Universidad Nacional Autnoma de Mxico.

Facultad de Estudios Superiores Zaragoza

Laboratorio de Microbiologa II

Aislamiento de Bacterifagos

Grupo 1701 Equipo 12

Romo Estudillo Carolina
Saldaa Lozano Ivette Lorena
Vera Hernndez Alberto Esteban

VIRUS
Son los seres ms simples y pequeos que

se conocen.
Bsicamente son molculas de acido
nucleico envueltas por una cubierta
proteica.
Carecen de organelos
Son acelulares (no tienen organizacin
celular).
Pueden infectar bacterias

CARACTERSTICAS GENERALES DE LOS

VIRUS
Son parsitos intracelulares obligados.
Metablicamente

inerte por si mismo.

Slo se replica dentro de clulas vivas.

Constituidas

protenas.

por cidos nucleicos y

 Tiene

la informacin para programar a la

clula husped y que sintetice varias
macromolculas especficas del virus.

ESTRUCTURA VIRAL

Material gentico: ADN

ARN, no ambos.

Cpside: Envoltura
protenica que envuelve
al cido nucleico. Puede
ser icosadrica o
helicoidal.

Formado por Capsmeros:

grupos de unidades proteicas individuales.

 Nucleocpside:

La unidad completa de c.
Nucleico y cpside.

Cubierta:

En algunos casos existe:

membrana lipdica

que rodea a la
nucleocpside

 Espculas:

En algunos virus se
proyectan al exterior estas estructuras
que son importantes en la replicacin.
Tambin se les denomina Peplmeros.

Virin:

La partcula viral entera.

CLASIFICACIN DE LOS VIRUS

Tipo

de material gentico.

Simetra

Si

de la cpside.

son desnudos o envueltos.

Tamao.

TIPO DE CIDO NUCLEICO

Virus que contienen ADN

Virus que contienen RNA

Virus de ADN
VIRUS

TAMAO

CUBIERTA

SIMETRA

Adenovirus

70-90 nm

Sin cubierta

icosadricos

Herpes simple
de varicela

100-200nm

cubierta

icosadrica

Papillomavirus

45- 55nm

Sin cubierta

icosadrica

Hepadnavirus
(Hepatitis)

42 nm

Con envoltura

icosadrica

Parvovirus

20 nm

Sin cubierta

icosadrica

Poxvirus

230-40 nm

Sin cubierta

desconocida

Adenovirus

Virus del
papiloma

Varicela
Zoster

VIRUS RNA
Virus

Tamao

Cubierta

Simetra

Influenza virus

100 nm

Con envoltura

Helicoidal

Paramyxovirid
ae (paperas,
sarampin,
parainfluenza)

150-300 nm

Con envoltura

Helicoidal

Picornavirus

20-30 nm

Ausente

Icosadrica

Retrovirus (
VIH)

80-100 nm

Con envoltura

Icosadrica

Rabdovirus
(rabia)

75-180 nm

Con envoltura,
espigas

Helicoidal

Arbovirus
dengue (fiebre
amarilla)

45-50 nm

Con envoltura

Icosadrica

Virus de la fiebre
amarilla
Virus de la
hepatitis

POR LA SIMETRA DE LA CPSIDE

Presencia o ausencia de una membrana

viral que cubre a la nucleocpside.

Virus desnudos

Papovavirus

Parvovirus

Virus de RNA

Reovirus

Picornavirus

VIRUS ENVUELTOS

VIRUS ENVUELTOS

BACTERIFAGOS (FAGOS)

Son virus que infectan bacterias.

Su acido nucleico puede ser ADN O

ARN.

La mayora de los fagos estn entre un

rango de 24-200 nm de longitud.

 Cabeza

cubierta
proteger
nucleico.

o
cpside:
proteica para
el
cido

cidos

nucleicos: ADN
ARN, no ambos

Cola

o tallo: tubo hueco

por el cual pasa el
material gentico durante
la infeccin

Fibras

del tallo y placa

basal: unin de fagos a la
clula.

Se agrupan en dos categoras:

Bacterifagos virulentos.
Bacterifagos Temperados.

VIRULENTOS
Matan

a todas la clulas infectadas y

producen placas claras.

