UNIVERSIDAD

AUTNOMA DE
SINALOA
F. C. Q. B.

Microscopa
Biologa Celular

Conjunto de tcnicas y mtodos destinados a producir

imgenes visibles de estructuras o detalles de objetos
de estudio que por su pequeez esta fuera del rango de
resolucin del ojo humano.

Microscopa

En esta tcnica aparte del microscopio, se emplean

tinciones para ver las caractersticas de los tejidos.

Clula vegetal con amiloplastos

teidos.

Una de las herramientas mas importantes que se utilizan

para estudiar las estructuras celulares es el microscopio.
Es un instrumento que permite observar objetos que
son
demasiado pequeos para ser vistos a simple
vista.

Microscopio

CARACTERSTICAS QUE DETERMINAN LA CLARIDAD:

Aumento: La diferencia entre el tamao de la imagen
vista y el tamao real del objeto (los mejores
microscopios pticos logran ampliar un objeto mas de
1000 veces).
Poder de resolucin: Capacidad de un sistema ptico
para separar detalles. Depende esencialmente del
objetivo ya que el ocular no puede mejorar detalles de
la imagen, pues su funcin es agrandar el tamao de
la imagen que es proyectada por el objetivo.

Microscopio
ptico

MICROSCOPIO PTICO
El tipo ms comn y el primero que se invent es
el microscopio ptico. Se trata de un instrumento
que contiene dos o ms lentes que permiten
obtener una imagen aumentada del objeto y que
funciona por refraccin; se usa la luz como objeto
de iluminacin, para que pase a travs del tejido y
esta haga ampliar la imagen.
Como resultado
imagen al revs
Con el microscopio ptico se observa:

Tejidos
Clulas
Ncleo y nuclolo
Grnulos citoplasmticos
Fibras de la matriz extracelular

Estereoscopio:

Se
utiliza
para
observar objetos relativamente grandes,
de
aproximadamente
0.05
a
20
milmetros.

Microscopio
ptico

Microscopio compuesto:
se utiliza mayormente para
estudiar objetos o secciones
finas, entre aproximadamente
0.2 a 100 micrmetros .

Microscopio
Electrnico

MICROSCOPIOS ELECTRNICOS
Usan un haz de electrones, en vez de luz,
y sus lentes son imanes en vez de lentes
de cristal. Estos microscopios proveen un
aumento de hasta 200,000 veces el
tamao del organismo (200,000x) y por lo
tanto se utilizan para observar organismos
o partculas sumamente pequeas, como
los virus, o detalles celulares que de otra
manera no podramos ver.
Utilizado para observar detalles mas
finos
es decir, la ultra estructura de la
clula.
Mientras que el microscopio ptico
tiene
un
poder
de
resolucin
aproximadamente de
500 veces que la
del
ojo
humano,
el
microscopio
electrnico lo multiplica mas de
10,000
veces

El microscopio electrnico de
transmisin (MET) en principio es

Microscopio
Electrnico
de
Transmisin
(MET)

similar a un microscopio ptico invertido,

aunque emplea un haz de electrones en
lugar de un haz de luz y bobinas
magnticas para focalizar el haz en lugar
de lentes de cristal.
La muestra debe ser muy delgada por
lo que se hacen cortes extremadamente
finos (50-100nm de grosor) con una
cuchilla de diamante.

El MET proporciona un aumento til

hasta de un milln de veces y con

Clula Procario

El contraste se produce tiendo la

muestra
con colorantes de metales
pesados que
absorben o dispersan
localmente los electrones y los eliminan
del haz cuando atraviesan la muestra.

Microscopio
Electrnico
de Barrido
(MEB)

En el microscopio electrnico de
barrido
(MEB)
la
muestra,
cubierta con una pelcula muy
delgada de metal pesado (oro o
algn otro), es barrida por un haz
de electrones dirigido a un foco por
bobinas electromagnticas que, en
los
microscopios
electrnicos,
actan como lentes
Cuando el haz de electrones golpea
varios puntos de la superficie de la
muestra, se emiten electrones
secundarios cuya intensidad vara
dependiendo del contorno de la
superficie, los patrones de emisin
registrados de estos proporcionan
una imagen tridimensional de la
superficie.
Este crea imgenes sorprendentes
de objetos tridimensionales con
gran profundidad de foco y una

Glbulo rojo

Preparacin
de
muestras

Permitir que las estructuras de los

materiales se revelen con suficiente
contraste
de
modo
que
las
caractersticas
de
inters
sean
descritas, grabadas y caracterizadas en
detalles visibles a una escala menor
que la agudeza visual del ojo humano.

Criterios
en las
tcnicas de
obtencin.

Asegurar que la muestra a observar es

representativa del material,
objeto u
organismo de procedencia que se desea
estudiar.
Hacer que las caractersticas de inters sean
accesibles al sistema
de
imagen del
microscopio.
Cuando sea necesario, aumentar el contraste
entre los elementos estructurales de los
materiales y el fondo.

Criterios en las tcnicas de

muestras
Proporcionar las condiciones suficientes
para la estabilidad de las muestras.

