BAUTISTA
ESCUELA PROFESIONAL DE MEDICINA
HUMANA
Gentica
Microbiana e
Ingeniera gentica
DOCENTE DE MESA: GARDINI
T U E S TA W I L F R E D O E R W I N
CURSO: MICROBIOLOGA MDICA
CICLO: IV CICLO
TURNO: MA
ALUMNOS:
LARA GUTIERREZ, Itzel
Mishell
MENDIETA GARAY, Carolina
PIMENTEL GONZALEZ, Luis
Angel
RAMOS HIDALGO, Nataly
RENTERIA MARMOL, Luis
TEMA 1:
ORGANIZACIN DE LOS GENES, ADN PROCARIOTE
INTRODUCCION
El cromosoma bacteriano, es equivalente a una molcula
de ADN bicatenario, circular y cerrada, que debe estar
organizada de manera que permita la expresin de toda
su informacin.
ADN
BACTERIA
NO
Estructura del
CROMOSOMA BACTERIANO
La primera visualizacin del
nucleoide bacteriano teido
revel una estructura muy
condensada
de
los
cromosomas.
En la clula bacteriana
hay una sola molcula
de ADN que forma el
cromosoma, esta
molcula tiene un peso
molecular de 3x109 y es
un crculo cerrado.
La estructura
molecular de este
cromosoma fue
determinado por
Watson y Crick.
Se compone de una
doble hlice, formada a
su vez por dos cadenas
complementarias de
polinucletidos unidos
por uniones de
SUPERESTRUCTURA DEL
ADN SUPERHELICOIDAL
Los cromosomas bacterianos y plsmidos funcionan
como molculas circulares, esta circularidad le da la
funcin biolgica de todas las molculas de ADN, pues
ayuda a establecer una sper estructura esencial en el
ADN, denominada superenrrollada o superhelicoidal.
Puede suceder de 2 maneras:
La molcula helicoidal
doble puede enrollarse
alrededor de una
estructura cilndrica para
formar una espiral
En la clula bacteriana el
superentollamiento ocurre por un
giro superhelicoidal orientado hacia
la derecha.
En organismos eucariticos, el
carcter superhelicoidal del ADN es
mantenido por los nucleosomas,
mientras que en las bacterias
dependen de enzimas, las
topoisomerasas, controlan la
densidad superhelicoidal de las
molculas de ADN alternado el
nmero de uniones. Sin embargo,
las bacterias contienen una
topoisomerasa, conocida como ADN
girasa, que es capaz de reducir el
nmero de uniones y en
consecuencia cataliza la formacin
de superhelices negativas.
Existen 2 tipos de
isomerasas, la tipo I
producen roturas en
cadenas nicas mientras
que la de tipo II
producen rotura en las
dos cadenas.
CICLO CELULAR Y LA
DUPLICACION CROMOSOMICA
Las clulas como E. coli, sintetizan ADN
durante todo el ciclo de divisin. Esto significa
que otras funciones del cromosoma como la
transcripcin y recombinacin gentica, deben
ser ajustadas por un proceso de duplicacin.
En la duplicacin se demostr que los
cromosomas hijos son rplicas de la molcula
de ADN madre, es decir compuestos por una
cadena madre completa y una cadena
sintetizada de novo de ADN, ocurren en forma
bidireccional.
El cromosoma bacteriano y los plsmidos son
un replicn consideradas como las unidades
de duplicacin definidas por un origen y una
terminacin.
Duplicacin del
cromosoma bacteriano
La duplicacin cromosmica puede separarse en tres fases: iniciacin,
elongacin y terminacin.
Para la polimerasas II
no se descrito ningn
papel definido en la
duplicacin.
Regulacin de la duplicacin
cromosmica
La regulacin fisiolgicamente significativa de la velocidad de la duplicacin cromosmica
en las bacterias es equivalente a la modulacin de la frecuencia con la cual se inicia este
proceso.
Probablemente la regulacin de la duplicacin cromosmica este relacionada con aquellas
protenas que se sabe que estn mecnicamente involucradas en el proceso de iniciacin.