Ejemplo

T2 y T4

ATENUADOS O TEMPERADOS
No

siempre matan a sus huspedes y

producen placas turbias.

Ejemplo:

y P1

REPLICACIN DE VIRUS
CICLO

LTICO
CICLO LISOGNICO

CICLO LTICO
El ciclo de multiplicacin de los virus tiene lugar cuando el virin penetra
en la clula hospedadora y utiliza la maquinaria replicativa de sta para
generar nuevas partculas vricas

El virus se replica, llena la clula y para salir la lisa por explosin.

Fases del ciclo:

Fijacin o absorcin

Penetracin

Eclipse (Replicacin del genoma vrico y sntesis de protenas).

Ensamblaje

Liberacin

Fase de fijacin o absorcin

En todos los ciclos lticos de multiplicacin viral se pueden distinguir
las siguientes etapas:

1. Fase de fijacin o absorcin: Las clulas hospedadoras tienen en

sus membranas receptores especficos para los virus que las
infectan, unindose protenas de la cpside o de la envoltura a
stos.

2. Fase de penetracin: En funcin del tipo de virus, existen varias formas

de penetracin:

Los bacterifagos originan un pequeo orificio en la membrana de la

clula hospedadora, con la enzima lisozima de su placa basal, por el que
inyecta el ADN, al contraerse su cola.

Los virus desnudos introducen toda la nucleocpsida en la clula, ya sea

por penetracin directa al perforar la membrana con enzimas hidrolticos,
o por endocitosis, al ser englobados por la clula hospedadora en una
vacuola, que rompern dentro de la clula.

Los virus envueltos funden su membrana con la de la clula hospedadora.

Posteriormente, en los virus que penetra la nucleocpsida entera, el
cido nucleico se libera de la cpsida rompindola.

Fase de penetracin

3. Fase de replicacin y sntesis de componentes virales: En esta fase

no se detectan virus en el interior de la clula. El genoma vrico
dirige el metabolismo de la clula hospedadora hacia la sntesis de los
componentes vricos, utilizando todos los recursos de la clula
hospedadora (materias primas, nucletidos, aminocidos, ATP,
ribosomas, enzimas etc)

4. Fase de ensamblaje: Se ensamblan los capsmeros formando las cpsidas,

a la vez que el cido nucleico se pliega en su interior, junto a las enzimas
que pueda llevar el virus.

5. Fase de liberacin: Los virus salen de la clula bsicamente por dos

mecanismos:

Por gemacin: Inducen a la membrana celular a formar pequeas vesculas en

las que se introducen, y que acaban separndose de la clula. Este
procedimiento lo utilizan los virus envueltos, en los que la envoltura
membranosa es parte de la membrana de la clula en la que se reprodujeron.

Aprovechando los mecanismos de exocitosis de la clula o

provocando agujeros en la membrana por medio de enzimas
lticas. Esta liberacin de los virus puede causar la muerte de la
clula hospedadora, ya sea por haber agotado sus nutrientes, roto su
membrana si la liberacin ha sido masiva, o destruido su genoma.

CICLO LISOGNICO

Este ciclo tambin presenta las mismas etapas que el ciclo ltico,
donde adems el ADN del virus se suma al ADN celular de modo
que cada vez que la clula se duplica tambin lo hace el ADN viral,
pero sin manifestarse.

El ADN del virus se inserta en el genoma de la clula

husped y no se produce proliferacin del virus, quedando en
forma de vida latente

A este virus se denomina profago y a las clulas que lo

contienen clulas lisognicas.

La replicacin de su cido nucleico est aparejada a la

replicacin del DNA de la clula husped.

 El

profago puede
liberarse y entrar en
un ciclo ltico.
Pueden originar una
serie de trastornos
como:
Inducir mutaciones.
Originar
transformaciones
cancerosas
Algunos mecanismo de
resistencia.

El bacterifago T2, es un
virus que infecta a las
clulas de la bacteria
Escherichia coli. cuando
los virus T2 se ponen en
contacto con las bacterias
les
inyectan
algunos
materiales, despus de
aproximadamente
20
minutos,
las
clulas
explotan (se lisan) y liberan
una gran cantidad de
nuevos virus.

