las cuales
se logra la expresin de sus genes

-La Ingeniera Gentica utiliza, entre otras

tcnicas de trabajo:
1) Obtencin de fragmentos de ADN que pueden ser
estudiados y manipulados. Para ello se utilizan
enzimas de restriccin y retrotranscriptasas.
2) Clonacin gnica para la obtencin de gran
cantidad de fragmentos de ADN. Entre otras se utiliza la
tcnica PCR (reaccin en cadena de la polimerasa).

PAPEL DE LAS ENZIMAS DE RESTRICCIN

-Las restrictasas ...

a)se utilizan para obtener fragmentos de
restriccin (pequeos segmentos de ADN),
fciles de analizar y manipular.
b)cortan el ADN por sitios especficos, llamados
secuencias de reconocimiento (formadas por
cuatro u ocho pares de bases, que, en la
bacteria original, estn protegidas para evitar
que se destruya su propio ADN)

c)estas enzimas tijeras biolgicas, al

cortar el ADN, originan segmentos
cohesivos (o adhesivos)

d) estos extremos cohesivos pueden

unirse a otros fragmentos de ADN para
constituir segmentos de ADN objeto de
anlisis y estudio.

Preparando ADN Recombinante

5

C T T A A

A A T T C
G

one DNA fragment another DNA fragment

5

A A T T C

T T A AG

nick
5

A A T T C

T T A A

nick

DNA ligase action

G A A T T C

C T T A A G

Cromatografa y electroforesis
- Separacin de fragmentos de cidos
nucleicos por migracin en geles
- En electroforesis se aplica una diferencia de
potencial elctrico
- Pueden separar fragmentos de mezclas de
hasta 20 Kb
Pueden diferenciarse fragmentos de 1000 pb

Tincin con bromuro

de etidio que presenta
fluorescencia al ser
iluminado con luz
ultravioleta

PAPEL DE LAS RETROTRANSCRIPTASAS

-Esta tcnica se utiliza para obtener
fragmentos de ADN, cada uno de los cuales
corresponde a un gen estructural, cuando se
dispone del ARNm.
-Consiste en sintetizar en 'in vitro' el ARNm
correspondiente, o bien aislar de la clula el
ARNm deseado (hay tcnicas para conseguirlo).
Entonces, utilizando el ARNm adecuado,
mediante transcriptasa inversa, se sintetiza el
ADN correspondiente.

REACCIN EN CADENA DE LA POLIMERASA

(Tcnica PCR)
-Caractersitcas:
a)es una tcnica de clonacin gnica
b)produce muchsimos fragmentos de ADN (in vitro) a
velocidad extraordinaria.

c)requiere conocer las secuencias de bases del fragmento de

ADN que se pretende replicar (clonar).

d) con estas secuencias se deben sintetizar cortas cadenas

complementarias de ADN (de unos 20 nucletidos).

e) estas cortas cadenas funcionarn como cebadores o

primers de ADN para que acte la ADN-polimerasa.
Se emplean ADN polimerasas termoestables, extradas de
microorganismos adaptados a vivir a esas temperaturas, restrictivas
para la mayora de los seres vivos.
Dichos microorganismos, generalmente arqueas, son: Thermus
aquaticus (polimerasa Taq), Pyrococcus furiosus (Pfu),
Thermococcus litoralis (Vent) y Thermus termophilus (Tth).
Generalmente se emplean mezclas de polimerasas muy procesivas
(Taq) con otras con correccin de errores (Pfu, Vent).

-La tcnica PCR se desarrolla as:

a) el fragmento de ADN a replicar se introduce en una disolucin
que contiene ADNpol.
b) se aaden desoxirribonucletidos en cantidad y las molculas
de cebador ya sintetizadas.
c) al calentar, se separan las hebras complementarias del
fragmento de ADN.
d) al enfriar, se unen los cebadores a las hebras simples de
nucletidos, lo cual es reconocido por la ADN-pol que comienza
a aadir nucletidos formando la hebra complementaria.
e) calentando y enfriando alternativamente la solucin, se
pueden obtener millones de copias de ADN en perodos de
tiempo cortos.

