TINCIONES

COLORANTES
Sustancias de
origenqumico biolgico,
generalmente tintes,
pigmentos, reactivos u
otros compuestos,
empleados en la
coloracin de tejidos
microorganismos para
exmenes microscpicos,
debiendo tener al menos,
un grupo cromforo que
le proporcione la
propiedad de teir.

CLASIFICACIN
SEGN SU ORIGEN
NATURALES: como la
hematoxilina, elcarmn
y laorcena.
SINTETICOSO
ARTIFICIALES: Se obtiene
de la anilina o l alquitrn
de hulla siendo todos
derivados del benceno,
el azul de metileno, la
safranina, azul de anilina,
el naranja G, etc..

CLASIFICACIN
SEGUN SUS PROPIEDADES QUMICAS
La
mayora
de
los
colorantes
empleados en histologa actan como
cidos o bases y tienden a formar
uniones
salinas
con
radicales
ionizables presentes en los tejidos.
colorantes cidos : eosina cargado en
forma
negativa
se
unen
a
componentes
celulares
cargados
positivamente.
Acidofilos afinidad colorantes cidos
Unin grupos aminos de las
protenas
Excelente colorante citoplasmtico

CLASIFICACION
colorantes
bsicos:
ejemplo el azul de
metileno,
colorante
cargado
positivamente, se une
a
componentes
celulares
cargados
negativamente.
Se
denominan
basfilos
Unin al ncleo y
ciertas regiones del
citoplasma

CLASIFICACION
colorantes neutros :son
colorantes en los que la
porcin cida y
la
bsica colorean.
Tien
las
partes
bsicas de una clula
de un color y las
partes cidas de otro.
Tien el ncleo de un
color y el citoplasma
de otro. Ej. el eosinato
de azul de metileno.

CLASIFICACIN
colorantes
indiferentes:tien
aquellas estructuras
o sustancias que los
disuelven
ms
fcilmente que el
lquido en que estn
preparados.
Un
ejemplo
es
el
colorante sudan, un
colorante de lpidos.

TINCIN
Proceso
por
el
cual
las
molculas de un colorante se
absorben a una superficie,
cambiando el color de las
clulas de los M.O para poder
ser
observados
en
el
microscopio.
Las bacterias son casi incoloras
no presentan contraste con el
medio en el que se encuentran
suspendidas.
De acuerdo ala reaccin que
ocurre, existen diferentes tipos
de tincin:

TIPOS DE TINCIONES
Tincin negativa
Tincin simple
Tincin diferencial
Tincin de Gram
Tincin de acido- alcohol resistencia
Tinciones especiales
Tincin de capsulas
Tincin de esporas

TINCIN NEGATIVA
No es una tincin propiamente ya que no utiliza
colorantes con cromoforos.
se tie es el fondo sobre el que estn los
microorganismos apareciendo los microorganismos sin
teir. Se emplea para ver la cpsula deS.
pneumoniae yCryptococcus neoformansen
No hay reaccin entre la estructura celular y los
colorantes
La frotis se realiza con una gota de solucin de
nigrosina o tinta china.
A la luz solo se ve la formacin de una pelcula opaca.
La fijacin se realiza por calor ,se deja secar la
preparacin y se observan los microorganismos
brillantes sobre un fondo oscuro

TINCION NEGATIVA

TINCION SIMPLE
proporciona informacin
acerca de la forma, tamao
y tipo de agrupacin de los
microorganismos.
colorantes derivados de las
anilinas, sales orgnicas
intensamente pigmentadas
que proceden del alquitrn.
Utilizacin de colorantes
bsicos
Cristal violeta, azul de
metileno, safranina, fuchina
bsica y verde malaquita

TINCION SIMPLE
TECNICA
Poner sobre un portaobjetos una gota de
agua y una pequea alcuota de un cultivo
bacteriano con el asa de siembra estril.
Hacer el frotis, formando una pelcula
homognea sobre el portaobjetos con el asa
de siembra. Dejar secar.
Fijar la preparacin, pasando a travs de la
llama del mechero el portaobjetos.
Cubrir con una pelcula de colorante (cristal
violeta o safranina) durante 1 minuto.
Lavar el exceso de colorante con agua.

