TECNICAS DE COLORACIN:

coloracin diferencial
(coloracin Gram) y
coloracin de esporas.

El tamao de la mayora de las clulas

bacterianas es tal que resultan difciles de
ver con el microscopio ptico. La principal
dificultad es la falta de contraste entre la
clula y el medio que lo rodea, y el medio
mas simple de aumentar el contraste entre
la clula y el medio que lo rodea es la
utilizacin de colorantes. Estos pueden
emplearse tambin para localizar
estructuras especificas en la clula o para
distinguir entre tipos diferentes de clulas.

OBJETIVOS:
Realizar la coloracin Gram y
coloracin de esporas y coloracin
diferencial de cepas bacterianas.
Sealar la diferencia entre las
bacteria Gram positivas y Gram
negativas al microscopio ptico.
Describa las caractersticas de la
endospora bacteriana.

CLASIFICACION DE BACTERIAS:
Bacilos: bacterias con forma de barras.
Los ejemplos ms populares son los de las bacterias de E.Coli y la
salmonella

Cocos: bacterias con forma de esferas.

Ejemplo, ElStaphylococcusy el Streptococcus.

Espirilos: bacterias con forma de espirales.

Un claro ejemplo es laTreponema.

ESTRUCTURA DE UNA GRAM NEGATIVA

ESTRUCTURA DE UNA GRAM POSITIVA

 La tincin GRAM es uno de los procesos ms utilizados

a la hora dedeterminar al microscopio ptico la
filogenia de un microorganismo. Siendo una de
las primeras pruebas que se hacen para clasificar a
un posible patgeno. Fue desarrollada en 1884 por el
bacterilogo dansChristian Gram.
El proceso tradicional fue mejorado porHuckeren
1921, hallando la manera de que los reactivos fueran
ms estables y mejorando la calidad diferenciadora
del proceso.
Existe otra modificacin diseada porKopelofen
1923 que permita teir de forma ms eficiente
aquellas bacterias de difcil tincin, sobre todo las
anaerobias.
No obstante la explicacin de porqu se tean de
forma diferente tuvo que esperar hasta 1974 cuando
Gregersen estableci que las diferencias entre las
GRAM+ y las GRAM- eran debidas a la diferente
composicin de la pared celular.

COLORACION GRAM
Fue descubierta por Hans Christian Gram
en 1884.
Esta tcnica puede variar con el tiempo del
cultivo y el PH del medio.
Es una de las tinciones mas utilizadas en
bacteriologa, que clasifica a los cultivos
bacterianos en Gram positivos y Gram
negativos.

TECNICAS DE TINCIN:
1. Tincin Gram.
Es la tincin diferencial mas utilizada en bacteriologa pues
permite separar las bacterias en dos grandes grupos las
Gram (+) y las Gram(-).y requiere 4 soluciones:
. Cristal violeta.- primer colorante es un colorante bsico
que en contacto con las clulas cargadas negativamente,
reacciona con ellas colorendolas.
. Lugol.-solucin mordiente fija las tinciones y aumenta la
afinidad entre el colorante y las clulas. Los mordientes
empleados suelen ser sales metlicas, cidos o bases,
como, por ejemplo, una solucin diluida de yodo.
. Alcohol-acetona.-agente decolorante es un disolvente
orgnico que elimina el exceso de colorante.
. Safranina.-colorante de contraste es un colorante bsico.

2. Tincin cido- alcohol resistencia.

Sirve principalmente para clasificar micobacterias y
actinomicetos que tienen un alto contenido en lpidos y
cidos miclicos y que no pueden ser clasificados por la
tincin gram.se requiere 1 soluciones fucsina-fenol y
acido alcohol.

3. Tincin de esporas.
La Tincin de especifica de esporas requiere dos
colorantes: verde malaquita capas de teir las esporas en
caliente y safranina, colorante de contraste que tie las
formas vegetativas.

4. Tincin negativa.
Es el reverso del procedimiento de tincin usual: las
clulas se dejan sin teir pero se colorea en cambio el
medio que los rodea. Lo que se ve por tanto es el perfil de
las celulas.se requiere de una tinta opaca(tinta china).

MATERIALES Y METODOS:
1. MATERIALES
Mechero Bunsen.
Microscopio
Portaobjetos
Tubos con cultivos con cepas bacterianas
Cubetas para realizar la tincin
Colorantes para las tincin Gram.
Mechero bunsen
Fsforo encendedor
Asa de siembra
Agua destilada
Aceite de inmersin o aceite de cedro
Papel lente
Lpiz marcador de cera o diamante

Reactivos y colorantes
Cristal

violeta,

safranina,

bacteriolgico y alcohol acetona

Agua destilada
Portaobjetos
Asas de kolle

lugol

2.- Procedimiento
COLORACION GRAM.
trabajar con un
cultivo aislado de
un alimento

frontis

fijacin

tincin

Observar en
el
microscopio

 COLORACION DE ESPORAS.
colocar papel filtro
sobre el extendido

Agregar verde
malaquita
Flamear la
muestra

Al 5%
X 5 min

lavar
Aadir
colorante
safranina

X 1 min y
enjuagar

Dejar secar
las laminas
Observar en
el microscopio

De 10x y
100x

S
A
I
C
A
R
G