IMPORTANCIA Y APLICACIN DE
BACTERIFAGOS

Comprensin de las infecciones virales.

Como vectores de clonado para insertar ADN

dentro de las bacterias y obtener como
resultado bibliotecas genmicas.

Resistencia de las bacterias a los antibiticos.

Se pueden predecir los brotes de clera; esto

debido a que los fagos se encuentran presentes
en el agua junto con las bacterias de esta
enfermedad.

 La

fagotipificacin no se usa en el
laboratorio clnico de rutina, s se usa en
los laboratorios de referencia con
propsitos epidemiolgicos.
Es posible emplearlos potencialmente para
destruir bacterias patgenas encontradas
en alimentos.
La terapia fgica ha sido utilizada como
una alternativa a los antibiticos para tratar
infecciones bacterianas, ya que eliminar
bacterias es lo que los fagos hacen mejor.

OBJETIVOS
1.Conocer e identificar un bacterifago,
un virus y el efecto de parasitismo
intracelular que producen en una clula
hospedera.

2. Llevar a cabo el manejo y aislamiento

de bacterifagos.
3. Conocer las etapas de la replicacin de
los bacterifagos.

MTODO

A. Aislamiento de Escherichia coli de

diversas fuentes. Una semana antes de la practica se debe realizar lo
siguiente:

Atrapar de 20 a
30 moscas

Macerar las
moscas en caldo
BHI o caldo soya
tripticasena

Sembrar en agar
EMB e incubar a
37C por 24 hras.

Utilizar en el
siguiente paso

Tomar una asada

y resuspenda en
2 mL de caldo
tripticasena

De las colonias
que hayan
crecido aislar
E.coli en EMB

Aguas residuales como fuente:

Obtener 45 mL de
agua residual

Tomar con un asa

calibrada 0.01mL
sembran en EMB

Incubar a 37C por

24 hras

Aislar E.coli EMB ,

tome una asada y
resuspenda en 2 mL
de caldo
tripticasena

B. Enriquecimiento del
bacteriofago
Adicionar a 20 o 30 moscas una
pequea cantidad de de caldo
tripicaseina y macere con un pistilo,
hasta hacer una pasta
Trasnferir la mezcla a un frasco esteril
y adicionar mas caldo hasta
acompletar 20 mL mas 2 mL del cald
que contiene E.coli

Mezcle suavemente e incube a 35C

por 24 hrs.

Agua residual como fuente:

Adicionar 15 mL de
agua residuales a 5
mL de caldo nutritivo
decaconcentrado en
un frasco estril

Adicionar 2 mL de
cultivo en caldo de
E.coli

Mezclar suavemente
e incubar

Identificacin de bacterifagos
Decantar
enriquecimiento
B y centrifugar

Decantar el
sobrenadante
del centrifugado
y filtre con
ayuda de una
jeringa y un filtro
de disco
Millipore.

Realizar
diluciones *

Fundir agar
blando y
mantener a
45 C

Adicionar 0.1 mL
de caldo de
E.coli y 1 mL de
caldo de fago.*

Verter mezclas
en cajas Petri
con agar
preformado.*

INTERPRETACIN

Despus de la incubacin, habr un tapiz bacteriano sobre el

que a parecern pequeas reas circulares claras las cuales
correspondern a las llamadas CALVAS o PLACAS DE LISIS
(reas de produccin de fagos procedentes de la lisis de
bacterias infectadas en esa rea).

BIBLIOGRAFA

A. Pumarola, A. Rodriguez-Torres, Microbiologia y parasitologa

mdica, Editorial Salvat, 2 edicin pp 577

Hans G. Schlegel, Microbiologia general, Editorial omega 7 edicin.

Tay Zavala, Jorge, microbiologa y parasitologa medica , mendez

editores 3 edicin pp 203.

http://www.redalyc.org/articulo.oa?id=69323749007

http://www.facmed.unam.mx/deptos/microbiologia/virologia/generali
dades.html

http://docencia.izt.uam.mx/ibs/HerenciaExtraCrom.pdf

http://biologiamedica.blogspot.mx/2010/09/los-virus-ciclo-litico-ylisogenico.html