TINCION SIMPLE
Dejar secar al aire.
Aadir una gota de
aceite de inmersin.
Observar con
objetivo de
inmersin (100 x).

TINCION SIMPLE

Tincin simple con cristal

violeta de Staphylococcus
aureus. Microscopio ptico
de campo claro (100x).

Tincin simple con safranina

de Micrococcus luteus.
Microscopio ptico de campo
claro (100x).

TINCIN DIFERENCIAL
permiten dividir a las
bacterias en grupos, de
acuerdo a su reaccin
con los colorantes utiliza
dos. Entre ellos la tincin
de Gram y la de alcoholcido resistente son las
ms usadas.

TINCIN DIFERENCIAL
Tincin de Gram:
Es la tcnica de uso
ms comn en
microbiologa y
permite dividir las
bacterias en dos
grandes grupos:
bacterias Gram
positivas y Gram
negativas, de
acuerdo a las
propiedades fsicas

TINCIN DIFERENCIAL

TINCIN DIFERENCIAL

Tincin de Gram de
Bacillus cereus (bacilos
gram positivos).
Microscopa de campo
claro (100x).

Tincin de Gram de
Escherichia coli (bacilos gram
negativos). Microscopa de
campo claro (100x

TINCIN DIFERENCIAL
JUSTIFICACION ALA RESPUESTA DE
LOS M.O A ESTA TINCIN
Estructura fsica y composicin
de la pared celular
Bacterias gram positivas gruesa
capa de pptidoglucano permite
retencin colorante
Gram negativa delgada capa de
pptidoglucano junto con la
abundancia de lpidos en la
membrana externa de la pared
celular
aumenta
porosidad
permitiendo perdida del colorante
fundamental (decoloracin)

TINCIN DIFERENCIAL

TINCIN DIFERENCIAL
Caractersticas de la
tincin de gram
Permite la rpida
evaluacin de morfologa y
complejidad bacteriana
Tincion rpida y econmica
En muertas es la primera
prueba que se realiza para
estudio microbiolgico
Forma ,tamao, agrupacin
celular, tipo composicin
pared celular

TINCIN DIFERENCIAL

TINCIN DE ACIDO- ALCOHOL

RESISTENCIA
Coloracin por el mtodo
de Zielhl Neelsen:
se emplea para diferenciar
microorganismos cidoalcohol resistentes,
principalmente el bacilo de
la tuberculosis, de aquellos
que no son cido-alcohol
resistentes.

TINCIN DE ACIDO- ALCOHOL

RESISTENCIA
Tcnica:
- frotis y fijacin de la muestra
-fucsina concentrada de Zielhl por 3-5
minutos, calentando la preparacin con la
llama
del
mechero,
evitando
que
la
preparacin se seque y/o el colorante hierva
- decolorar con alcohol-cido (alcohol de 95
con 3% en volumen de cido clorhdrico
concentrado),
hasta
que
desprenda
el
colorante
- lavar con agua

TINCIN DE ACIDO- ALCOHOL

RESISTENCIA
- azul de metileno
por 2 minutos
- lavar con agua
- lavar con agua y
secar al aire
- examinar al
microscopio con
objetivo de inmer
sin

TINCIN DE ACIDO- ALCOHOL

RESISTENCIA

Bacilos acido alcohol resistentes en

color rojo o fucsia

TINCIN DE ACIDO- ALCOHOL

RESISTENCIA
bacterias cido alcohol resistentes importantes y
patgenas:
Mycobacterium tuberculosis y Mycobacterium leprae,
microorganismos responsables de la tuberculosis y la
lepra respectivamente.
Estas bacterias pertenecen al Phyllum Actinobacteria,
un grupo grande y complejo de bacterias gram
positivas, caracterizadas por contener en sus paredes
celulares un alto contenido lipdico, ceras con una
gran diversidad de cidos miclicos.
Moleculas de 60 y 90 tomos de carbono
La presencia de estos lpidos en la cara externa de la
pared permite resistencia de qumicos en su entorno.