90-95
C
PRIMER
DE UNOS 18
NUCLEOTIDOS

VECTORES DE CLONACIN
Los vectores de clonado, son los agentes
transportadores capaces de introducir el ADN en las
clulas hospedadoras.
Los vectores de clonacin son pequeas molculas de
ADN, que tienen capacidad para autorreplicarse dentro
de las clulas hospedadoras.
Se utilizan con frecuencia dos tipos de vectores de
clonacin: plsmidos y virus. de introducirlos en las
clulas hospedadoras.

Plsmidos. Son molculas de ADN circular, con un

tamao menor que el del cromosoma. Se replican con

independencia del cromosoma bacteriano ya que tienen su
propio origen de replicacin.

Tenemos un gen(color rojo) que interesa insertar en un

plsmido (color turquesa)

Una enzima de restriccin ha cortado el gen y el

plsmido, quedando unos bordes cohesivos o pegajosos.

La unin del ADN que contiene el gen que se desea

clonar con el vector de clonacin, se realiza por medio
de otras enzimas, denominadas ADN-ligasas, que
unen ambos trozos de ADN.
El resultado es una molcula de ADN recombinante,
ya que contiene fragmentos de ADN de distinta
procedencia.

Bacterifagos. El proceso es similar, se trata de

insertar el gen deseado en un fragmento de ADN vrico
(figura d)

Posteriormente se ensamblarn las distintas partes del virus

(figura e). As quedar el virus completo(figura f). En el
siguiente paso se insertar este ADN por el proceso de la
TRANSDUCCIN.

figura e
figura d

figura f

Csmidos .

Son plasmidos que contienen el fragmento

de ADN deseado que posee un borde
cohesivo procedente del genoma del fago
lambda (extremo cos)y se empaqueta en el
interior de un fago.
Se construye el cosmido uniendo los tres
elementos gnicos, y el resultado final es
poder introducir en la clula receptora
fragmentos largos de ADN.

Adems del origen de replicacin, los

vectores de clonacin deben llevar
otros genes denominados
marcadores, que sirven para
identificar las clulas que contienen
el vector de clonacin.

Se suelen utilizar como marcadores,

genes de resistencia a antibiticos
y genes de bioluminiscencia.

Genes de resistencia a antibiticos.

Sirven para identificar bacterias que
contienen el vector de clonacin, porque
estas bacterias sern resistentes al
antibitico del gen marcador.

Genes de luminiscencia.. En este caso,

la clula que contenga el gen que se
quiere clonar, tendr la propiedad de
emitir luz, ya que el marcador que se le
incorpora determina que se exprese esa
caracterstica. Este sistema se emplea
cuando la clula hospedadora es una
clula eucariota.

Mtodos de introduccin del

vector.
El siguiente paso ser introducir el vector de
clonacin que contiene el gen que se quiere clonar en
la clula hospedadora, para que sta, al multiplicarse,
origine un clon celular que lleve el gen concreto.
Existen varios mtodos que dependern del tipo de
clula fundamentalmente.
En bacterias (clulas procariotas), mediante estos
procesos:

- TRANSFORMACIN
- TRANSDUCCIN

Transformacin.
Ocurre espontneamente en ciertos tipos de
bacterias y se consigue artificialmente sometiendo a
la clula bacteriana a tratamientos fsicos y
qumicos.
La clula capta molculas de ADN que se encuentran
en el medio externo, las introduce en su interior y las
incorpora a su genoma.

Transduccin.
Este mtodo consiste en introducir el ADN en la clula
hospedadora mediante un virus, utilizando como vector
de clonacin el genoma del virus.
En la siguiente figura puede verse el proceso en tres
etapas.
El nmero 1 corresponde al virus aproximndose a
una bacteria. Se puede observar como lleva un
genoma ya con el gen que interesa clonar.
El siguiente momento 2, corresponde al contacto
entre el virus y la pared bacteriana, en cuya zona
de contacto se produce un poro por donde como
vemos en la etapa 3.
El virus inyecta su ADN al interior de la clula
bacteriana.

