1. Qu es la histologa?
1.1 Historia.
1.2 Definicin y clasificacin de los tejidos.
1.3 Conceptos.
1.4 Mtodos histolgicos.
1.5 Histologa como asignatura.
2. Microscopa y tcnicas de estudio a nivel celular.
3. Mtodos de estudio citolgico y citoqumico.
4. Qu es la citologa?
4.1 Historia.
4.2 La clula.
4.3 Caractersticas de la clula.
2.3.1 Caractersticas estructurales.
2.3.2 Componentes de una clula.
4.4 Tamao, forma y funcin de las clulas.
5. Lesin celular
5.1 Cambios morfolgicos en la lesin celular.
5.1.1 Reacciones al estrs persistente y a la lesin celular.
1.Qu es la histologa?
La histologa es el estudio de la estructura microscpica del material
biolgico y de la forma en la que se relacionan tanto estructural y
funcionalmente los distintos componentes individuales.
El conocimiento del aspecto histolgico normal es esencial para
poder identificar las estructuras anormales y comprender como la
existencia de procesos bioqumicos y fisiolgicos anormales da lugar
a enfermedades.
El momento actual es un periodo excitante para la histologa, ya que ahora
podemos explorar las bases moleculares y fisiolgicas de las estructuras
biolgicas mediante el desarrollo de tcnicas que nos permiten examinar con
el microscopio el aspecto qumico de los tejidos vivos. Hoy se va haciendo
claro el por qu de la conformacin y la organizacin de las diversas
estructuras biolgicas tal como son.
1.1. Historia.
1600: Primeras investigaciones histolgicas (debido a la incorporacin del
microscopio a los estudios anatmicos.
Anatoma: es el estudio de la forma y la estructura de los organismos vivos.
Su fundador fue Marcelo Malpighi.
Anatoma macroscpica: estructuras observables a simple vista.
Anatoma microscpica: requiere el uso de auxiliares pticos.
1665: Hooke descubre la existencia de unidades pequeas dentro de los
tejidos (clulas).
1830: debido a las mejoras que se introducen en microscopa ptica, se logra
distinguir el ncleo celular.
1838: nace la teora celular.
En los aos posteriores, Virchow introduce el concepto de que toda clula se
origina de otra clula.
Histologa moderna: precisin tecnolgica avance en los conocimientos.
EPITELIOS DE REVESTIMIENTO
EPITELIO PLANO SIMPLE
EPITELIOS DE REVESTIMIENTO
EPITELIO CBICO SIMPLE
EPITELIOS DE REVESTIMIENTO
EPITELIO PRISMTICO SIMPLE
EPITELIOS DE REVESTIMIENTO
EPITELIO PLANO ESTRATIFICADO
Tegumento: piel
Tcnica: Hematoxilina-eosina en cortes de 8 micras de parafina.
EPITELIOS DE REVESTIMIENTO
EPITELIO CBICO ESTRATIFICADO
Glndula sudorpara
Tcnica: PAS-Hematoxilina en cortes de 8 micras de parafina.
EPITELIOS DE REVESTIMIENTO
EPITELIO PRISMTICO ESTRATIFICADO
Uretra
Tcnica: Azn (Azocarmn- anilina-naranja-cido actico) en cortes de 8 micras de parafina.
EPITELIOS DE REVESTIMIENTO
EPITELIO PSEUDOESTRATIFICADO
Trquea
Tcnica: Hematoxilina-eosina en cortes de 8 micras de parafina.
EPITELIOS DE REVESTIMIENTO
EPITELIO DE TRANSICIN
Vejiga urinaria
Tcnica: Hematoxilina-eosina en cortes de 8 micras de parafina.
EPITELIO GLANDULAR
Pancreas
Tcnica: Hematoxilina-eosina en cortes de 8 micras de parafina.
TEJIDO ADIPOSO
Tejido adiposo
Tcnica: Hematoxilina-eosina en cortes de 8 micras de parafina.
TEJIDO CARTILAGINOSO
CARTLAGO HIALINO
TEJIDO CARTILAGINOSO
CARTLAGO ELSTICO
pericndrio
TEJIDO CARTILAGINOSO
CARTLAGO FIBROSO O FIBROCARTLAGO
TEJIDO SEO
Esponjoso.