Algunas de estas protenas han sido verificadas estudiando la iniciacin in vitro en
plsmidos en los cuales se ha introducido el origen de la duplicacin de la regin oriC del
cromosoma de E.coli, entre estas protenas estn el producto del gen dnaA, ARN
polimerasa, ADN girasa y protena dnaB y dnaC.
TRANSCRIPCION
La transcripcin es el mediante el
cual se transfiere la informacin
contenida en la secuencia del ADN
hacia la secuencia de protena
utilizando diversos ARN como
intermediarios. Durante la
transcripcin gentica, las
secuencias de ADN son copiadas a
ARN mediante una enzima llamada
ARN polimerasa que sintetiza un ARN
mensajero que mantiene la
informacin de la secuencia del ADN.
De esta manera, la transcripcin del
ADN tambin podra llamarse
sntesis del ARN mensajero.
PROCESO DE DECODIFICACIN
PRIMARIA
En la sntesis de protenas se usan
los tres tipos de ARN codificado en
el ADN de las bacterias. El ARN
ribosmico (ARNr), ARN de
transferencia (ARNt) estn
involucrados en la sntesis de
protenas decodificadas en el ARN
mensajero (ARNm).
Una gran porcin del cromosoma
est dedicada a la codificacin de
una variedad igualmente amplia
de molculas de ARNm u mucho
menos para ARNr y ARNt. A pesar
de esto el ARNr y el ARNt abarcar
respectivamente el 85% y el 5%
del ARN celular total.
TRADUCCION
En la traduccin, el ARN mensajero se decodifica para producir un
polipptido especfico de acuerdo con las reglas especificadas por el
cdigo gentico. Es el proceso que convierte una secuencia de ARNm en
una cadena de aminocidos para formar una protena.
Iniciacin, es la
orientacin del
aminoacil-ARNt en
forma tal que el
cdigo de tripletes
del ARNm sea ledo
en el marco
apropiado.
Terminacin, este
proceso da como
resultado la
detencin del
crecimiento de la
cadena polipeptdica
as como la
liberacin del ARNt
desde el extremo
carboxilo de la
cadena polipeptidica.
TEMA 2:
TRANSFERENCIA
DEL MATERIAL
GENTICO EN
BACTERIAS
REPRODUCCIN
BACTERIANA
El mecanismo de reproduccin
habitual en bacterias es la
biparticin.
Mediante
este
mecanismo se obtienen dos
clulas hijas, con idntica
informacin en el ADN circular,
entre s y respecto a la clula
madre,
y
de
contenido
citoplsmico celular similar. Las
clulas hijas son clones de la
progenitora. Por este sistema
de reproduccin se puede
originar una colonia de clulas
con
material
idntico;
sin
embargo, esto no ocurre debido
al alto ndice de mutaciones
que se producen en las
bacterias.
La biparticin se produce
cuando
la
clula
ha
aumentado su tamao y
ha duplicado su ADN. El
ADN bacteriano se une a
un
mesosoma,
que
separa el citoplasma en
dos y reparte cada copia
del ADN duplicado a cada
lado. Al final del proceso
el mesosoma se ha unido
al resto de la membrana
plasmtica y se han
formado dos clulas hijas
genticamente iguales.
Reproduccin parasexual
En ocasiones, la clula bacteriana tiene la oportunidad de
intercambiar informacin gentica por procesos de
recombinacin. Estos procesos son la transformacin, la
transduccin y la conjugacin. En estos procesos no
hay formacin de ningn tipo de gametos, por lo que no
es reproduccin sexual.
Transformacin
Transduccin
Cuando una clula es atacada por un virus bacterifago,
la bacteria genera nuevas copias del ADN vrico. En la
fase de ensamblaje se pueden introducir fragmentos de
ADN bacteriano en la cpsida del virus. Los nuevos virus
ensamblados infectarn nuevas clulas. Mediante este
mecanismo, una clula podr recibir ADN de otra bacteria
e incorporar nueva informacin.
Conjugacin
Este proceso se lleva a
cabo si la clula presenta el
plsmido F, que contiene
la
informacin
gentica
para formar pili, puentes
que
sirven
de
unin
citoplsmica
entre
dos
bacterias. La clula que
presenta el plsmido se
denomina F+; la clula que
no lo contiene se llama F-.