IDENTIFICACIN
DE UN CLON
CON EL
FRAGMENTO
DE ADN
DESEADO

1
!
&1#
'!
#&#
&<

APLICACIONES DE LA INGENIERA
GENTICA.
EN MEDICINA
-Actualmente se sabe que las enfermedades
genticas debidas a un solo gen defectuoso
ascienden a ms de 4000, de las cuales 345
afectan al cromosoma X.

A ttulo de ejemplo, en el siguiente grfico

anotamos algunas de las enfermedades
genticas y su localizacin cromosmica:
-

-Las aplicaciones se pueden concretar en cuatro

aspectos:
1) La produccin de sustancias con efectos
teraputicos.
Entre estas sustancias podemos citar a ttulo de
ejemplos ms relevantes:
-Somatostanina (SS) que, segregada por el
hipotlamo, inhibe la sntesis de somatotropina (GH)
u hormona del crecimiento.
-Insulina que, segregada por el pncreas, regula la
concentracin de glucosa en sangre.
La produccin de insulina que se obtiene a partir de
la levadura Sacharomyces cerevisae, en la cual se
clona el gen de la insulina humana

-Somatotropina (GH) que, segregada por la

adenohipfisis controla y regula el normal crecimiento
(evitando enanismo).
- Interferones, que son protenas elaboradas por
clulas animales en respuesta a una infeccin
vrica.
-Factor VIII antihemoflico (AHF), es una globulina
que estimula a las plaquetas (para la coagulacin
sangunea).
-Renina, es una enzima que cuaja la leche, necesaria
para la elaboracin de quesos (o para algunos
frmacos).
-Celulasa, enzima hidroltica de la celulosa, es
utilizada en algunos preparados digestivos.
-Vacunas recombinantes, como la de la hepatitis B.

El sistema tradicional de obtencin de

vacunas a partir de microorganismos
patgenos inactivos, puede comportar un
riesgo potencial.
Muchas vacunas, como la de la hepatitis
B, se obtienen actualmente por ingeniera
gentica.
Como la mayora de los factores
antignicos son proteinas lo que se hace
es clonar el gen de la proteina
correspondiente.

2) El diagnstico de enfermedades
hereditarias.

Para ello se utilizan tcnicas como la

amniocentesis, basadas en la extracin de
clulas amniticas del feto.
Se pueden diagnosticar enfermedades como la
hemofilia, la anemia falciforme, la diastrofia
muscular y otras, que son debidas a
mutaciones genticas.
Se utilizan sondas que son genes defectuosos
marcados para comprobar si se hibridan con el
ADN procedente del cultivo

3) La identificacin de genes
humanos especficos.
Se trata de localizar e identificar el gen
responsable de una enfermedad que se
sabe que es hereditaria.

Aunque es un problema tan arduo

como el de 'encontrar una aguja en un
pajar', se ha logrado algn xito como
es el caso de la identificacin de la
fibrosis qustica (enfermedad, sobre
todo, pulmonar).

4) La terapia gnica.
La terapia gnica est siendo considerada la
cuarta revolucin de la medicina (despus de
las medidas de salud pblica, la anestesia, y
las vacunas y antibiticos).
Para su aplicacin se siguen dos estrategias:
a)Insertar una copia sana de un gen en las
clulas del paciente con una enfermedad
gentica, para compensar el efecto del gen
defectuoso (esto se consigui con una
nia que tena una inmunodeficiencia grave).

b) Introducir un gen
especialmente diseado para que
proporcione una nueva
caracterstica a las clulas (por
ejemplo, introducir en linfocitos un
gen que produzca un inhibidor del
virus del sida en pacientes
afectados por el VIH).