Tejido hematopoyetico
TEJIDO NERVIOSO
Microscopa y tcnicas de
estudio a nivel celular
Microscopa
Campo claro
Campo Oscuro
pticos
Contraste de fase
Confocal
Tipos de
microscopios
Fluorescencia
Electrnicos Transmisin
Barrido
Algunos Conceptos
Magnificacin
Resolucin (D)
Microscopio ptico
TORNILLOS DE
REVOLVER
EL PORTAOBJETOS
Microscopio ptico
Eosinofilia
Objetos brillantes
sobre un fondo
oscuro
Observar organismos
vivos sin necesidad
de tincin
Treponema pallidum
sombra
Eritrocitos Humanos
Contraste
de fase
Interferencia
diferencial
Restringe
infrarrojo
GFP
(Green fluorescent protein)
Aequoria victoria
Drpspphila
hela
Bacilos en divisin
Mitocondria 60.000x
Espermatozoides bovinos
Piel humana
Glb. Blanco
Glb. Rojo
Mtodos de estudio
citolgico y citoqumico
Fijacin:
Permite el mantenimiento de la estructura y de la composicin qumica de la
clula.
La eleccin del fijador estar determinada por el propsito perseguido.
M.O: ms usado es el formol al 10% (formaldehido).
M.E: usaremos glutaraldehdo (para protenas)
u osmio (para lpidos).
El fijador penetra en la muestra por difusin crendose un gradiente de
fijacin, que depende de la penetrabilidad del fijador y de su disolucin en los
lquidos celulares.
Uno de los fijadores ms empleados en microscopa electrnica es el
Tetraxido de Osmio, ya que es un fijador que se une bien a las estructuras
lipdicas, permitiendo la fijacin de membranas biolgicas.
Una vez incluida y cortada la muestra se realiza una tincin con colorantes especficos (ej
Hematoxilina-Eosina).
-pueden ser de dos tipos:
cidos: tien componentes acidfilos (o sea bsicos)
Bsicos: tien componentes basfilos (o sea cidos).
La intensidad de la coloracin depender del carcter cido o bsico del medio.
Algunos colorantes bsicos en ciertos componentes celulares, pueden presentar
una coloracin diferente a la del colorante original. Esto se denomina
Metacromasia, y es una tcnica de gran aplicacin en fisicoqumica e
histoqumica.
Por otra parte, los mtodos de disgregacin celular, consisten en una
homogenizacin o destruccin de los lmites celulares y una posterior separacin
de las fracciones subcelulares, atendiendo a su masa, superficie y peso
especfico.
Tcnicas inmunolgicas
Tcnicas inmunolgicas
Inmunohistoqumica
Se corta en secciones muy
finas y se coloca en un
portaobjetos
Trozo de tejido
Anticuerpo 1
Avidina-peroxidasa
Anticuerpo 2
biotinilado
Revelado
Inmunofluorescencia
Rat neurons
N-myc/CD56
Citometra de Flujo
Citometra de Flujo
Clula
Medida
En movimiento
Viabilidad/apoptosis/Proliferacin
Ciclo celular
Cambios en la superficie
Actividad enzimtica
Citometra de Flujo
Marcacin con
anticuerpos
Mezcla de clulas
Citometra de Flujo
Citometra de Flujo
Columna de clulas
Citometra de Flujo
Laser
Detector
Citometra de Flujo
Granularidad
Tamao
La luz que se detecta en la misma
direccin del laser (forward) es
detectada por el canal Forward Scatter
Channel (FSC).
La intensidad de la seal detectada se
relaciona con el tamao, y el indice de
refraccin de las clulas
Citometra de Flujo
Granulocitos
SSC
Linfocitos
Monocitos
RBCs, debris,
Clulas muertas
FSC
Cuentas
Intensidad de fluorescencia
FL2
FL1
Citometra de Flujo
Citometra de Flujo
Qu es la citologa?
Es la rama de la biologa que estudia las clulas en lo que concierne a su estructura,
sus funciones y su importancia en la complejidad de los seres vivos.
Historia.
Siglo XVII: Robert Hooke descubri en un corte fino de
corcho, una estructura muy parecida a la de un panal de abejas
y llam clulas a las celdillas que se formaban (del latn
cellulae=celdillas).
Siglo XIX: Se desarrolla la teora celular.
La investigacin microscpica da lugar al descubrimiento de la
estructura celular interna incluyendo el ncleo, los cromosomas, el
aparato de Golgi y otros orgnulos celulares as como la identificacin de
la relacin existente entre la estructura y la funcin de los orgnulos
celulares.
Siglo XX: la introduccin del microscopio electrnico revel detalles de
las ultraestructuras
celulares.
Se pudo observar
que atendiendo
a su organizacin celular que los seres vivos se
podan clasificar en: acelulares (virus, viroides) y celulares, siendo estos a su vez
clasificados en eucariotas y procariotas.
