Cintica Enzimtica

Cintica Enzimtica

Es el estudio de las velocidades de las reacciones

catalizadas por enzimas.
Una enzima acta slo en condiciones suaves a un pH
alrededor de 7, a temperatura de 37C y a una presin
de una atmsfera.
El incremento que ejercen sobre la velocidad es
enorme, va de 106 a 1012 veces con respecto a la
reaccin en ausencia del catalizador.
Las enzimas poseen un alto grado de especificidad;
solamente catalizan la reaccin en la que participa un
sustrato o un grupo de sustratos con ciertas
caractersticas qumicas y geomtricas comunes.
En este tipo de reacciones hay aumento de la velocidad
cuando la concentracin del sustrato aumenta.

Orden de Reaccin.

Orden cero: Se refiere a aquellas en las que la velocidad de

reaccin es independiente de la concentracin de reactantes.

Primer orden: es donde la velocidad de la reaccin es proporcional

a la concentracin de solamente de uno de los reactantes elevada a
la primera potencia.

Segundo orden: son aquellas en donde la velocidad de reaccin es

proporcional a la concentracin de un reactivo elevada al cuadrado
o a los dos reactantes.

Para una reaccin catalizada por una enzima se tienen diferentes

rdenes de reaccin, dependiendo de la concentracin del
sustrato.

Teora Cintica de Michaelis-Menten

En 1919 estos investigadores estudiaron la
cintica de la actividad enzimtica de la
invertasa en la reaccin:
Sacarosa
fructosa + glucosa
Midieron velocidad inicial en dos diferentes
experimentos:

V inicial en relacin a la concentracin de

enzima.
{S} = cte

1. Manteniendo

constante la
concentracin
inicial del sustrato
y variando la
concentracin de
la enzima.
Encontrando que
la velocidad es
directamente
proporcional a la
concentracin de
la enzima.

Vo

Vo {E}

Concentracin enzima

V inicial en relacin a la concentracin de sustrato

2. Manteniendo constante la
concentracin de la
enzima y variando la
concentracin del
sustrato.
Se observa una transicin
de una fase dependiente
del sustrato a una fase
independiente.
Esta conclusin es la base
de su teora
Enzimas exhiben el efecto
de saturacin.

Orden cero

Primer orden

Modelo propuesto por Michaelis Menten:

ES

ES

La enzima E se combina con S forma el complejo ES

(vel k1), este tiene dos destinos posibles, puede
disociarse hasta E y S (vel k-1) o, puede formar un
producto P (vel k+2). Este paso es ms lento y limita
la reaccin global.

La velocidad total de la reaccin est dada

por v=k2{ES}
A bajas {S} la mayor {E} estar libre y por tanto la
velocidad total est dada por v=k {S} y el equilibrio
tender a la formacin de ES.
La velocidad mxima de la reaccin se da cuando toda la
enzima est como ES y la {E} es extremadamente
pequea. La enzima se ha saturado de modo que el
aumento en la {S} no tiene efecto, v=k{S}0
Cuando el complejo ES se descompone queda la enzima
libre para catalizar nuevamente.
La saturacin es una caracterstica distintiva de cada
enzima y equivale a la meseta observada en la grfica.

Ecuacin de Michaelis-Menten
Ecuacin que describe la velocidad de una
reaccin catalizada por una enzima. Es una
relacin cuantitativa entre la {S} y la velocidad
inicial mxima, relacionada a travs de una
constante.
:

Vmx = Vmx{S}
2
Km + {S}

Vmx (Km+{S})=Vmx{S}
2
Km+{S}=2{S}; Km={S}

Constante de Michaelis-Menten
El valor de Km para una enzima depende del
sustrato particular y tambin de las condiciones
ambientales tales como la temperatura y la fuerza
inica.
La constante de Michaelis Km tiene dos
significados:
La Km es la concentracin de sustrato a la cual la
mitad de los centros activos estn repletos. Una
vez conocida Km, la fraccin de centros llenos, a
cualquier concentracin puede calcularse.
Km es la medida del complejo enzima-sustrato
(ES): una Km alta indica una ligazn dbil, una Km
baja indica ligadura fuerte.

Grfica de los dobles recprocos.

Ecuacin de
Lineweaver-Burk

Permite una determinacin ms

precisa Vmx.
Distingue entre ciertos tipos de
mecanismos de reaccin.
Sirve para analizar la inhibicin
Enzimtica.

Inhibicin Enzimtica

Un inhibidor es una molcula que interacta con la

enzima y disminuye su actividad cataltica.
La inhibicin puede ser:

Irreversible: Se produce un complejo {EI} no

disociable.

Irreversible
Reversible

E+I
EI se da a una velocidad definida por k
Ej: Enz-SH + ICH2CO NH2
Enz-SCH2CONH2 + HI

Reversible:

Competitiva,
no competitiva
acompetitiva.

Inhibicin Competitiva

La caracterstica ms importante es que el sustrato y el

inhibidor son mutuamente excluyentes (no hay complejo
IES).
Inhibidor con estructura similar o diferente a la del sustrato.
(Induce cambio conformacional en la enzima). Disminuye la
facilidad de acceso del sustrato original .
El Inhibidor se combina reversiblemente con la enzima.
La concentracin del complejo ES ser menor que sin
inhibidor.
s
La vmax no cambia en tanto
que Km aumenta.

Inhibicin Competitiva

Inhibicin no Competitiva

Se combina con la enzima en un lugar que no es el cataltico.

En este tipo de inhibicin adems de formarse el complejo
binario enzima-inhibidor (EI) y enzima-sustrato (ES), se forma
el complejo ternario entre enzima, inhibidor y sustrato (EIS).
El inhibidor no competitivo tiene una estructura diferente a la
del sustrato y concentraciones saturantes de este ltimo no
revierte la inhibicin.
La Km permanece igual y disminuye la Vmx

Inhibicin no competitiva

Inhibicin acompetitiva

En este tipo de inhibicin, el inhibidor no

interacta con la enzima libre, pero si con el
complejo ES.
Se encuentra con frecuencia en las reacciones en
las que participan varios sustratos; el inhibidor
crea su sitio en la enzima que participa en el
complejo ES.
El inhibidor acompetitivo no afecta la pendiente de
las rectas pero aumenta la interseccin en las
ordenadas (disminuyendo la vel max) y aumenta la
interseccin en las abscisas (disminuyendo la
S
Km).
S
I

Inhibicin acompetitiva

-Dibuja las grficas de Lineweaver-Burk correspondientes.

-Cules son los valores de Vmax y Km en ausencia del inhibidor?
-Cules son los valores de Vmax y Km en presencia del inhibidor?
-De qu tipo de inhibidor
se trata?
Tabla I .- Datos
de la enzima
Concentracin
Sustrato (M)

Velocidad
de (M / min.)
Sin inhibidor

Con
inhibidor

10.4

2.1

14.5

2.9

10

22.5

4.5

30

33.8

6.8

90

40.5

8.1

Grfica de Michaelis-Menten