EN AGRICULTURA
-En el mbito de la agricultura siempre se ha
pretendido obtener plantas cultivables, cuyos
rendimientos sean ptimos.
Desde hace muchos aos se utilizan los conocimientos
de la Gentica, aunque muchas veces de una forma
inadvertida, y en este sentido deben entenderse los
procesos de seleccin gnica realizados provocando
cruces y originando poliploidas, para luego
seleccionar aquellas plantas de buenos resultados y
multiplicarlas asexualmente, formando clones con
ellas.

-La aplicacin de tcnicas de Ingeniera

Gentica estn dando resultados
espectaculares en la obtencin de
plantas transgnicas, es decir, plantas
a las que se ha introducido ADN clonado
(recombinante) y que lo han incorporado
a su genoma de forma estable.

Los principales caracteres conseguidos en las

plantas transgnicas, son:

a) resistencia a herbicidas, a insectos y

enfermedades microbianas.
b) incremento del rendimiento fotosinttico.
c) mejora en la calidad de los productos
agrcolas.
Las primeras plantas obtenidas mediante estas
tcnicas fueron un tipo de tomates, en los que sus
frutos tardan en madurar algunas semanas despus
de haber sido cosechados.

Biologa de Agrobacterium tumefaciens

Esta bacteria, presente en el suelo, es patgena de
muchas plantas a las que produce un tumor conocido
como "agalla de cuello".
Durante el contacto con las clulas vegetales la
bacteria transfiere a las clulas vegetales un
plsmido llamado Ti (inductor de tumores).
Este plsmido se integra en el ADN del cromosoma
de la clula vegetal.
Este fenmeno natural es empleado para utilizar a la bacteria
Agrobacterium tumefaciens como vector de los genes que se
desean introducir en una clula vegetal, con lo que se
transforma dicha clula, la cual puede regenerar, por
micropropagacin, una planta entera que ser transgnica.

PLANTAS TRANSGNICAS

Resistencia a herbicidas, a insectos y a

enfermedades microbianas.

Ya se dispone de semillas de algodn, que son

insensibles a herbicidas.

Para la resistencia a los insectos se utilizan

cepas de Bacillus thuringiensis que producen una
toxina (toxina - Bt) daina para las larvas de
muchos insectos, de modo que no pueden
desarrollarse sobre las plantas transgnicas con
este gen.

 Incremento del rendimiento fotosinttico

Para ello se transfieren los genes de la ruta fotosinttica de
plantas C4 que es ms eficiente.
Mejora en la calidad de los productos agrcolas
Tal es el caso de la colza y la soja transgnicas que producen
aceites modificados, que no contienen los caracteres
indeseables de las plantas comunes.
Sntesis de productos de inters comercial
Existen ya plantas transgnicas que producen anticuerpos
animales, interfern, e incluso elementos de un polister
destinado a la fabricacin de plsticos biodegradables
Asimilacin de nitrgeno atmosfrico
Aunque no hay resultados, se ensaya la transfeccin del gen nif
responsable de la nitrogenasa, existente en microorganismos
fijadores de nitrgeno.

EN ANIMALES
-En animales, la aplicacin de las tcnicas de la Ingeniera
Gentica persiguen los objetivos siguientes:
a)favorecer la investigacin biomdica para estudiar la
fisiologa de los genes y la biologa del desarrollo.
b)mejorar la productividad o la resistencia a las
enfermedades de animales tiles para los hombres.
c)produccin de protenas de valor farmacolgico.
La correccin de errores innatos de metabolismo mediante
terapia gnica.

Generalmente, en animales, el ADN extrao,

llamado transgen, se introduce en zigotos,
y los embriones que hayan integrado el ADN
extrao en su genoma, previamente a la
primera divisin , producirn un organismo
transgnico; de modo que el transgn pasar
a las siguientes generaciones a travs de la
linea germinal (gametos).

La transgnesis puede efectuarse siguiendo dos

estrategias distintas:

Transgnesis por microinyeccin de

zigotos
Desde que en 1982 se obtuviera un ratn transgnico,
la produccin de animales transgnicas es cada vez
ms cotidiana, existiendo ya animales transgnicos de
las siguientes especies: ratn, rata, conejo, cerdo,
vaca, cabra y oveja.