Preparacin
de
muestras

Proteger las muestras de decaimiento,

degradacin, corrosin o contaminacin
dentro de la escala de tiempo de la
observacin.
Ajustar la muestra a los requisitos pticos
del sistema de imagen del microscopio
para proveer de las condiciones ptimas
de contraste y resolucin.

Las muestras biolgicas pueden ser

examinadas en muchos estados como
combinacin de los siguientes:

Tcnicas de
preparacin
para la luz
transmitida

Vivas o muertas
Frescas o preservadas/fijadas
Enteras o en secciones
Teidas o sin teir
Hidratadas o deshidratadas
Opacas o aclaradas

Las muestras que

son
organismos
completos o partes
de
organismos
vivientes.

Montajes
temporales
de
muestras
vivas
enteras

Las
muestras
examinadas
al
microscopio
mientras
estn
vivas suelen ser
Prestar
atencin a
pequeas.
la provisin de
suficiente oxgeno,
al mantenimiento
de
la
concentracin
sustancias, a lade
eliminacin del CO2 y otros residuos, al control
otras
de la temperatura, a la provisin de luz apropiada, a la
eliminacin de organismos extraos o depredadores.
Montadas, normalmente, en el
habitualmente o sern cultivadas.

medio

en

que

se

dan

Procedimiento:

Observaci
n de
muestras
no vivas

Fijacin: Un proceso que mata las clulas, inactiva

sus enzimas, y precipita y entrecruza las molculas
que estn en solucin o suspensin dentro de las
clulas.
Deshidratacin e inclusin: A las clulas les falta
rigidez y se les proporciona artificialmente con el
soporte
adecuado
antes
del
corte,
convencionalmente por inclusin.
Corte: Puede ser posible cortar secciones a mano,
sin embargo, la mayora de las secciones se cortan
con la ayuda de un micrtomo.

Tincin: La tincin explota la afinidad qumica entre el

tinte y las sustancias presentes en la muestra.
El uso sucesivo o combinado de varios tintes, cada uno con
su afinidad especfica, da una coloracin tricolor o ms
compleja a los diversos componentes tisulares.

Observaci
n de
muestras
no vivas

Se han desarrollado tcnicas de tincin para:

Observar mejor el aspecto morfolgico de los m.o.
Identificar partes estructurales de las clulas de los
m.o.
Ayudar a identificar y/o diferenciar organismos
similares

Tincin Simple
Es la coloracin de las bacterias o de otros organismos
por aplicacin de una solucin de colorante a una pelcula
fijada o frotis.

Tincin

El frotis se inunda con la solucin del colorante durante

un periodo de tiempo especfico, despus del cual se lava
la solucin con agua y se seca la preparacin con papel
filtro

Ejemplos de tintes
La hematoxilina es un tinte bsico (catinico) que se une
electrostticamente a sitios cidos (aninicos) de los cidos
nucleicos (DNA y RNA).

Tincin

La eosina es un tinte cido (aninico) que se une a las

protenas, las cuales se vuelven catinicas cuando la
tincin se lleva a cabo a pH 4-5.

En
el
microscopio,
las
estructuras ricas en cidos
nucleicos, como los ncleos
celulares, tienen el color
azul de la hematoxilina,
mientras que las regiones
ricas
en
protenas
del
citoplasma
muestran
la
tincin roja de la eosina.

Tincin Diferencial
Son los procedimientos de tincin que ponen de
manifiesto diferencias entre clulas microbianas o entre
partes de una clula microbiana, estas implican la
exposicin de las clulas a ms de una solucin de
colorante o de reactivo.

Tincin

Tincin Gram
Los grupos de bacterias pueden diferenciarse
mediante el procedimiento de tincin de Gram,
desarrollado a finales de la dcada de 1880 por el
bacterilogo dans Hans Christian Gram

Tincin

Gram
Positivas
Retienen
una compleja
tincin de yodo, y bajo el
microscopio
aparecen
color prpura

Gram
Negativas
No retienen
el complejo y
se muestran color rosa

En este procedimiento la extensin de clulas previamente fijada se somete a las siguientes

soluciones en el orden que se indica:

GRAM
REACTIVOS

1. Cristal
violeta
(CV)
2. Solucin
de Yodo(I)

Tincin

3. Alcohol
acetona

4.
Safra
nina

POSITIVAS

NEGATIVAS

Las clulas se tien de VIOLETA

Se forma un complejo CV-I dentro de las clulas.

Continan VIOLETAS
Las paredes celulares se
deshidratan,
los
poros
merman la permeabilidad de
la pared celular disminuye, el
complejo
CV-I
queda
atrapado.

Se extraen lpidos de las

paredes
celulares,
los
poros se agrandan y el
complejo
CV-I
es
eliminado de la clula; las
clulas quedan incoloras

Las clulas no se afectan;

Las clulas toman este
Permanecen
VIOLETA color, y se tien de ROJO
(rosado)
(purpura)
Se tien de manera distinta debido a
diferencias estructurales en sus paredes
celulares:
+: peptidoglicanos

Montaje
El paso final en la preparacin de una muestra es montarla
en una lmina de vidrio, generalmente de 25 mm x 76 mm,
el portaobjetos.

Montaje

Una vez colocada la muestra en el portaobjetos y con el

montante, se cubre con una lmina, disco o placa de vidrio
fino, el cubreobjetos.