La bacteria F+ (donadora
de informacin) se une a
una bacteria F- (receptora)
mediante uno de sus pili.
A travs de l introduce
una hebra del plsmido F,
de forma que la bacteria
F- se convierte en bacteria
F+.En
ocasiones
el
plsmido se introduce en
el
anillo
del
ADN
bacteriano. Entonces, la
bacteria
donadora
se
denomina
Hfr
(High
frequency
of
recombination). De esta
forma la bacteria Hfr
puede donar a otras
clulas cualquier gen de
su ADN.
IV CICLO MA
SEMINARIO: GENTICA
MICROBIANA E INGENIERA
GENTICA
TEMA 3: Mutacin bacteriana y consecuencias
I.- MUTACIN:
DEFINICIN
Una mutacin se define como cualquier modificacin de la
secuencia de bases del ADN.
MUTACIN
PUNTUAL:
SUSTITUCIN
ADICIN
PRDIDA O
DELECIN
IV.- CAUSAS:
En la naturaleza se produce un gran nmero de mutaciones de forma
espontnea; sin embarga las mutaciones pueden tambin ser
consecuencias de:
Ejm
:
CLASES:
MUTACIN NO
LETAL:
CONSECUENCIAS
TEMA 4:
EXPRESIN GNICA
EN PROCARIOTAS
Sistemas Constitutivos
y Adaptativos
a) Sistema Constitutivo:
Sistemas Inducibles y
represibles
a) Sistema Inducible
Es cuando el sustrato en donde actuar la enzima provoca la
sntesis de la misma, llevando como nombre Inductor.
En estos sistemas corresponden a procesos catablicos o
degradacin.
b) Sistema Represible
Es cuando el producto de la sntesis enzimtica impide la
produccin de la enzima, llevando el nombre de corepresor.
Estos sistemas corresponden a procesos de anabolismo o
sntesis.
Elementos de control
Molculas difusibles
Genes Estructurales
Gen regulador
Promotor
Operador
Protenas
reguladoras
Efectores
Inductores
Codifican
para
polipptidos
Codifica para
protena
reguladora
OPERON LACTOSA
OPERON LACTOSA
(control negativo)
OPERON LACTOSA
(control positivo)
En los sistemas de control negativo existe una protena que
impide la transcripcin de los genes estructurales, en los
sistemas de control positivo existe una protena activadora que
estimula la transcripcin de los genes. En principio existen cuatro
tipos de sistemas posibles de regulacin de la expresin gnica:
Tipo 1: Inducible, control negativo (opern lactosa y opern
galactosa)
Tipo 2: Inducible, control positivo (opern arabinosa y opern
maltosa)
Tipo 3: Represible, control negativo (opern triptfano y opern
histidina)
Tipo 4: Represible, control positivo (no se han descrito)
EL OPERN
TRIPTFANO
Elemento
s del
Opern
Triptfan
o
Secuencia de
bases de la regin
atenuadora y
comienzo de la
secuencia del gen
trpE
TEMA 5:
INGENIERA
GENTICA
BACTERIANA Y SU
APLICACIN EN
LA MEDICINA
Estastcnicasfundamentalmenteson:
LA TECNOLOGA DEL ADN RECOMBINANTE:Consisteenaislarymanipularun
fragmentodeADNdeunorganismopara"recombinarlo"coneldeotroorganismo.
GeneralmentesetrataelADNconunaendonucleasaderestriccinqueoriginaen
estecasouncorteescalonadoenlasdoshebrasdoblesdeADN.Losextremos
escalonadosdeambashebrasdeADNsoncomplementarios,unacondicinque
tienenquetenersisequierenunir.LosdosADNsascortadossemezclan,se
calientanysenfransuavemente.Susextremoscohesivosseaparearndando
lugaraunnuevoADNrecombinado,conunionesnocovalentes.Lasuniones
covalentesseformanaadiendoADNligasayunafuenteenergticaparaformarlos
enlaces.
ElADNrecombinadoseinsertaenunADNvectorqueactecomovehculopara
introducirloenunaclulahospedadoraqueloreplique,losvectoreso
transportadoresmsutilizadossonlosplsmidosyelADNdelfagolambda.