CLONACIN DE ANIMALES
El principio de la clonacin est en la obtencin
de organismos idnticos genticamente, y por
tanto morfolgic y fisiolgicamente, como lo
son dos gemelos univitelinos.
Esto ha sido el sueo de muchos ganaderos, que
han deseado que todo su ganado tuviera las
cualidades de algn ejemplar especialmente
bueno.

Se pueden utilizar dos mtodos para

conseguir clones de animales:
Por DISGREGACIN DE CLULAS
EMBRIONARIAS.Se basa en el mismo
principio por el que nacen gemelos de forma
natural.Se pueden separar las clulas de un
embrin en diferentes estados de desarrollo,
desde el estado de 2 clulas hasta el estado
de mrula. Cada clula separada puede
funcionar como un zigoto que puede
desarrollarse para dar un individuo completo.

Por TRANSFERENCIA NUCLEAR. Se toman clulas

embrionarias en fase de mrula o blstula, obtenidas
por disgregacin, se cultivan in vitro,y despus se
transfieren a ovocitos a los que se les ha quitado el
ncleo.
Se provoca la fusin de las dos clulas animales de
modo que el ncleo de la clula embrionaria quede en el
interior del ovocito, pudiendo ste empezar a
funcionar como un zigoto.

Obtencin de una cerda

transgnica
Un gen hbrido que contiene el
gen humano que codifica la
sntesis de una protena de
inters biolgico junto con el
promotor del gen que codifica una
protena de la leche de rata, se
introducen por microinyeccin en
un vulo de cerda fecundado.
El desarrollo de ese vulo da
lugar a un animal transgnico que
tiene en todas sus clulas el gen
hbrido. Debido al promotor
elegido, ese gen solamente se
expresa en la glndula mamaria
de la cerda induciendo la
produccin de la proteina
humana en la leche.

Esto es lo que se hizo con la oveja Tracy en 1992, la

primera oveja que produjo una proteina humana, la alfaantitripsina bajo la direccin del promotor ovino de la
beta-lactoglobulina.
Dicha proteina se produce en una cantidad de 35 g/l, la
cual se emplea para curar el edema pulmonar.
Lo mismo se ha hecho para la famosa cerda Genie, que
fabrica en su leche la proteina C humana que controla
la coagulacin sanguinea y es necesaria para los
hemoflicos.

Frente a los mltiples beneficios que ofrece este campo,

se encuentran algunos problemas que puede presentar la
aplicacin de la Ingeniera Gentica:
Problemas sanitarios. Pueden aparecer nuevos
microorganismos patgenos que provoquen
enfermedades desconocidas, o el uso de frmacos de
diseo provoquen efectos secundarios no deseados.
Problemas ecolgicos. La liberacin de nuevos
organismos en el ambiente puede provocar la
desaparicin de especies contra las cuales se lucha, con
consecuencias an desconocidas, ya que cumplen una
funcin en la cadena trfica de la naturaleza.

 Problemas sociales y polticos. Las aplicaciones

de la Biotecnologa en el campo de la produccin
industrial, agrcola y ganadera, pueden crear
diferencias an ms grandes entre pases ricos y
pobres.
El sondeo gnico en personas puede llevar a
consecuencias nefastas en la contratacin laboral,
por ejemplo, y atenta contra la intimidad a que tiene
derecho toda persona.

 Problemas ticos y morales. La experimentacin en la

especie humana puede atentar contra la dignidad de la misma.
Poder conocer y modificar el patrimonio gentico humano
puede ser una puerta abierta al eugenismo.
En el campo de la Terapia Gnica es defendible este
procedimiento cuando se utilice en clulas somticas para
corregir enfermedades.
En la lnea germinal se pide su prohibicin en todo aquello que
sea recomponer un programa gentico humano.
Los trabajos con embriones humanos con fines puramente
experimentales se consideran un atentado a la dignidad de la
especie humana.

Por todo ello, es preciso que los conocimientos y avances en

Ingeniera Gentica se consideren patrimonio de la
humanidad, y que los Organismos Internacionales