La clula.
Definicin: desde el punto de vista de los niveles de organizacin de los seres vivos la
clula aparece en un nivel intermedio entre las biomolculas y las agrupaciones
celulares y tejidos, por lo que la clula puede definirse como un conjunto de
molculas altamente organizadas, de cuya interaccin derivan todas las
manifestaciones propias del estado vital: crecer, responder a estmulos y reproducirse
en un medio carente de otras clulas.
As pues, de acuerdo con la definicin de clula y con los principios de la teora
celular, podemos afirmar que todo ser vivo est constituido al menos por una clula
(seres unicelulares), como por ejemplo los organismos procariotas.
Las clulas procariotas son clulas de pequeo tamao (1-10 micras) que carecen de
envoltura nuclear, que separa el genoma del resto de la clula. Tienen una estructura
muy sencilla, careciendo de algunos orgnulos presentes en las clulas eucariotas, y
existen tres tipos de clulas procariotas: bacterias, cianobacterias y micoplasmas.
Otro tipo de clulas son las clulas eucariotas, que constan de envoltura nuclear
(membrana nuclear externa e interna), y de una serie de sistemas membranosos
llamados orgnulos, por lo que tienen un tamao mayor que las clulas procariotas
(5-100 micras). Existen dos tipos de clulas eucariotas. Las clulas animales y las
vegetales. Estas ltimas se diferencian de la animales por poseer unos orgnulos
especficos que son los cloroplastos y una pared celular que mantiene la forma
celular y controla el flujo de agua y sales, evitando la muerte celular por lisis osmtica
(choque osmtico).
Caractersticas de la clula.
Caractersticas estructurales.
Individualidad: Todas las clulas estn rodeadas de una membrana
plasmtica que las separa y comunica con el exterior, que controla los
movimientos celulares y que mantiene el potencial elctrico de la clula.
Algunas clulas como las bacterias y las clulas vegetales poseen una pared
celular que rodea a la membrana plasmtica.
Citoplasma: Medio hidrosalino, que forma la mayor parte del volumen celular y
en el que estn inmersos los orgnulos celulares.
Autogobierno: poseen ADN, el material hereditario organizado en genes y
que contiene las instrucciones para el funcionamiento celular.
ARN: que expresa la informacin contenida en el ADN.
Enzimas y otras protenas: que ponen en funcionamiento la maquinaria
celular.
Una gran variedad de otras biomolculas.
Lesin celular.
Definicin: cualquier perturbacin que altere la homeostasis normal de la clula,
ya sea transitoria o permanente, que se acompae de una disminucin de su
capacidad funcional.
Causas:
Hipoxia: es la falta de oxgeno (principal agente daino). Puede
producirse por disminucin del riego sanguneo (isquemias), falta
de oxgeno en la sangre (por anemias), etc.
Agentes fsicos:
Traumatismos mecnicos (armas blancas).
Variaciones
de
temperatura
(congelaciones,
quemaduras).
Variaciones de presin atmosfrica (en los submarinistas
que no realizan bien la descompresin y se produce
burbujas de nitrgeno en sangre que provocan embolias).
Lesiones por radiaciones (solares, radioactividad
ionizante).
Efectos de corrientes elctricas.
cambios),
presentan
una
Almacenamiento intracelular:
Retencin de sustancias en el interior de la clula, las
cuales pueden ser:
- endgena o exgena
- peligrosas o inocuas.
Sustancias que podemos encontrar:
- Grasas (adipocitos): hgado,
- Glucgeno: hgado, corazn y msculo,
- Colesterol: aterosclerosis y enfermedades
cardiovasculares,
- Protenas anormales (se observa en enfermedades
adquiridas y hereditarias). Estas protenas pueden
ocasionar lo siguiente: Lesin de los hepatocitos o
cirrosis, por causa de deficiencia de alfa-1
antitripsina (inhibidor de proteasas), otro ejemplo es
la enfermedad espongiforme que es causada por
priones (Protenas con la propiedad de
desnaturalizar otras protenas, son patgenas y
transmisibles y se caracterizan por producir
enfermedades que afectan al SNC).
Otras sustancias que podemos encontrar son: Cuerpos de Lewy, como es el caso
de la enfermedad de Parkinson, Ovillos neurofibrilares (protena Tau: protena del
citoesqueleto), en la enfermedad de Alzheimer, Cuerpos de Mallory (filamentos
intermedios), en el caso de lesin por alcohol, como por ejemplo puede aparecer en
el hgado.