SECUENCIACIN DE ADN
:esunconjuntodemtodosytcnicas
bioqumicascuyafinalidadesladeterminacindelordende
losnucletidos(A,C,GyT)enunoligonucleotidodeADN.LasecuenciadeADN
constituyelainformacingenticaheredabledelncleocelular,losplsmidos,
lamitocondriaycloroplastos(Enplantas)queformanlabasedelosprogramas
dedesarrollodelosseresvivos.Aspues,determinarlasecuenciadeADNes
tilenelestudiodelainvestigacinbsicadelosprocesosbiolgicos
fundamentales,ascomoencamposaplicados,comolainvestigacinforense.
EldesarrollodelasecuenciacindelADNhaaceleradosignificativamentela
investigacinylosdescubrimientosenbiologa.Lastcnicasactualespermiten
realizarestasecuenciacinagranvelocidad,locualhasidodegranimportancia
paraproyectosdesecuenciacinagranescalacomoelProyectoGenoma
Humano.Otrosproyectosrelacionados,enocasionesfrutodelacolaboracinde
cientficosaescalamundial,hanestablecidolasecuenciacompletadeADNde
muchosgenomasdeanimales,plantasymicroorganismos.
Tcnica de la PCR:Tambinexistenmtodosparaamplificarunadeterminada
secuenciaofragmentodeADN.Lamsconocidaeslatcnicadela reaccin en
cadena de la polimerasa (PCR).Asseconsiguemultiplicarundeterminadofragmento
deADNmillonesdevecesparapodertenerunacantidadsuficienteparaestudiarlo.Sin
estatcnicaseranimposibleslosestudiosdeADNparaelreconocimientodela
paternidadoencasodedelito,pueslacantidaddeADNpresenteenlasclulasestan
pequea,delordendepicogramos,quesenecesitaraunagrancantidaddematerial
celularparatenerunacantidadapreciabledeADN.
Lareaccinesunprocesocclico:
LamolculadeADNquevaacopiarsesecalientaparaquesedesnaturaliceyse
separelasdoshebras.
CadaunadelashebrasescopiadaporlaADN-polimerasa.
Lascadenasrecinformadassonseparadasdenuevoporelcalorycomienzaotro
nuevociclodecopias.Estosciclosserepitenhastaqueseobtieneelnmerodecopias
deseado.
USOS EN LA MEDICINA
Procedimientos de clonado y expresin de
genes:
Eldesarrollodelavacuna contra
la hepatitis B representa el
primer xito de las vacunas
recombinantes.
Producidaenunalevaduraqueha
sido transformada previamente
con un vector recombinante que
contiene el gen del antgeno de
superficiedelvirus.
Expresinenbacteriasdegenespropiosdepatgenoscontralosquesedeseavacunar,
porejemplovirus,parsitosuotrasbacterias.
Consisteenelclonadodegenesquecodificanparaantgenosdesuperficiedelvirusodel
parsito contra el que se desea vacunar. Estos antgenos sern expresados en la cepa
recombinante y purificados a partir del cultivo de la misma cepa, usndose luego como
inmungenos.
OJO. Estos mtodos pueden usarse tambin para la produccin de vacunasvivas que
son administradas con virus o bacterias vivas que han sido manipuladas genticamente
paraperdersuvirulencia,)peroquemantienenintactassuspropiedadesinmunognicas.
Biotecnologaaplicadaaldiagnsticoclnico
Produccin de antgenos en bacterias:
Para realizar pruebas diagnsticas que detecten anticuerpos especficos
contra antgenos microbianos en el suero de pacientes. Interesa clonar en
una bacteria de rpido crecimiento como E. coli, el gen que codifica para un
antgeno determinado del microorganismo contra el cual se desea detectar
la respuesta inmune desarrollada por el paciente.
Asi se producir el antgeno proteico en cantidad suficiente como para
capturar los anticuerpos.
Tecnica para la prueba diagnstica: enzimoinmunoensayo
inmunofluorescencia, aglutinacin de partculas de ltex u otras.
(ELISA),
GRACIAS