TINCIN DE ACIDO- ALCOHOL

RESISTENCIA
CARACTERSTICAS
Permite distinguir M.O cuya coloracin
resiste la accin de alcoholes y cidos
suaves
Identificacin de bacterias patgenas
como Mycobacterium tuberculosis y
Mycobacterium leprae
Bacteriascidoalcoholresistentes: color
rojo.
Bacteriasnocidoalcoholresistentes:
color azul

TINCIONES ESPECIALES
Sirven para observar
estructuras dentro o
en el exterior de la
clula bacteriana,
como tambin
algunos
microorganismos que
dadas sus
caractersticas
especiales no se
tien
adecuadamente con
tcnicas rutinarias.

TINCIONES ESPECIALES
Tincin de Esporas
Esta tincin permite poner de manifiesto la
endospora bacteriana, una forma de resistencia
producida por algunos gneros de bacterias gram
positivas.
Endoesporas viven interior de los M.O
Clostridium, Bacillus, Sporosarcina
La morfologa y disposicin de la endospora en el
interior del microorganismos tiene valor taxonmico
En el caso de Clostridium tetani produce una espora
terminal mas grande que el dimetro de la bacteria
( espora de formante) dando lugar a una espora
conocida como palillo de tambor

TINCIONES ESPECIALES

TINCIONES ESPECIALES
EL MTODO EMPLEADO SCHAEFFER
FULTON
se tie en caliente con el colorante
verde malaquita, un colorante
soluble en agua.
El calor modifica la permeabilidad
de la endospora y permite la
entrada del colorante a travs de
las capas externas de la endospora.
lavado con abundante agua
produce la decoloracin de las
formas vegetativas as como de los
extremos de las bacterias
esporuladas, que se tien por
ltimo con un colorante de
contraste, la safranina.

TINCIONES ESPECIALES
Tcnica
- frotis y fijacin de la muestra
- cubrir frotis con papel filtro
- teir con Verde Malaquita a
emisin de vapores por 10 a 15
min.
- enfriar y lavar con agua
- aplicar Safranina por 30 segs a 1
min.
- lavar con agua y secar al aire
- observar al microscopio con
objetivo de inmersin

TINCIONES ESPECIALES

Tincin de esporas de Bacillus

subtilis. La flecha indica esta
estructura en verde. Microscopa
de campo claro (100x

TINCIONES ESPECIALES
Tincin de capsulas
La cpsula es una estructura que rodea
externamente la pared de algunos microorganismos.
protege a la clula del ambiente externo,
proporcionando numerosas ventajas a los
microorganismos que son capaces de sintetizarla.
las bacterias patgenas la cpsula permite la
adhesin al hospedador o protege de la fagocitosis.
incrementa las posibilidades de sobrevivir en
condiciones de desecacin en bacterias que
colonizan ambientes naturales.
previenen el ataque de algunos virus
proporcionan importantes ventajas al facilitar la
adhesin a superficies slidas.

TINCIONES ESPECIALES
El procedimiento
para la
realizacin de la
tincin de
cpsulas es el
mismo que se ha
explicado para la
tincin
negativa.
Las cpsulas
aparecen
rodeando a las

TINCIONES ESPECIALES
Capsulas se alteran con el calor por eso
no se utiliza en la tcnica de tincin
La capsula no tiene afinidad con los
colorantes ordinarios
Capsulas se aprecian como un halo
transparente alrededor de la celula.

GRACIAS